2 курс / Микробиология 1 кафедра / 5. 1

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1.Алгоритм ответа по частной бактериологии:

латинское название возбудителя;

морфо-тинкториальные свойства;

культуральные свойства;

биохимические свойства (если имеют диагностическое значение);

антигенная структура (если имеет диагностическое значение);

факторы патогенности;

источник инфекции, пути заражения;

вызываемые заболевания;

материал для микробиологического исследования;

методы микробиологической диагностики;

специфическая профилактика и специфическое лечение инфекционного заболевания.

2.Характеристика стафилококков, вызываемые заболевания. Микро-

биологическая диагностика стафилококковых инфекций, специфиче-

ская терапия.

Род Staphylococcus включает около 40 видов, из них наибольшее значение в патологии человека имеют S.aureus, S.epidermidis, S.saprophyticus.

Морфо-тинкториальные свойства: грамположительные кокки, непо-

движны, имеют микрокапсулу, спор не образуют, в мазках располагаются скоп-

лениями в виде гроздьев винограда.

Культуральные свойства: факультативные анаэробы, нетребовательны к питательным средам, культивируются на МПА с образованием пигментирован-

ных колоний желтого или белого цвета, в МПБ дают диффузно-мутящий рост.

Для идентификации стафилококков имеет значение характер роста на кровяном агаре (зоны гемолиза), желточно-солевом агаре (ЖСА) – определение лецити-

назы.

3

-гиалуронидаза расщепляет гиалуроновую кислоту соединительной ткани,

что способствует распространению стафилококков в организме;

-фибринолизин расщепляет фибрин и способствует распространению ста-

филококков в организме;

-дезоксирибонуклеаза расщепляет ДНК;

5. Экзотоксины:

-гемолизины 4-х типов (мембранотоксины), токсичные для эритроцитов,

лейкоцитов, макрофагов, фибробластов;

-лейкоцидин разрушает лейкоциты;

-эксфолиативный токсин разрушает межклеточные контакты в эпидерми-

се, вызывает синдром «ошпаренной кожи»;

-токсин синдрома токсического шока вызывает системное поражение ор-

ганизма в виде синдрома токсического шока (СТШ) с высокой летально-

стью;

-энтеротоксины вызывают симптоматику острого пищевого отравления.

Все токсины, кроме гемолизинов, продуцирует только S.aureus.

6.R-плазмиды детерминируют устойчивость к нескольким антибиотикам, в

т.ч. за счет продукции β-лактамаз. В клинической практике большое значение имеют метициллинрезистентные S.aureus (MRSA) – штаммы S.aureus, устойчи-

вые к большой группе антибиотиков (β-лактамы). MRSA адаптированы к вы-

живанию в присутствии метициллина, оксациллина. Часто вызывают внутри-

больничные инфекции.

S.aureus распространен повсеместно, входит в состав микробиоты кожи,

носоглотки, ротоглотки, опасен как возбудитель внутрибольничных (госпи-

тальных) инфекций.

Источник инфекции: больной человек, бактерионоситель. Часто форми-

руется носительство у медперсонала. Носовая полость является основной зоной

колонизации S.aureus.

5

Пути заражения: воздушно-капельный, контактный, алиментарный. У

лиц со сниженной резистентностью возможен эндогенный способ заражения за счет транслокации S.aureus в другие биотопы организма.

Инфекции, вызываемые S.aureus, многообразны, т.к. поражаются любые ткани и органы (табл. 1).

Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций.

Бактериологический метод с посевом на соответствующие питательные среды и идентификацией по морфологическим, культуральным, биохимиче-

ским и патогенным свойствам и постановкой антибиотикограммы. Фаготипи-

рование выделенных культур S.aureus производят по эпидемиологическим по-

казаниям при пищевых отравлениях и внутрибольничных инфекциях.

Для лечения используют антимикробные препараты. Для специфического лечения в некоторых случаях возможно применение стафилококкового бак-

териофага, антитоксической противостафилококковой плазмы или имму-

ноглобулина. Для специфической профилактики разработан стафилококко-

вый анатоксин.

6

3. Характеристика стрептококков, вызываемые заболевания. Микробио-

логическая диагностика стрептококковых инфекций.

Род Streptococcus включает 20 видов. Наибольшее значение в патологии человека имеют S.pyogenes, S.agalactiae, S.sanguis, S.mitis, S.mutans, Enterococcus faecalis, S.pneumoniae.

Морфо-тинкториальные свойства: грамположительные кокки, непо-

движны, спор и капсул (за исключением S.pneumoniae) не образуют, в мазках располагаются цепочками или попарно.

Чистая культура Streptococcus pyogenes. Окраска по Граму.

