Zhuk_ON_i_dr_Sanitarnaia_i meditsinskaia mikrobiologiia

Санитарная и медицинская микробиология

туляремии лиц.

11. Bordetella

Коклюш и паракоклюш - детские инфекционные заболевания дыхательных путей, проявляющиеся приступами судорожного кашля. Клинически почти идентичные, но вызываются разными видами Bordetella'. В. pertussis и В. parapertussis.

Материалом для исследования служат мокрота и кровь.

Диагноз коклюша и паракоклюша в первые дни болезни подтверждается выделением чистых культур и идентификацией их с помощью диагностических агглютинирующих сывороток, а спустя две недели от начала заболевания, когда

в мокротеÐепобордетеллызиторийне обнаруживаются, - постановкой РА и РСК.

Бактериологический метод. При наличии кашля мокрота засевается на селективные для бордетелл картофельно-гл цериновый кровяной или

казеиново-угольный (КУА) агары, разл тые в чашки Петри.

Метод "кашлевых пластинок". П его применении открытую чашку

Петри со средой, орошенной для п давления сопутствующей микрофлоры

пенициллином, подносят на неск лько секунд ко рту кашляющего ребенка. При

отсутствии кашля среды засевают амп ном, которым отбирают отделяемое слизистой оболочкиÏолесÃÓзадне-гло очного пространства. Тампон вводят через рот,

реже - через носовые ходы. Выращивают бордетелл в термостате, желательно в эксикаторе. Рост коклюшных бордетелл начинается через 2-5 суток. Типичные колонии бактерий коклюша напоминают маленькие капельки ртути, имеют вязкую сметан брачную консистенцию. Мало чем отличаются от них колонии паракоклюшных бактерий, которые, как правило, растут быстрее и несколько больше в размерах. Из колоний д лают мазки. При наличии в них грамотрицат льных, овоидных м ких палочек ставят реакцию агглютинации

на ст кле с коклюшной паракок юшной сыворотками, разведенными 1:10. Затем выд ляют чистую ку ьтуру и идентифицируют ее по ряду признаков.

12. Bacillus

Сибирская язва - острая зоонозная инфекция, проявляющаяся

образованием кожного карбункула или возникновением тяжелой геморрагической пневмонии, диареи и сепсиса. Вызывается Bacillus anthracis. В зависимости от клинической формы сибирской язвы исследуют содержимое сибиреязвенного карбункула, мокроту, испражнения, а при подозрении на сепсис - кровь.

Диагноз сибирской язвы подтверждается обнаружением в материале больных грамположительных стрептобаиилл, окруженных капсулой, при обработке флюоресцирующей сывороткой - ободком свечения и положительной реакцией на антраксин. Для определения зараженности сырья (кожи, меха) и мяса животных ставится реакция термокольцепреципитации Асколи, позволяющая выявить в них даже следы сибиреязвенного антигена.

Бактериоскопическое исследование. Для обнаружения сибиреязвенной

Полесский государственный университет Страница 61

Санитарная и медицинская микробиология

бациллы мазки делают из содержимого карбункула, мокроты и крови. После фиксации их окрашивают по Граму, Пешкову и Книге для того, чтобы выявить не только грамположительные цепи бактерий, но и споры, а главное, капсулы как характерный морфологический признак возбудителя сибирской язвы, который позволяет дифференцировать возбудителя сибирской язвы от бескапсульных сибиреязвенноподобных сапрофитов (В. megaterium, В. cereusvar. mycoides и В. subtilis), широко обсеменяклцих внешнюю среду.

Выделяя чистую культуру сибиреязвенных бацилл, на каждом этапе ее идентификации проводят все ту же дифференциацию с сапрофитическими формами бацилл.

У больных берут рвотные массы, п омывные воды желудка, кровь, мочу, испражнения, при наличии - остатки пищевых продуктов, напитки, воду и пр.

Практически исследование п в дится в целях выявления ботулотоксина

и его типа (серовара) с помощью реакции нейтрализации (PH) на животных.

