43 Чистые культуры м/о.

Ч. к. – это такая культура, которая содержит м/о одного вида. Под ч.к. понимают клон одной клетки. Выделение ч.к. осуществляется в 3 этапа:

1. Получение накопительных культур – увеличение кол-ва выделенных м/о в смешанной популяции. Для этого создают оптимальные условия для роста и выживания м/о, при которых он сможет преодолеть конкуренцию других м/о. Методы: физические (температура, УФ); химические (использование токсичных в-в, которые не влияют на выделяемый м/о, использование источников питания); биологические (использование специфических хозяев для данного м/о).

2. Выделение ч.к.: а) Высев на ч. Петри: метод штриха (истощающегося – пе5тлёй проводят параллельные не соприкасающиеся штрихи, последний образует отдельные колонии, либо делят ч. Петри на 3 части); б) последовательных разведений (приготавливают разведения и высевают в пробирки на жидкие питат. среды, либо последовательный пересев с чашки на чашку); в) рассев бактерий из полученной колонии на подходящую пит. среду.

Поддержание чистоты: соблюдение правил асептики (предотвращение попадания посторонних м/о), механич. защита – удаление мех. примесей из воздуха, с оборудования, физическая защита (t, УФ, Р, ультразвук), химические – антисептики.Контроль чистоты: 1) визуальный – просмотр по штриху или по скошенной агаризованной среде (по поверхности), 2) микроскопирование (препарат фиксирован и окрашен), 3) высев на питательные среды – однородность роста м/о. Причины контаминации: источники: почва (бациллы, споры грибов, актиномицеты – эти м/о могут с пылью попасть в воду, а затем с ней и в среду, или в готовый продукт); вода – энтеробактерии, псевдомонады, цианобактерии; люди - кокки, вирусы, микоплазмы, спирохеты, дрожжи; причины: 1) заражение в лаборатории и цехе, 2) на стадии биосинтеза (среда), 3) несоблюдение асептики при приготовлении посевного материала, отборе проб, получении готового продукта, 4) недостаточная стерилизация; последствия: 1) изменение оптимальных условий биосинтеза (изменение продукта);2)затруднённость обработки культуральной жидкости;3)загрязнение продукта;4)м/о образуют ферменты, разрушающие продукт.

35 Общая характеристика микроорганизмов

Микроорганизмами принято называть мельчайшие живые существа, размеры которых меньше или немногим превышают разрешающую способность человеческого глаза (0,2 мм). Понятие «микроорганизм» не имеет таксономического значения. Оно объединяет организмы по признаку их малых размеров и специфических методов изучения. Микроорганизмы относятся к трем надцарствам (безъядерные, предъядерные, ядерные) и пяти царствам (вирусы, бактерии, грибы, растения и животные). Микробами среди растений являются микроскопические водоросли, а среди животных - микроскопические простейшие. Особенности микроорганизмов как объектов исследования и промышленного применения являются: 1). Чрезвычайно малые размеры, которые определяют специфическими методами исследования и культивирования; 2). Короткий жизненный цикл, быстрое размножение и способность давать многочисленное потомство; 3). Разнообразие физиолого-биохимических свойств; 4). Быстрая адаптация к изменяющимся условиям среды обитания. Многочисленные микроорганизмы (бактерии, грибы, простейшие, вирусы) систематизированы в определенном порядке по их сходству, различиям и взаимоотношениям между собой. Этим занимается специальная наука, называемая систематикой. Раздел систематики, изучающий принципы классификации называется таксономией. Таксон - группа организмов, обладающих заданной степенью однородности. Для микроорганизмов рекомендованы следующие таксономические категории: класс, отдел, порядок, семейство, род, вид. Все таксономические категории описываются с помощью признаков. Признаки могут быть морфологическими, культуральными, физиолого-биохимическими, иммунологическими и т.д. В последнем издании определителя Берджи все бактерии разделены на четыре основные категории:

I Грамотрицательные эубактерии, имеющие клеточные стенки. Категория включает 12 групп, из которых наиболее широко используются в биотехнологии 4 группа

- грамотрицательные, аэробные / микроаэрофильные палочки и кокки: Асеtоbасtег, Сlисоnоbасtеr – продуценты уксусной кислоты; Pseudomonas- продуценты аминокислот, витаминов, ферментов, органических кислот; Rhzobium- клубеньковые бактерии, фиксирующие атмосферный азот - получение биоудобрений; Xanthomonas- продуцент ксантана.

II Грамположительные эубактерии, имеющие клеточные стенки. Категория включает 17 групп, представителей следующих родов: Streptococcus, Lactobacillus-молочная промышленность;Leuconostoc - продуцент декстрана, Bacillus продуценты ферментов; Clostridium-продуценты ацетона, бутанола, Propionibacterium- продуценты пропионовой кислоты, витамина В₁₂, Streptomices -продуценты антибиотиков и ферментов.

III Эубактерии, лишенные клеточных стенок -обычно называемые микоплазмами.

IV Архебактерии - прокариоты, обладающие ря­дом уникальных свойств и биохимических процессов. Они обитают в средах с экстремальными условиями - высокие концентрации неорганических солей, повышенные температуры, оксид и диоксид углерода - как единственные источники углерода. К архебактериям относятся галобактерии, термоацидофильные бактерии и метанообразующие или метаногенные бактерии.

Большинство бактерий имеют сферическую, цилиндрическую и спиралевидную форму. Существуют также нитчатые, ветвящиеся бактерии и бактерии образующие выросты. Сферические бактерии называются кокками. В зависимости от взаимного расположения они делятся на микрококки, диплококки, стрептококки, тетракокки, сарцины, стафилококки. Цилиндрические или палочковидные бактерии имеют форму палочек с закругленными (Е. соli), обрезанными (сибиреязвенная бацилла) или заостренными концами. Извитые бактерии бывают трех типов: 1. вибрионы - слегка изогнутые палочки, похожие на запятую (холерный вибрион), 2. спириллы - имеют несколько правильных завитков, 3. спирохеты имеют вид тонких спиралевидных клеток с многократными завитками и петлями.