книги из ГПНТБ / Методики постановки опытов и исследований по молочному хозяйству [сборник]

рожно переливают в термостойкие пробирки с делением 5 мл. Процесс повторяют дважды.

Для определения общего содержания фосфолипидов в тер­ мостойкие пробирки помещают хлороформенный раствор ли­ пидного экстракта, соответствующий 2 —3 мкг липоидного фос­ фора. Далее растворитель упаривают досуха на водяной бане при 86—90°. К сухому остатку приливают по 0,5 мл смеси, со­ стоящей из равных объемных частей концентрированных хлор­ ной и серной кислот.

Пробирки нагревают при 180—120° до полной минерализа­ ции содержимого. После охлаждения приливают 4 мл 1%-ного молибдата аммония и 0,2 мл реактива Фиске-Суббароу.

После тщательного встряхивания пробирки помещают в ки­ пящую водяную баню на 10 мин., затем охлаждают в течение 20 мин. при комнатной температуре и содержимое их доводят дистиллированной водой до 5 мл. Окрашенные растворы фотометрируют на спектрофотометре при длине волны 836 ммк в прямоугольных кюветах, сравнивая с контролем.

Исходный раствор для построения калибровочной кривой содержит 1000 мкг Р в 1 л (4,3868 г КН2Р 0 4 растворяют в 1 л дистиллированной воды). Из него готовят серию рабочих рас­ творов в мерных колбах на 1 л (табл. 13).

Для сжигания берут растворы, объемы которых не превы­ шают 0,2 мл. Далее все операции выполняют, как при опреде­ лении липидного Р. На основе калибровочной кривой (рис. 8 ) составляют табл. 14, по которой находят количество Р, соответ­ ствующее экстинкции. Содержание фосфолипидов находят пу­

71

тем умножения количества липидного фосфора на 25 (извест­ но, что в молекуле фосфолипидов 4% фосфора, т. е. 25 часть ее).

Рис. 8. Калибровочная кривая для определе­ ния фосфора

Реактивы и приборы: спектрофотометр, роторный вакуум­ ный выпариватель, микроразмельчитель тканей РТ-2, камеры хроматографические, силикагель марки КСК, сернокислый кальций, стеклянные пластинки 18x20 см, хлороформ, мета­ нол, этиловый спирт, гексан и аммиак 25%.

Р а с ч е т н ы е фо р му л ы . Вычисление содержания ли­ пидов в молоке производится по формуле

где X — количество липидов в молоке, %; а — количество липидов, г; в — навеска молока, г.

Процентное содержание фосфолипидов по отношению к общим липидам вычисляется по формуле

Р ■ 25 • 100

72

где Х \ — содержание фосфолипидов по отношению к об­ щим липидам, %; Р — количество фосфора, мкг; а — навеска

Вычисление процентного содержания фосфолипидов в мо­ локе производится по формуле

где Х2— содержание фосфолипидов в молоке, .%; К — про­ цент жира молока; Р — количество фосфора, мкг; а — навеска липидов, мкг; 25 — постоянный коэффициент.

Приме р . По полученным данным, в 20 г цельного молока содержалось 0,73 г общих липидов. Для определения общего

73

VII. ИССЛЕДОВАНИЕ БЕЛКОВ МОЛОКА

Н. В. БАРАБАНЩИКОВ

Определение азотистых веществ в молоке

Общие азотистые вещества. Органические вещества моло­ ка при нагревании с крепкой серной кислотой окисляются до углекислоты и воды, а их азот переводится в сернокислый аммоний. Азот сернокислого аммония можно перевести в ам­ миак, добавляя крепкую щелочь. Аммиак улавливают раство­ ром H 2 S O 4 , находящимся в приемной колбе. По разности ме­ жду 0,01 н. раствором H 2 S 0 4, взятой в приемную колбу, и пошедшего на титрование 0,01 н. раствора N a O H определяют количество азота. При этом исходят из того, что 1 мл 0,01 н. раствора H 2 S O 4 , связанной аммиаком, эквивалентен 0,14 мг азота.