содержащемуся в немÏолесÃт ксину. Не заболеваютÓте, которые получили прогретый материал его смесь, нейтрализованную антитоксинами.

Реакция нейтрализации оксина. При подозрении на ботулизм жидкие выделения больного, вытяжку з различных продуктов смешивают с равными объемами антитоксическ х сывороток сероваров А, В, С, D, Е. Смеси

выдерживают в термостате при 30-35 °С в течение 30 мин, затем каждую из них по 1,5 мл внутрибрюшинно вводят двум белым мышам. Морских свинок заражают 6 мл смеси п дкожно. Контрольным животным в том же количестве вводят нативный и пр гретый при 100 °С в течение 30 мин материал, разв д нный на оловину 0,85 % изотонич ским раствором натрия хлорида.

Ботулизм развивается у животных, зараженных нативным нагретым

мат риалом го смесью нег мо огичными сыворотками по отношению к

У мышей ботулизм проявляется общей слабостью, парезом конечностей, западением мышц живота, появлением "осиной тапии". У морских свинок наблюдается резкое расслабление мускулатуры, обнаруживается симптом "спины": положенные на спину, они не могут перевернуться и принять обычное положение.

Столбняк - острое инфекционное заболевание, протекающее с поражением двигательных центров и сопровождающееся приступами судорожных сокращений мышц. Вызывается Clostridium tetani, которые по

Санитарная и медицинская микробиология

экзотоксина, так как возбудитель столбняка инвазивностью не обладает. Анаэробная инфекция - это раневая инфекция, сопровождающаяся

тяжелой интоксикацией, массивным отеком и омертвением поврежденных мышечной и соединительной тканей (гангрена), часто сплошь пронизанных пузырьками газа (в прошлом "газовая гангрена").

Анаэробная инфекция вызывается одним или ассоциацией двух-трех видов токсигенных спорообразующих анаэробных бактерий рода Clostridium, расщепляющих углеводы (гликоген) с газообразованием (С. perfringens, С. novyi, С. septicum) или способностью расщеплять ткани (С. histolyticum). Вследствие этого она является полиэтиологическим, или полимикробным, заболеванием. Развитие истинных возбудителей в ране потенцируют близкие

им по морфологии и культуральным свойствам, но нетоксигенные анаэробные сапрофитическиеÐепозитоклостридии, стафилококкирий, стрептококки, эшерихии, протей

и другие гноеродные бактерииаэробы, понижающие окислительновосстановительный потенциал и вызывающ е некроз поврежденной ткани.

Симптоматика анаэробной инфекц настолько специфична, что

правильный диагноз ставится на основании клинической картины заболевания.

В затруднительных случаях исследуют гной, а после туалета раны - сукровицу,

отечную жидкость из пузырей, кусочки некротизированных мышц, прилегающих к здоровойÏолесÃÓкани. Обнаружение в мазках грамположительных

крупных палочек ( зредка - ни ей) с эндоспорами, обрубленными или закругленными концами, бесс стемно разбросанных, попарно расположенных друг к другу под углом, в длину или короткими цепочками, может

свидетельств вать наличии в ране ток игенных клостридий.

14. Mycobacterium

Туб ркул - хроническое инф кционное заболевание, при котором

поражаются л гкие и другие внутренние органы, твердая мозговая оболочка, костный аппарат, кожа, лимф уз ы образованием специфических гранулем (бугорки). Чаще всего туберкулез у людей вызывается двумя видами патогенных микобактерий: Mycobacterium tuberculosis и Mycobacterium bovis.

Материалом для микробиологического исследования в зависимости от локализации процесса служат мокрота, гной, моча, спинномозговая жидкость,

испражнения.

Клинический диагноз туберкулеза подтверждается обнаружением в мазках из патологических материалов больного, окрашенных по ЦилюНельсену, ярко-красных (рубиновых) палочек. У детей раннего возраста большое диагностическое значение имеет положительная аллергическая реакция Манту. Культуру микобактерий от больных туберкулезом выделяют главным образом для определения лекарственной резистентности и разработки индивидуальной схемы этиотропного лечения.

