2 курс / Микробиология 1 кафедра / 7

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1.Характеристика возбудителя сифилиса, микробиологическая диагностика.

Возбудитель сифилиса – Treponema pallidum.

Морфо-тинкториальные свойства: извитые бактерии (спирохеты) спи-

ралевидной формы, имеют мелкие равномерные первичные завитки, спор и капсулу не образуют. По Романовскому-Гимзе окрашиваются в бледно-розовый цвет. При неблагоприятных условиях (действие антибиотиков и антител) трепонемы способны сохраняться в виде цист или переходить в L-форму. Подвижность трепонем связана с наличием фибрилл, которые обеспечивают различные виды движения: сгибательное, поступательное, вращательное и др.

Чистая культура Treponema pallidum.

Культуральные свойства: строгие анаэробы, плохо растут на искусственных питательных средах.

Факторы патогенности:

факторы адгезии;

факторы инвазии;

цисты и L-формы, способствующие длительной персистенции.

Сифилис – заболевание, чаще передаваемое половым путем. Сифилис – «великий» имитатор», так как имеет множество клинических проявлений.

Источник инфекции: больной человек.

Пути заражения: половой, трансплацентарный, интранатальный, трансфузионный, контактно-бытовой.

Патогенез: возбудитель размножается в месте внедрения (слизистые оболочки половых путей, ротовой полости, прямой кишки), мигрирует в регионарные лимфатические узлы (первичный сифилис). Далее, при гематогенном и

24

лимфогенном распространении трепонем, процесс генерализуется (вторичный сифилис). Последующее размножение микробов в различных органах приводит к их грубым органическим поражениям (третичный сифилис).

Клинические формы.

Первичный сифилис проявляется формированием в месте внедрения возбудителя твердого шанкра (безболезненной язвы с плотным основанием), увеличением и воспалением регионарных лимфатических узлов (регионарный лимфаденит). Продолжительность течения первичного сифилиса – 6 недель. Затем эти признаки исчезают.

Вторичный сифилис характеризуется появлением на коже и слизистых оболочках розеолезно-папулезных высыпаний и генерализованным лимфаденитом. Эти проявления носят рецидивирующий характер. Продолжительность вторичного сифилиса колеблется от двух до пяти лет.

При отсутствии лечения возникает третичный сифилис. Во внутренних органах и костях наблюдается формирование гумм (висцеральный сифилис). Гуммы – это сифилитические гранулемы в виде плотных узлов, склонных к распаду и рубцеванию.

У пациентов без лечения и также у ВИЧ-инфицированных, может развиться нейросифилис – тяжелое поражение ЦНС (сифилитический менингит, прогрессивный паралич и др.).

При трансплацентарном инфицировании плода от больной матери развивается врожденный сифилис, который подразделяется на ранний (проявляется у детей до 2 лет) и поздний (проявляется у детей старше 2 лет).

Микробиологическая диагностика.

Для выявления возбудителя при первичном и вторичном сифилисе с клиническими проявлениями используют:

1.Бактериоскопический метод (темно-полевая микроскопия);

2.Иммуногистохимическое исследование (ИГХ);

3.ПЦР.

Для выявления антител используют серологический метод. Существу-

ют нетрепонемные и трепонемные тесты.

Нетрепонемные тесты: применяют для проведения массового скрининга населения. Это отборочные тесты. Предусматривают использование неспецифического антигена (например, экстракта липидов мышц бычьего сердца, так как он идентичен липоидному антигену трепонем).

Кнетрепонемным тестам относят:

1.Реакцию микропреципитации (РМП);

2.Другие экспресс-тесты: аналоги реакции микропреципетации (RPR, VDRL).

25

Трепонемные тесты – для подтверждения положительных результатов нетрепонемных тестов, но с использованием специфического трепонемного антигена:

1.ИФА;

2.Иммуноблоттинг (модификация ИФА);

3.РИФ;

4.РИБТ (реакция иммобилизации бледных трепонем);

5.РПГА (РНГА);

6.ИХЛ (иммунохемилюминесцентное исследование)

Микробиологическая диагностика врожденного сифилиса.

Представляет собой комплекс нетрепонемных и двух трепонемных тестов:

1.Нетрепонемные тесты: РМП, RPR, VDRL;

2.Трепонемные тесты: РПГА, ИФА

Специфическая профилактика и лечение на разработаны.

2.Характеристика возбудителей боррелиозов, микробиологическая диагностика.

Возбудители боррелиозов – Borrelia recurrentis, B.duttoni, B.persica, B.burgdorferi, B.garini, B.afzelii.

Морфо-тинкториальные свойства: извитые бактерии (спирохеты), име-

ют крупные неравномерные первичные завитки и заостренные концы. Спор, капсул не имеют. Подвижны за счет наличия фибрилл. По Романовскому-Гимзе окрашиваются в сине-фиолетовый цвет.

B.recurrentis в мазке крови больного эпидемическим возвратным тифом.

Культуральные свойства: практически не культивируются на искусственных питательных средах, строгие анаэробы.