От средней пробы молока пипеткой берут 5 мл в колбу Кьельдаля для сжигания. В колбу вливают 20 мл концентри­ рованной серной кислоты (смывая капли молока со стенок колбы) и добавляют около 10—20 мг селена. Затем в горлыш­ ко колбы вставляют стеклянную лрушу и в вытяжном шкафу вначале на слабом огне, через асбестовую сетку, а затем на более сильном кипятят до полного осветления.

Остывший прозрачный раствор переносят в мерную колбу на 250 мл. Колбу, в которой проводили сжигание, ополаски­ вают 5— 6 раз водой по 20—25 мл, сливая ее в мерную колбу. Сначала раствор в колбе перемешивают, а после охлаждения доводят объем водой до метки, колбу закрывают резиновой пробкой и еще раз тщательно перемешивают.

Аммиак отгоняют на аппарате (рис. 9). Перед работой при­ бор прогревают в течение 15—20 мин. паром. Затем в прием­ ную колбу на 100 мл (7) отмеривают 10 мл 0,01 н. H2S0 4

75

н3—5 капель индикатора Ташира, конец трубки холодильника

(5)погружают в приемную колбу.

Рис. 9. Аппарат для отгонки аммиака:

1 — парообразователь; 2 — трубка отвода пара в момент перемены проб; 3 — сборник отработанной жидкости; 4 — воронка (с краном — а) для заливки исследуемого рас­ твора; 5 — холодильник; 6 — сосуд для отгонки; 7 — приемная колба; б, в — зажимы

Пипеткой отмеривают 10 мл исследуемого раствора из мер­ ной колбы и вливают его через воронку (4) аппарата в сосуд для отгонки (б). Споласкивают воронку 2 раза небольшими порциями воды, а затем через нее же вливают 8 мл 40% NaOH. Кран (а) приемной воронки закрывают каждый раз после очередного внесения. В сосуде для отгонки общий объем жидкости должен составлять не более 50 мл.

Пропускают пар через сосуд для отгонки аммиака в тече­ ние 10 мин. Окончание отгонки проверяют нанесением капли дистиллята из трубки холодильника на красную лакмусовую бумажку.

После окончания отгонки конец трубки холодильника вы­ нимают из кислоты, опустив приемную колбу, и продолжают отгонку еще 2—3 мин. Затем конец трубки споласкивают во­ дой и прекращают подачу пара, зажав резиновую трубку от парообразователя зажимом (б), а зажим (в) открывают для выхода пара.

76

Оставшуюся свободную 0,01 н. H2SO4 оттитровывают 0,01 н. раствором NaOH до появления зеленого окрашивания вместо розового.

Для внесения поправки на чистоту реактивов производят холостое определение — вместо молока берут 5 мл воды. Все последующие операции выполняются по описанному выше спо­ собу. Количество азота рассчитывают по формуле

250 • 100

N = [ № - 6 ^ 2) • 0,14—п] • 10- в - 1 0 0 0 ’

где а — 0,01 н. раствор H2S 0 4 в приемной колбе (мл); б — 0,01 н. раствор NaOH, пошедшей на титрование (мл); К\ и К.2 — поправки к титру кислоты и щелочи; 0,14 — количество азота (мг), эквивалентное 1 мл 0 ,0 1 н. H2SO4; п — поправка на реактивы, найденная по холостому определению; 250 — разведение после сжигания молока; 100 — пересчет на проценты; 1 0 — количество раствора, взятого для отгонки (мл); в — на­

1,028, что соответствует 5,14 г. В приемной клобе 10 мл 0,01 н. раствора H2S0 4 с поправкой к титру 1,011.

На титрование содержимого приемной колбы пошло 2,19 мл 0,1 н. раствора NaOH с поправкой к титру 1,034. Поправка на реактивы (холостая проба) 0 ,0 2 .