Лепра (проказа) - хроническое инфекционное заболевание с образованием на коже узлов (лепроматозная форма) или пятен с измененной чувствительностью и пигментацией (туберкулоидная форма). Вызывается лепра

Полесский государственный университет Страница 63

Санитарная и медицинская микробиология

Mycobacterium leprae.

Основной метод микробиологической диагностики лепры - бактериоскопия соскобов слизистой оболочки носа и кожных узлов после предварительного среза над ними эпидермиса. Мазки окрашивают по ЦилюНельсену, однако в связи с меньшей кислотоустойчивостью микобактерий лепры по сравнению с микобактериями туберкулеза обесцвечивают их 0,5 % раствором серной кислоты.

Микобактерий лепры располагаются в основном внутриклеточно в виде скоплений красных палочек, коккобацилл и шаров. Внеклеточно группируются в виде пачек-сигар.

ÐепозиториН сп цифическаяÏолесÃÓпр фи актика - общесанитарныей мероприятия. Для специфической иммун пр филактики и иммунотерапии используют вакцину из

15. Proteus

Proteus - постоянные обитатели кишечника человека, многих видов

позвоночных и беспозвоночных животных, встречаются в почве, сточных водах и гниющих органических субстратах. Протеи вызывают инфекции мочевыводящих путей, сепсис у больных с ммунодефицитами.

Прямые палочки размерами 1-3 х 0,4-0,8 мкм, иногда выглядят в виде нитей или кокков, обладают п движн стью за счет жгутиков (перитрихи), факультативные анаэробы, хем рганотрофы, имеют дыхательный и ферментативный метаболизм. Обладают каталазной активностью, сбраживают углеводы с образован ем к сло ы и газа, разжижают желатин, выделяют

сероводород, гидроли уют мочев ну, восстанавливают нитраты.

Протеи определяют по характерному роящемуся, ползучему росту на плотных питательных средах, когда они образуют концентрические кольца по периферии к л нии. Чистые культуры ид нтифицируют на виды по свойствам на дифференциально-диагностич ских средах. В отличие от других

антигенов, полученных из Proteus vulgaris. Препарат предназначен для профилактики протейной инфекции при обширных травматических повреждениях мягких тканей, открытых переломах. Он используется для иммунотерапии гнойновоспалительных заболеваний и осложнений, вызванных протеем. Вакцину применяют для взрослых подкожно.

16. Corynebacterium

В род коринебактерий входят десятки патогенных и непатогенных бактерий, имеющих определенную роль в патологии человека, животных, растений.

С. diphtheriae - возбудители дифтерии; С. xerosis - сапрофиты; С. cistitidis вызывают образование камней в мочевыводящих путях, циститы, пиелонефриты; С. minutissimum вызывают септицемии, абсцессы мозга, остеомиелиты; С. ulcerans вызывает дифтериеподобные поражения -

Санитарная и медицинская микробиология

фарингиты, реже поражения кожи; С. pseudodiphthericum могут встречаться в носоглоточной слизи здоровых людей, не принося вреда, но, попадая в кровь, могут быть причиной сепсиса.

Наибольшую роль в патологии играют С. diphtheriae. Заболевание известно очень давно, еще в 1 веке до н.э. сирийский врач Аратей охарактеризовал его как «злокачественные язвы на миндалинах, ведущие к удушью».

Дифтерия - острое инфекционное заболевание, вызываемое токсигенными коринебактериями. Характеризуется образованием фибринозных пленок у входных ворот и интоксикацией, приводящей к токсическим поражениям сердечно-сосудистой, нервной и других систем и органов.

20 часов образуются крошковидные колон кремового цвета, напоминающие «булыжную мостовую».

Культуральные свойства - факультативные анаэробы, метаболизм окислительноферментативныйÐепозитор. На кровяномийи сывороточном агарах через 18-

17. Haemophilus

Гемофильные бактерии тн сятся к семейству Pasteurellaceae, роду

Haemophilus, который включает 16 видов, среди них есть сапрофиты и патогенные микроорганизмыÏолесÃÓ.

