
Жидкостная цитология
.pdf
Справочник заведующего КДЛ / № 5 май 2009
а) |
б) |
в) |
Рис. 6. Цитосистема на основе цитокамеры с прямыми перпендикулярными каналами: a) цитосистема в сборе; б) варианты цитокамер с прямым каналом; в) фильтр-вставки для различных вариантов цитокамер
и низкоклеточные суспензии). Жидкая проба вносится в цитокамеру, закрепленную на слайде, уже после ее установки в центрифугу. Возможно использование фильтрподложки для осушения рабочей зоны. Недостатком данных систем является потеря клеточного материала в элементах конструкции и соответственно снижение эффективности диагностики. Такие камеры также позволяют получить не более 2 рабочих зон на одном слайде.
Цитокамеры с прямыми каналами (рис. 6) центрифугируют на роторах со свободными съемными горизонтальными цитоподвесками. Одна или две 1-, 2-, 3-, 4-канальные цитокамеры могут быть за-
|
креплены на слайд при помощи специально- |
|
|
|
го основания и винтового или пружинного |
|
фиксатора. Во время центрифугирования |
|
подвеска с цитокамерой отклоняется на 90° |
|
и происходит осаждение клеток на слайд. |
|
Технология может быть использована для |
а) |
любых вариантов цитологического исследо- |
вания широкого спектра биоматериалов. |
|
|
Дополнительным преимуществом является |
|
возможность проведения в такой системе |
|
различных преаналитических операций с |
|
клеточными элементами на слайде (дополни- |
|
тельная отмывка, удаление эритроцитов, |
|
фиксация, последовательное окрашивание, |
б) |
спиртовая проводка, изолированное введение |
разных иммунохимических меток в каждый |
|
|
канал). Ограничением подобной системы |
|
|
Рис. 7. Цитосистема на основе |
выступает возможность пассивного осажде- |
цитокамер с каналом, расположен- |
ния клеток в цитокамере до ее установки |
ным под углом к слайду: а) цитосис- |
в центрифугу, что может нарушить соотноше- |
тема в сборе, б) виды цитокамер |
ние клеточных субпопуляций в готовом |
с угловым расположением канала |
препарате. |
39

Оснащение современной лаборатории
Цитокамеры с каналом, расположенным под углом к поверхности слайда (рис. 7), предназначены для роторов со свободными съемными горизонтальными подвесками. Цитокамеры такого типа удобны для получения слайд-препаратов из суспензий фиксированных в объеме и нефиксированных клеток высокой концентрации при малом объеме пробы (препараты тонкоигольной биопсии, ликвор, отпечатки и мазки, фракции клеток, клеточные культуры). Преимуществом их использования является возможность проведения дополнительных операций с пробой прямо в центрифуге, ограничением – одноканальность технологии.
Современный слайд-препарат
для цитологических исследований
Традиционным слайд-препаратом является предметное стекло для микроскопии с расположенными на его поверхности клетками. Оно обладает хорошими оптическими свойствами и устойчиво к воздействию агрессивных химических веществ, которые часто используются при окрашивании и фиксации клеток для цитологического исследования. В силу положительного заряда стекла происходит оптимальное для микроскопии расположение на нем клеточных элементов, имеющих отрицательный заряд мембраны.
Однако стеклянные изделия небезопасны для персонала. Чтобы предотвратить возможные травмы кожи и потенциальное инфицирование персонала, предлагаются варианты предметных стекол со специальной закругленной шлифовкой края или пластиковым футляром в нерабочей части поверхности.
Для нанесения фиксированных клеток используют слайд-препараты из стекла со специальным покрытием, которое усиливает адгезию клеток (типа полилизина). Слайды для автоматизированных исследований часто имеют специальную структуру с выделенной рабочей зоной.
В настоящее время разрабатываются пластиковые одноразовые аналоги предметных и покровных стекол, которые уже нашли применение в новых цитологических технологиях, основанных на использовании люминесцентных и флуоресцентных меток и маркеров. По оптическим характеристикам пластиковые слайды не уступают стеклянным, одновременно они безопаснее в использовании и при утилизации.
При производстве пластиковых слайдов, в отличие от стеклянных, возможно создавать новые конструкции и конфигурации для разных методов исследования. Поверхность пластиковых слайдов может быть модифицирована путем специальной химической обработки для усиления адгезии клеток и даже селективного связывания отдельных клеточных субпопуляций. Создаются также новые оригинальные системы для специальных цитологических методов с несколькими ячейками для исследования, слайды в виде ванночек или планшетов для исследований живых клеток или в виде съемной панели сосуда для культивирования клеток. Пластиковые системы также могут быть сделаны с применением непрозрачных или окрашенных элементов для флуоресцентных или люминесцентных методов детекции, а также с включением стеклянных элементов.
(Продолжение следует)
40