26

Антигенная структура боррелий нестабильна и может меняться в течение заболевания.

Факторы патогенности:

1.факторы адгезии;

2.факторы инвазии;

3.эндотоксин;

4.антигенная изменчивость.

Возбудители боррелиоза Лайма – B.burgdorferi, на евро-азиатском континен-

те – B.garini и B.afzelii.

Источники инфекции: мелкие млекопитающие.

Путь заражения: трансмиссивный (при укусе переносчика – иксодового клеща).

Патогенез заболевания связан с распространением возбудителя из места укуса с током крови в различные органы, чаще сердце, ЦНС и суставы.

Клинические проявления: на месте укуса появляется мигрирующая кольцевидная эритема в виде овальной или круглой папулы. Если больные остаются без лечения, то микроорганизм гематогенным путем распространяется в организме, вызывая артриты, миокардит, менингит.

Микробиологическая диагностика.

1.Микроскопический метод: из биоптатов кожи, ликвора и синовиальной жидкости готовят мазки в окраске по Романовскому-Гимзе.

2.Серологический метод: определение IgM и IgG в сыворотке крови больного с помощью реакции непрямой иммунофлюоресценции, ИФА.

3.ПЦР.

Специфическая профилактика и специфическое лечение не разработаны.

Возбудитель эпидемического возвратного тифа – B.recurrentis.

Источник инфекции: больной человек.

Путь заражения: трансмиссивный.

Переносчики: головные и платяные вши. Заражение происходит в результате втирания в кожу гемолимфы раздавленных вшей при расчесывании места укуса.

Патогенез: попавшие в организм боррелии поглощаются фагоцитами, размножаются в них и попадают в кровь. Затем они разрушаются и выделяют эндотоксин, что вызывает лихорадку, сосудистые расстройства, головные боли. Под действием антител большинство возбудителей погибает. Однако, часть боррелий сохраняется в паренхиматозных органах, размножается и образует новую антигенную разновидность возбудителя, которая вновь поступает в кровь. Возникает рецидив. В течение заболевания формируется иммунитет про-

27

тив нескольких антигенных разновидностей возбудителя и наступает выздоровление.

Клинические проявления характеризуются чередованием лихорадочных приступов с периодами апирексии, когда температура нормализуется. Это повторяется от 3 до 20 раз, причем каждый последующий период апирексии удлиняется. Прогноз заболевания благоприятный.

Микробиологическая диагностика.

Материал на исследование: кровь в период подъема температуры.

Основной метод диагностики – бактериоскопический с обнаружением в мазках крови боррелий в окраске по Романовскому-Гимзе.

Специфическая профилактика и специфическое лечение не разработаны.

Возбудители эндемического возвратного тифа – более 20 видов боррелий, среди которых чаще заболевания вызывают B.duttoni и B.persica.

Резервуар инфекции в природных очагах: различные виды грызунов и хищников, а также аргасовые клещи.

Путь заражения: трансмиссивный (при укусе клещей).

Патогенез, клинические проявления и микробиологическая диагностика сходны с эпидемическим возвратным тифом.

Для дифференциальной диагностики возвратных тифов используют биологическую пробу на морских свинках, так как животные резистентны к возбудителю эпидемического возвратного тифа.

Специфическая профилактика и специфическое лечение не разработаны.

4.Характеристика возбудителей лептоспироза, микробиологическая диагностика и специфическая профилактика.

Все патогенные лептоспиры объединены в один вид – Leptospira interrogans, который включает более 200 сероваров.

Морфо-тинкториальные свойства: извитые бактерии (спирохеты), име-

ют мелкие равномерные первичные завитки и крючкообразные концы. Вторичные завитки образуются при движении и формируют дополнительные изгибы, придающие лептоспирам сходство с латинскими буквами S и C. Спор и капсул не имеют. Подвижность за счет наличия фибрилл. По Романовскому-Гимзе окрашиваются в розово-фиолетовый цвет.

28

4.Серологический метод: реакция агглютинации и лизиса лептоспир (РАЛ) с эталонным набором живых культур, ИФА.

Специфическая профилактика – инактивированная лептоспирозная вакцина (по эпидемическим показаниям).

Специфическое лечение – иммуноглобулин противолептоспирозный из сыворотки крови волов.

5.Возбудитель Ку-лихорадки, диагностика заболевания, специфическая профилактика.

Возбудитель Ку-лихорадки – Coxiella burnetii.

Морфо-тинкториальные свойства: очень мелкие (0,2-0,7 мкм) коккобак-

терии. По Романовскому-Гимзе окрашиваются в красный цвет.

Coxiella burnetiid (электронная фотография).

Культуральные свойства: облигатные внутриклеточные паразиты, культивируются в культуре клеток, курином эмбрионе, организме животных.

Высокоустойчивы в окружающей среде, могут образовывать спороподобные формы, в том числе и в инфицированных клетках.

Заболевание получило название (от англ. «quer» – вопрос), так как причины его возникновения были неизвестны.