Наибольшую роль в па ологии играет Н. influenzae, вызывающий воспалительные процессы дыхательных путей, менингиты, бронхиты, и Н. ducreyi - возбудитель мягкого шанкра. Н. aprophilus, Н. paraprophilus

вызывают энд кардиты.

Являются мелкими коккобакт риями, выражен полиморфизм, имеют

капсулу, не бразуют спор, не им ют жгутиков, по Граму окрашиваются

отрицат льно. Факультативные анаэробы, прихотливы к питательным средам. Нуждаются в наличии факторов роста в среде.

Бакт риоскопический мет д носит ориентировочный характер, выявляют

грамотрицательные полим рфные бактерии, чаше капсулами.

Бактериологический метод. Делают посев на среды с кровью.

Идентификацию проводят культуральным, биохимическим и антигенным

свойствам с использованием специфических монорецепторных сывороток.

Санитарная и медицинская микробиология

Модуль 5 (М-13) САНИТАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

(8 часов)

Тема 9 ПОНЯТИЯ О САНИТАРНО-ПОКАЗАТЕЛЬНЫХ

МИКРООРГАНИЗМАХ

(4 часа)

1. Значение состояния окружающей среды для распространения инфекционных заболеваний.

исчезновениеÐепозиторийлесов,ÏолесÃÓстр ительство дорог и дамб, распространение городов, расчистка естественной среды обитания для развития сельского хозяйства и

2. Методы оценки микробиологического загрязнения среды патогенами.

3. Понятие о санитарно-показательных м кроорганизмах.

4. Группы санитарно-показательных микроорганизмов (бактерии группы кишечной палочки, анаэ бные споровые сульфитредуцирующие

бактерии, бактерии группы пр тея, ст ептококки и стафилококки) и методы их выявления.

5. Количественные показатели санитарного состояния среды: микробное число, титр, ндекс.

1. Значение состояния окружающей среды для распространения

инфекционных заб леваний.

Влияние деятельности ч лов ка на окружающую среду принимает различные ф рмы. Мн гие из них широко известны, однако эксперты, похоже, недавно обнаружили еще один побочный эффект этого взаимодействия,

который им прямые пос едствия д я здоровья людей.

Программа ООН по кружающей среде (ЮНЕП) предупреждает, что

горнодобывающей промышленности, а также загрязнение прибрежных вод содействуют формированию условий, при которых могут бурно развиваться новые и старые патогены — бактерии, вирусы и болезнетворные микроорганизмы. ЮНЕП отмечает, что сохранившиеся нетронутыми природная среда и ландшафты, как правило, держат возбудителей инфекции под контролем, но в случае причинения им ущерба, их изменения или деградации происходит нарушение естественного баланса, в результате чего запускается механизм распространения среди людей новых и уже существующих болезней. ЮНЕП также указывает на возможную связь с изменением климата, которое может привести к изменению температуры и созданию благоприятных условий для таких переносчиков инфекционных заболеваний, как комары, или к экологическому стрессу и изменению природной среды в такой степени, что люди вынуждены мигрировать в

Полесский государственный университет Страница 66

Санитарная и медицинская микробиология

качестве «экологических беженцев».

Всемирная организация здравоохранения отметила, что за последние два десятилетия появилось по крайней мере 30 новых заболеваний, которые «представляют угрозу для здоровья сотен миллионов человек».

Источником всех патогенных микроорганизмов является человек и животные. Вода, почва, воздух чаще выступают как факторы передачи инфекционных болезней. Однако регистрируются случаи, когда объекты окружающей среды выполняют роль основных источниковзаболеваний. Микроорганизмы от человека могут долго сохраняться в окружающей среде, например:сальмонелла в холодной стоячей воде - до 2-ух лет, а в почве - до 10 мес.; дизентерийная палочка в почве - 10-20 дней.

микроорганизмовÐепозиторий, которыеÏолесÃÓ, как правило, не могутразмножаться в воздухе, воде и почве. Поэтому в сан тарно-м кробиологических исследованиях в основном

2. Методы оценки микробиологического загрязнения среды

патогенами.

