3.4.Методы оценки т – и б-клеточного звена системы иммунитета

Для выявления и подсчета Т-и В-лимфоцитов наиболее точными

являются методы, состоящие в выявлении поверхностных маркеров —

антигенов системы CD, которые были рассмотрены в разделе 13.1.

К этим антигенам биопромышленность готовит стандартные моноклональные

антитела и наборы реактивов, позволяющие в имму-

нолюминесцентных и цитотоксических тестах (см. далее) выявить Ти

В-лимфоциты, их субпопуляции, другие клетки иммунной системы.

Так, маркером Т-лимфоцитов служит антиген CD3, В-лимфоцитов —

CD22, хелперных Т-лимфоцитов — CD4, цитотоксических лимфоцитов

— CD8, естественных киллеров — CD 16, CD56.

Т- и В лимфоциты выявляют также по их способности фиксировать

на своей поверхности эритроциты барана или мыши, образуя

видимые под микроскопом структуры, именуемые розетками

(см. рис. 13.4). В-лимфоциты, обладающие рецепторами для иммуноглобулина

G и комплемента могут быть выявлены также по способности

формировать розетки с эритроцитами, нагруженными

этими белками. Содержание в крови здорового взрослого человека

Т-клеток — 4 0-70%, В-лимфоцитов — 10-30% общего числа лимфоцитов.

Некоторые лимфоциты (около 5%) не имеют маркеров Тили

В-клеток. Это нулевые лимфоциты, утратившие рецепторы. Их

число возрастает при некоторых заболеваниях.

Кроме того, к тестам 1-го уровня относится определение концентрации

сывороточных иммуноглобулинов IgM, IgG и IgA. Для

этого используются антисыворотки к тяжелым цепям иммуноглобулинов

разных классов, реакция преципитации (тест иммунодиффузии

— см. 19.2) или нефелометрия и турбидометрия, выявляющие

взаимодействие иммуноглобулина с антителами по светорассеянию

или мутности. Уровень сывороточных иммуноглобулинов отражает

функциональное состояние В-системы иммунитета.

Для оценки факторов неспецифической защиты организма определяют

фагоцитарную активность лейкоцитов крови. О фагоцитарной

активности судят по способности клеток к фагоцитозу нейтральных

частиц латекса, эритроцитов или микробных клеток. При этом

вычисляют процент фагоцитирующих клеток (фагоцитарное число) и

среднее число частиц поглощенных одним фагоцитом (фагоцитарный

индекс).

Тесты 2-го уровня позволяют провести более тщательный анализ

для уточнения характера дефекта, выявленного на предыдущем этапе

с помощью ориентировочных тестов. К ним относится определение

субпопуляций Т-лимфоцитов (CD4+ и CD8+), их соотношений, оценка

их функциональной активности, супрессорного потенциала, анализ

цитокинов и их рецепторов. Функциональная активность лимфоцитов

может быть оценена по количеству бластных форм, нарастающих

после активации клеток.

Потенциальную способность лимфоцитов к активации оценивают

после стимуляции митогенами, фитогемагглютином и др., культивируемых

вне организма клеток. Количество бластных форм может

быть определено при микроскопии. Более точен и чувствителен радиометрический

метод, оценивающий интенсивность включения радиоактивных

предшественников (тимидина) в ДНК культивируемых

клеток. Для оценки иммунной защиты слизистых используется определение

секреторных иммуноглобулинов IgA.

Уровень активности фагоцитов оценивают по их способности к

ферментативной обработке поглощенных клеток. Наиболее распространен

так называемый НСТ-тест, основанный на выявлении способности

клеток восстанавливать бесцветный реактив нитросиний тетразоль

в краситель, окрашивающий активную клетку в синий цвет.