3. Другие морфологические группы бактерий

Кроме палочко- и кокковидных, встречаются и другие морфологические варианты бактерий, в частности извитые (спирохеты), изогнутые (спириллы), нитевидные (высшие актинобактерии), бактерии, не имеющие клеточной стенки (микоплазмы).

Сапрофитные спириллы и спирохеты – грамотрицательные бактерии, нормальные обитатели воды, некоторые входят в состав нормальной микробиоты тела человека. Патогенные спирохеты вызывают у человека сифилис, спириллы – гастриты, язву желудка и двенадцатиперстной кишки.

Высшие актинобактерии – грамположительные бактерии, сапрофиты, входят в состав нормальной микробиоты почвы, многие являются продуцентами антибиотиков.

Микоплазмы ­– очень мелкие бактерии, не имеют клеточной стенки, в связи с чем форма их клетки непостоянна. Некоторые микоплазмы входят в состав нормобиоты ротовой полости и кишечника человека, отдельные виды могут вызывать заболевания человека (пневмонии, поражения мочеполовой системы). Среди микоплазм есть и фитопатогенные представители.

Работа, выполняемая студентами

1. Приготовление мазков из культур Bacillus subtilis, Micrococcus luteus.

Приготовление мазка начинают с обезжиривания чистого предметного стекла; для этого рабочую поверхность стекла натирают мылом, которое затем удаляют чистой тканью. На обезжиренное стекло помещают небольшую каплю воды и в нее вносят с помощью бактериологической петли, соблюдая правила асептики, исследуемый микробный материал, который распределяют по поверхности площадью около 2 см² тонким слоем. После этого мазок полностью высушивают на воздухе и фиксируют в пламени спиртовки в течение нескольких секунд (мазком вверх).

2. Окраска мазков бактерий по методу Грама (в модификации Синева).

а) На заранее подготовленный фиксированный мазок накладывают фильтровальную бумагу, пропитанную генцианвиолетом, и заливают небольшим количеством воды на 1–2 мин; при этом краситель быстро растворяется в воде, диффундирует в клетки и окрашивает мазок;

б) генцианвиолетовую бумажку удаляют, наносят раствор Люголя, и, не промывая препарата водой, опускают 2–3 раза в стаканчик с 96% этанолом, после чего препарат тщательно промывают водой для удаления спирта;

в) окрашивают мазок водным фуксином – 1 мин;

г) промывают препарат водой и высушивают фильтровальной бумагой.

Грамположительные микроорганизмы окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, грамотрицательные – в светло-красный (розовый).

3. Микроскопия мазков в иммерсионной системе.

При микроскопии препаратов с иммерсионным объективом необходимо:

а) на окрашенный и высушенный мазок нанести 1–2 капли иммерсионного масла и поместить препарат на предметный столик микроскопа;

б) повернуть револьвер и установить иммерсионный объектив (х90 или х100);

в) осторожно опустить иммерсионный объектив вниз до погружения фронтальной линзы в каплю масла;

г) установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта (работать с осторожностью!) и провести окончательную фокусировку препарата микрометрическим винтом, который рекомендуется вращать не более чем в пределах половины оборота;

д) рассмотреть объекты в поле зрения микроскопа (при необходимости перемещая препарат) и занести результат в протокол занятия;

е) после окончания работы тщательно (с помощью предназначенной для этого ткани) вытереть масло с иммерсионного объектива, перевести револьвер на малый объектив (х8), отключить осветитель, закрыть микроскоп.

Студенты микроскопируют (после окраски по методу Грама) мазки бактерий различной микроморфологии (Bacillus subtilis, Micrococcus luteus) и зарисовывают просмотренные препараты.

4. Просмотр демонстрации: мазки Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Рseudomonas aeruginosa, окрашенные по методу Грама.

5. Оформление протокола занятия и уборка рабочего места.

6. Защита лабораторной работы (с подписью преподавателя).