Все санитарно-микробиологическ е методы можно разделить надве

применяют косвен-11ные методы, указывающие на возможное присутствие патогенныхмикр ргани мов.

Рисунок 1 – Методы санитарно-микробиологический исследований

Косвенные методы могут быть качественными и количественными. Качественные устанавливают лишь факт наличия или отсутствиямикроорганизмов в исследуемом объекте. Количественные методы

Полесский государственный университет Страница 67

Санитарная и медицинская микробиология

позволяют определить степень микробного загрязнения объектов окружающей среды и, следовательно, их потенциальную опасность дляздоровья человека.

К косвенным количественным методам относят:

-определение общего микробного числа (или общей микробной обсемененности, или общего количества бактерий);

-количественный учет санитарно-показательных микроорганиз-

мов.

Общее микробное число (ОМЧ) - количество микроорганизмов

вединице объема исследуемого объекта. Выражается в кл/мл, кл/г,кл/м3 или КОЕ6/мл, КОЕ/г, КОЕ/м3.

При определении ОМЧ исходят из предположения, что, чем онобольше,

тем выше вероятность попадания в объект патогенных микроорганизмов. ÐепозиторийОпределение ОМЧ должно проводиться с соблюдением определенных

правил: пробы, взятые асептично из разных участков исследуемого объекта,

или средние пробы должны транспорт роваться в лабораторию в условиях,

исключающих добавочное загрязнение, а также размножение или отмирание

микроорганизмов. В лаборатории п обы гомогенизируют, затем отмеряют

определенныевесовые или объемные к личества материала и подвергают его

исследованию.

метод количественного посева различных разведений образцов и проб исследуемого материала на п тательные среды.

Существует дваÏолесÃÓме ода определения ОМЧ: метод прямого подсчета и

Количественные пока атели характеризуют степень обсемененности

данного объекта микр рганизмами, т. общее микробное число в единице веса (объема) - обычно в 1г (1см3). Сущ тву т два метода определения микробной

обсемененности: мет д прямого подсч та и метод количественного посева

проб иссл ду мого объекта го разв д ний на питательные среды.

Прямой подсчет микроорганизмов в исследуемом объекте проводится под микроскопом в счетных камерах Горяева или в камерах, специально сконструированных для счета бактерий. Предварительно пробу исследуемого

объекта подвергают браб тке, чтобы получить гомогенную взвесь. Для

лучшего учета бактерий в исследуемую суспензию добавляют краситель, чаще фильтрах, через которые пропускают исследуемую жидкость или взвесь.

всего эритрозин. Можно проводить прямой подсчет и на мембранных

Метод прямого подсчета применяется в экстренных случаях, когда необходимо срочно дать ответ о количественном содержании бактерий, например, при авариях в системе водоснабжения, при оценке эффективности работы очистных сооружений и т. п. Метод прямого подсчета кажется простым и удобным, однако он имеет ряд существенных недостатков, снижающих его ценность и из-за этого довольно редко используется. Существенным недостатком его является невозможность подсчитать бактерии, когда образуются их скопления или когда они «прилипают» к частицам исследуемого субстрата, не удается подсчитать мелкие микроорганизмы, не говоря уже о вирусах. И наконец, метод прямого подсчета не дает возможности отличить

Полесский государственный университет Страница 68

Санитарная и медицинская микробиология

живые микроорганизмы от погибших. Создание автоматических приборов для регистрации общей микробной обсемененности, таких как фотоэлектрические и электронные счетчики, делает метод прямого подсчета более перспективным.

Метод количественного посева исследуемого материала на плотные питательные среды применяется наиболее часто. Из приготовленных серийных десятикратных разведений исследуемой жидкости или суспензии по 1 мл переносят в стерильные чашки Петри (начиная с большего разведения, каждое разведение отдельной пипеткой) и заливают расплавленным и остуженным до 45—50 °С мясопептонным агаром - МПА (глубинный посев). Для равномерного смешивания чашки слегка двигают по поверхности стола и после застывания агара помещают в термостат.