Источники инфекции:

1)домашние животные (мелкий и крупный рогатый скот, лошади, свиньи и др.);

2)дикие животные, грызуны, птицы;

3)клещи.

Пути заражения:

1)аэрогенный – основной;

2)алиментарный – при употреблении молока и мяса инфицированных домашних животных;

3)контактный – при уходе за больными животными;

30

4) трансмиссивный – в природных очагах инфекции при укусах клещей.

Патогенез: проникая через слизистые оболочки или кожу, возбудитель попадает в лимфу и кровь. Размножение возбудителя происходит в гистиоцитах и макрофагах.

Клинические проявления: Ку-лихорадка протекает как острое лихорадочное заболевание с очень разнообразной клинической симптоматикой, что крайне затрудняет клиническую диагностику. При аэрогенном заражении, как правило, развивается атипичная (интерстициальная) пневмония, характеризующаяся поражением соединительной ткани легкого, сухим кашлем, выраженными симптомами интоксикации и длительным течением.

Материал на исследование: сыворотка крови больного. Основной метод диагностики: серологический (РСК, ИФА, РИФ).

Специфическая профилактика: живая вакцина М-44 для лиц из группы риска.

6.Характеристика риккетсий – возбудителей сыпного тифа, серодиагностика.

Риккетсии – очень мелкие палочковидные бактерии. Могут иметь кокко-

видную и нитевидную форму. Спор и капсул не образуют. Неподвижны. Являются облигатными внутриклеточными паразитами. Размножаются в цитоплазме и (или) в ядрах клеток.

Особенностью химического состава риккетсий является высокое содержание липидов, что определяет их устойчивость во внешней среде и тинкториальные свойства.

Методы окраски:

а) ослабленный вариант окраски по Цилю-Нильсену. Риккетсии окрашиваются в красный цвет, а цитоплазма инфицированных клеток – в голубой;

б) метод Романовского – Гимза.

Риккетсии. Окраска по Цилю-Нильсену.

31

Культивируют риккетсии:

1)в организме лабораторных животных;

2)в желточном мешке куриных эмбрионов;

3)в культуре клеток;

Факторы патогенности:

факторы адгезии;

факторы инвазии;

токсические факторы, входящие в состав клеточной стенки.

Большинство риккетсий (кроме возбудителя эпидемического сыпного тифа) являются возбудителями природно-очаговых зоонозных инфекций, поражающих теплокровных животных, птиц и членистоногих, а человек является случайным звеном в цепи циркуляции возбудителя.

Риккетсии группы сыпного тифа.

Возбудителем эпидемического сыпного тифа и болезни Брилля являет-

ся Rickettsia prowazekii.

Источник инфекции: больной человек.

Переносчики: в основном платяные вши, реже – головные.

Основной путь заражения: трансмиссивный (втирание экскрементов вшей при расчесывании мест укусов).

Возбудителем эндемического сыпного тифа является Rickettsia typhi. Источник инфекции: крысы.

Переносчики: крысиные блохи и вши.

Основной путь заражения: трансмиссивный.

Заболевание встречается в портовых городах теплых морей.

Патогенез и клиника: возбудитель размножается в эндотелии кровеносных сосудов, особенно капилляров. При этом происходит формирование периваскулитов и тромбов. Наиболее выражены поражения сосудов головного мозга, что проявляется сильными головными болями, бредом, повышением температуры до 39-400С. На 4-6 день от начала заболевания на коже появляется розе- олезно-петехиальная сыпь, связанная с поражением эндотелия капилляров кожи. Симптомы интоксикации обусловлены действием токсических факторов риккетсий.

Материал на исследование: сыворотка крови больного. Ведущий метод диагностики – серологический: ИФА, РИФ.

У некоторых людей, переболевших в прошлом эпидемическим сыпным тифом, риккетсии могут длительно сохраняться в организме и при ослаблении резистентности вызывать рецидив сыпного тифа – болезнь Брилля (повторный сыпной тиф). Болезнь Брилля характеризуется более легким течением,

32

чем первичный сыпной тиф. Однако, больные при наличии завшивленности (педикулез) могут быть источниками инфекции для окружающих.

Специфическая профилактика: живая сыпнотифозная вакцина, химическая сыпнотифозная вакцина.

7.Характеристика возбудителей хламидиозов, микробиологическая диагностика.

Хламидии – мелкие грамотрицательные бактерии, шаровидной или овоидной формы. Не имеют спор, жгутиков, капсулы. Основной метод выявления в клетках – окраска по Романовскому-Гимзе.

Жизненный цикл хламидий включает образование двух основных форм:

элементарные тельца (ЭТ) и ретикулярные тельца (РТ) (табл.3).

Цикл внутриклеточного паразитизма хламидий.

1.В клетку проникают ЭТ, которые затем превращаются в РТ.

2.РТ размножаются в цитоплазме клетки путем бинарного деления, формируя включения, которые обычно располагаются околоядерно.

РТ

ядро клетки

Световая микроскопия клеточной культуры C.trachomatis.

33