ПРАВИЛА ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
◦Иммунологические методы исследования - диагностические методы исследования, основанные на специфическом взаимодействии антигенов и антител.
◦Широко используются для лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней, определения групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, видовой принадлежности белка, распознавания аллергии и аутоиммунных болезней, беременности, гормональных нарушений, а также в научно-исследовательской работе.
◦Они включают серологические исследования, или серологические реакции, к которым относят обычно реакции прямого воздействия антигенов и антител сыворотки крови in vitro.
Для исследования иммунной системы организма используют венозную кровь (плазму, сыворотку, форменные элементы: эритроциты, лейкоциты, лимфоциты), капиллярную кровь, а также биологические жидкости: мочу, слюну, желчь, молоко.
Венозную кровь забирает медсестра, капиллярную кровь — лаборант или врач (определение группы крови, резус-фактора).
Кровь у обследуемых берут утром, натощак путем пункции локтевой вены сухой острой короткой иглой с широким просветом в чистую сухую пробирку в количестве 5–6 мл. У новорожденных можно брать пуповинную кровь. У грудных детей кровь обычно берут из лобной, височной или яремной вены.
◦Если для исследований используют плазму или форменные элементы крови, кровь забирают в мерные пробирки или пробирки, имеющие метку, до которой должна быть набрана кровь. В пробирки предварительно вносят антикоагулянт. Для забора крови желательно использовать пластиковую посуду. Стеклянные пробирки часто несут на поверхности следы детергентов, а также обладают способностью обмениваться ионами с кровью
◦Удобно использовать коммерческие вакуумные пробирки, заполненные точным объемом и определенной, соответствующей концентрацией необходимого в конкретном случае антикоагулянта. Наиболее часто используют трикалиевую или динатриевую соли ЭДТА, тринатрийцитрат и гепарин. Несоответствие концентрации антикоагулянта объему взятой крови, недостаточно тщательное смешивание могут привести к значительным ошибкам.
◦Плазму для определения иммуноглобулинов можно получить из капиллярной крови, взятой с помощью туберкулинового шприца из безымянного или указательного пальца. Предварительно шприц смачивают раствором гепарина (200 ед/мл) и высушивают в термостате при 37°C в течение 24 часа. Шприцы, обработанные гепарином и высушенные, могут храниться в течение двух недель. Кровь из пальца берут в объеме 0,5 мл, переносят в центрифужную пробирку и несколько раз встряхивают. Затем кровь центрифугируют при 1000 об/мин. 5 минут. Плазму отсасывают в пластиковые пробирки.
◦Полученная кровь должна быть своевременно доставлена в лабораторию. От забора до анализа кровь может стоять при комнатной температуре 2 часа, сыворотка — 48 часов в холодильнике. Согласно Приказу МЗ и МР РФ №160 от 16.08.94 г. «О мерах по совершенствованию профилактики и лечению ВИЧ- инфекции в РФ», полученный материал не рекомендуется хранить более 12 часов при комнатной температуре и более 1 суток в холодильнике (t = 4–8°С). Наступающий гемолиз может повлиять на результаты анализа. Лучше всего сразу после взятия крови отобрать из нее сыворотку или плазму. Плазму можно хранить при –20°С более длительное время.
◦Для определения групп крови по системе АВО используют капиллярную и венозную кровь. Взятие капиллярной крови проводит лаборант непосредственно перед определением. 0,05 мл крови сухой стеклянной палочкой наносят рядом с каждой каплей стандартной сыворотки. Кровь можно брать из вены, пальца или из мочки уха. Исследуемую кровь берут в сухую несиликонированную пробирку. Для отделения сыворотки кровь центрифугируют и оставляют стоять на 20–30 мин. Из пробирки, содержащей исследуемую кровь, пипеткой извлекают сыворотку. Пробирку со свернувшейся кровью энергично встряхивают для отделения эритроцитов.