После инкубации подсчитывают число выросших колоний и с учетом разведения высчитывают число жизнеспособных микробов в единице объема исследуемого объекта. Если посевы выращ вали при 30°С, то показателем общей обсемененности исследуемого матер ала является КМАФАнМ (или МАФАнМ). КМАФАнМ не определяют только у продуктов, при производстве которых используют заквасочные культу ы. В зависимости от вида продукта и способа его производства этот п казатель может свидетельствовать об общем

санитарноэпидемиологическ м с с янии продукта, свежести или начальной

стадии порчи внешне доброкачес венного продукта, хотя во многих случаях

метод считается пр бл з ельным из-за невозможности выявить все

микроорганизмы в объекте на одной питательной среде, т.к. их физиолого-

биохимические свойства ра чны. Кроме того, режим инкубации также не

соответствует треб ваниям всех микроорганизмов в ассоциации, не дают роста микробы, нах дящиеся в комочках и л ду мого объекта, а если и наблюдается рост колоний, то, в зможно, не из одной особи. Наконец, часть микроорганизмов теряет способность к размножению в силу антагонизма, конкур нции других причин. Несмотря на недостатки этого показателя, для многих продуктов КМАФАнМ н рмируется.

К санитарно-показательным микроорганизмам (СПМ) относят представителей облигатной микрофлоры организма человека и теплокровных

Ðепозиторий3. ПонятиеÏолесÃÓсанитарно-показательных микроорганизмах.

животных, обитающих в кишечнике или воздушно-дыхательных путях. В качестве таковых выступают не все представители нормальной микрофлоры человека и животных, а лишь те, которые удовлетворяют следующим основным требованиям:

1.Микроорганизм должен постоянно обитать в естественных полостях человека и животных и постоянно выделяться во внешнюю среду.

2.Микроорганизм не должен размножаться во внешней среде, исключая пищевые продукты, или размножаться незначительно и короткое время.

3.Длительность выживания микроорганизма во внешней среде должна быть не меньше, а несколько больше, чем сроки выживания патогенных микроорганизмов, выводимых из организма теми же путями.

Санитарная и медицинская микробиология

4.У микроорганизма не должно быть во внешней среде «двойников» или аналогов, с которыми его можно перепутать.

5.Микроорганизм не должен сколько-нибудь значительно изменять свои биологические свойства в окружающей среде.

6.Рост санитарно-показательных микроорганизмов на питательных средах не должен зависеть от влияния других присутствующих микроорганизмов.

7.В объектах внешней среды санитарно-показательные микроорганизмы должны быть по возможности распределены равномерно.

8.Методы обнаружения, идентификации и количественного учета должны быть современными, простыми и легко доступными.

Находя в исследуемом материале представителей микрофлоры полости рта, делают заключение о попадании слизи из дыхательных путей, в которой

группыÐепозиторийкишечной ÏолесÃÓпалочки, анаэробные споровые сульфитредуцирующие

(являющихся санитарно-показательными микроорганизмами) относятся зеленящий стрептококк Streptococcus viridans, гемолитический стрептококк

Streptococcus haemolyticus, в дельных случаях стафилококк - Staphylococcus pyogenes (aureus).

Предполагается, ч чем больше обьъект загрязнен выделениями

человека и животных, тем больше будет обнаружено СПМ и тем вероятнее присутствие патогенных м кроорганизмов. Для более точной оценки в число СПМ включают и нек т рые сапрофитные бактерии, которые в естественных условиях обитают вне рганизма ч лов ка и животных: аммонифицирующие и

бактерии, бактерии группы протея, стрептококки и стафилококки) и методы их выявления.

Группы санитарно-показательных микроорганизмов условно разделяют на 3 группы.

Первая группа включает обитателей кишечника человека. Их расценивают как индикаторы фекального загрязнения. В нее входят бактерии группы кишечной палочки (колиформные бактерии), энтерококки, сульфитвосстанавливающие клостридии (включая Clostridium perfringens), колифаги.

Вторая группа включает обитателей верхних дыхательных путей и