1.4. Микроскопический метод.

Микроско́п (от греч. μικρός — маленький и σκοπέω— смотрю) — оптический прибор для получения увеличенных изображений малых объектов, которые невозможно рассмотреть невооружённым глазом. До изобретения микроскопа для изучения мелких предметов использовали только лупу.

В настоящее время достигнут предел разрешающей способности микроскопа или микроскопии, равный длине опорной волны луча «жёсткого» рентгеновского излучения, что соответствует длинам волн 1—10нм.

Д

Рис.. Цифровой микроскоп с ЖК-монитором

ля исследования объектов разного типа, в зависимости от требуемой величины оптического разрешения и других требований созданы разные микроскопы:

1. Оптические микроскопы (светооптические):

А) Микроскопы универсального назначения

- монокулярные микроскопы

- бинокулярный микроскоп и настольный стереоувеличитель

Б) Специальные микроскопы:

- поляризационный микроскоп

- флюоресцентный наноскоп и люминесцентный микроскоп

- флюоресцентный рентгеновский наноскоп

- ближнепольный оптический микроскоп

- дифференциальный интерференционно-контрастный микроскоп

2. Электронные микроскопы

3. Рентгеновские микроскопы

- рентгеновские микроскопы отражательные

- рентгеновские микроскопы проекционные

- рентгеновские микроскопы флюоресцентные с применением планарных преломляющих, фокусирующх Х-лучи линз.

4. Лазерный рентгеновский микроскоп

Микроскопия в зависимости от микроскопов разделяется на несколько видов:

1. Оптическая микроскопия (светооптическая):

- иммерсионная микроскопия: применяют для увеличения разрешающей способности метода световой микроскопии; объектив помещается в среду (определенные масла), имеющую высокий коэффициент преломления, препятствует рассеивания света от объекта исследования;

- микроскопия в проходящем поле (светлопольная микроскопия) используется для изучения окрашенных объектов в фиксированных препаратах;

- темнопольная микроскопия применяется для прижизненного исследования микробов в нативных неокрашенных препаратах; основана на явлении дифракции света при боковом освещении частиц (эффект Тинсдаля);

- фазово-контрастная микроскопия изучает нативный препарат, дает возможность увидеть прозрачные объекты, за счет усиления различия в оптической плотности;

- люминесцентная микроскопия основана на явлении фотолюминесценции. Люминесценция – свечение веществ, возникающее под воздействием внешнего излучения. Первичная – наблюдается без предварительного окрашивания за счет наличия собственных люминесцирующих веществ, вторичная – в результате окрашивания люминесцирующими красителями – флюорохромами;

- наноскопия: в основе лежит впервые сформулированный новый метод российского ученого Андрея Климова, позволяющий увеличить разрешение оптических микроскопов на два порядка. Однако, патент, который оспаривается, принадлежит разработчикам и создателям флюоресцентного наноскопа Штефану Хеллу (Stefan Hell) из Института биофизической химии (Max Planck Institute for Biophysical Chemistry (Karl Friedrich Bonhoeffer Institute)) — 2006 год. Немецкие ученые разработали оптический микроскоп, позволяющий наблюдать объекты размером около 10 нм (откуда и возник термин «наноскопия») и получать высококачественные трехмерные 3D изображения. Увидеть объекты размером менее 200 нанометров (минимальной длины волны ближнего ультрафиолетового излучения) было возможно только при помощи неоптических методов (например, электронной микроскопии). Однако эти методы имели свои ограничения, в частности, в отличие от оптических не позволяли работать с целыми и тем более живыми клетками. Учёные применили метод микроскопии, в котором молекулы при помощи специально подобранного очень короткого импульса переводятся из "темного" состояния в "светлое", при котором они излучают энергию, люминесцируют. Излучаемый свет фиксируется и тем самым выдает данные об объектах размером значительно меньше 200 нанометров.