зеин, альбумин и глобулин) путем осаждения их трихлоруксусной кислотой. В фильтрат-е после сжигания с концентриро­ ванной серной кислотой, используя полумикрометод, опреде­ ляют количество небелкового азота.

В мерную колбу на 100 мл отмеривают пипеткой 20 мл мо­ лока (что соответствует при средней его плотности 10,3 г)

идоводят до метки 18%-ным раствором трихлоруксусной кис­ лоты. Содержимое колбы перемешивают, выдерживают 20 мин.

ифильтруют (фильтрат должен быть прозрачным).

Впоследующем 40 мл фильтрата отмеривают пипеткой в колбу Кьельдаля на 150 мл, прибавляют 0,5 мл концентриро­

77

ванной серной кислоты, перемешивают и выпаривают через асбестовую сетку до небольшого объема. Затем колбу охлаж­ дают, добавляют 10— 2 0 мг селена, 10 мл серной кислоты и про­ водят сжигание, как описано выше. В дальнейшем содержимое переносят в мерную колбу на 50 мл, ополаскивая колбу Кьельдаля 5— 6 ip аз порциями воды. Содержимое мерной колбы пе­

В данном случае обозначения те же, что и в формуле для расчета общего азота. Кроме того, 50—разведение молока; 40 — объем фильтрата, взятого для сжигания; 50—разведение содержимого колбы после сжигания.

Пр и ме р . Взято для анализа 10 мл молока при плотности

жимого приемной колбы израсходовано 6,78 мл 0,01 н. рас­ твора NaOH с поправкой к титру 1,034. Поправка на реак­ тивы 0 ,0 2 .

NH=[(10 -1,011—6,78 -1,034) • 0,14—0,02] X

Среднее содержание небелкового азота в молоке 0 ,0 2 1 %. Колебания составляют 0,017 — 0,044%.

Азот белковых веществ. Содержание белкового азота в мо­ локе Ыб определяется по разности между общим количеством азота N и небелкового азота NH,

Пр и ме р . Если общего азота в молоке 0,524%. а небелко­ вого 0,0251%, то N6 =0,524—0,0251=0,499%.

Содержание белкового азота в молоке в среднем 0,50% с колебаниями от 0,43 до 0,60%.

Азот неказеиновый. В этот азот входит небелковый азот молока, а также азот альбумина и глобулина N|.

Из молока осаждают казеин с помощью уксусной кислоты. Прозрачный фильтрат сжигают с концентрированной серной кислотой.

78

Вмерную колбу на 100 мл Пипеткой отмеривают 10 мл мо­ лока (10,3 г), разбавляют его 50 мл дистиллированной воды (t° 40—42°) и приливают 1,5 мл 10%-ного раствора уксусной кислоты. Содержимое перемешивают и оставляют на 20 мин. Затем в колбу прибавляют 4,5 мл 0,25 н. раствора уксуснокис­ лого натрия и до метки доводят водой. Содержимое колбы еще раз перемешивают и спустя час фильтруют (фильтрат дол­ жен быть прозрачным).

Вколбу Кьельдаля отмеривают пипеткой 25 мл фильтрата

иприбавляют 0,5 мл концентрированной серной кислоты. Со­ держимое колбы выпаривают через асбестовую сетку до не­ большого объема. После охлаждения в колбу вносят 10 мл концентрированной H2S 04. В последующем сжигание и разбайление ведут так же, как и для небелкового азота, а отгон­ ку — как для общего азота.

правкой к титру 1,011. На титрование содержимого колбы из­

Азот казеина. Количество азота казеина N k определяют по разности между общим количеством азота в молоке N и коли­ чеством неказеинового азота N1.

Д1„ ='N—N1.

Пр име р . Если общего азота в молоке содержится 0,524%,

а неказеинового — 0,124, то Мк =0,524—0,124 = 0,400%.

79