Культуральные свойства: факультативные анаэробы, требовательны к питательным средам, на кровяном агаре часто образуют колонии с зонами ге-

молиза.

Виды гемолиза:

-гемолиз: вокруг колоний микроорганизмов образуются зоны позелене-

ния («зеленящие стрептококки»);

-гемолиз: полный гемолиз вокруг колоний (прозрачная зона);

-гемолиз: отсутствие видимого гемолиза.

Антигенная структура: стрептококки по полисахаридным антигенам кле-

точной стенки разделены на 20 серогрупп. В патологии человека основная роль принадлежит стрептококкам группы А.

7

Стрептококки входят в состав нормальной микробиоты организма челове-

ка, в частности, кожи, слизистых оболочек и кишечника, но при снижении ре-

зистентности организма могут вызывать заболевания.

Наиболее патогенным и эпидемиологически значимым для человека явля-

ется вид S.pyogenes, обладающий значительным набором факторов патоген-

ности:

1.Фактор адгезии: липотейхоевая кислота клеточной стенки;

2.Белок М подавляет фагоцитоз;

3.Перекрестно реагирующие антигены имеют антигенную общность с тканью сердца и почек.

4.Ферменты инвазии:

-фибринолизин (стрептокиназа) вызывает растворение фибриновых тром-

бов, способствует распространению по кровеносному руслу;

-гиалуронидаза расщепляет гиалуроновую кислоту соединительной ткани,

что способствует распространению стрептококков в организме;

-ДНК-аза разрушает молекулы ДНК.

5.Экзотоксины:

-эритрогенный токсин является суперантигеном, действие которого подоб-

но действию стафилококкового токсина СТШ, вызывает скарлатину и СТШ;

-гемолизины (О- и S-стрептолизины) оказывают гемолитическое и цитоток-

сическое действие на эритроциты, лейкоциты, тромбоциты;

Источники инфекции: больной человек, бактерионоситель, реже живот-

ные (коровы).

Пути заражения: воздушно-капельный, контактный, для S.agalactiae – ин-

транатальный (во время родов).

Заболевания, вызываемые стрептококками, достаточно разнообразны

(табл. 3).

8

Основной метод диагностики – бактериологический. Иногда используют

серологический метод для определения в сыворотке крови антител против

стрептолизина О и т.д. (при ревматизме).

Специфическая профилактика и лечение стрептококковых инфекций не

разработаны.

9

4. Характеристика пневмококков, вызываемые заболевания. Микробио-

логическая диагностика пневмококковых инфекций.

Пневмококки – Streptococcus pneumoniaе.

Морфо-тинкториальные свойства: грамположительные диплококки ланцетовидной формы, образуют капсулу в организме, спор и жгутиков не

имеют.

Чистая культура Streptococcus pneumoniaе. Окраска по Граму.

Культуральные свойства: факультативные анаэробы, требовательны к питательным средам, растут на кровяном агаре, образуют гладкие, мелкие ко-

лонии с зонами -гемолиза.

Антигенная структура: пневмококки дифференцируют по полисахарид-

ным капсульным антигенам и выделяют 90 сероваров.

Факторы патогенности:

1.Капсула защищает от фагоцитоза.

2.Протеаза IgA разрушает секреторные IgA и способствует адгезии пневмококков на слизистых оболочках.

3.Гиалуронидаза и нейраминидаза разрушают основное вещество соеди-

нительной ткани.

4. Гемолизин.

Многие серовары пневмококков являются нормальными обитателями но-

соглотки, но могут вызывать патологию у человека, как при эндогенном, так и при экзогенном путях заражения и ослабленном иммунитете. Наиболее виру-

10

лентны пневмококки I, II и III сероваров. III серовар, имеющий мощную капсу-

лу, является высоко вирулентным и вызывает тяжелые деструктивные пораже-

ния тканей.

Источник инфекции: больной человек, бактерионоситель.

Путь заражения: воздушно-капельный.

Заболевания, вызываемые пневмококками, представлены в табл. 4.

Метод диагностики – бактериологический.

Специфическая профилактика: химическая (полисахаридная) вакцина

на основе капсульных антигенов.

5. Возбудители сепсиса. Микробиологическая диагностика.

Сепсис (от греч. sepsis – гниение) – системная воспалительная реакция в ответ на генерализацию местного инфекционного процесса с развитием бакте-

риемии и токсемии. Сопровождается размножением возбудителя в крови и ха-

рактерной клинической и патологоанатомической картиной.

Особенность сепсиса заключается в многообразии его возбудителей при достаточно общей клинической картине заболевания (табл. 5).

11

Правила забора крови при подозрении на сепсис:

1.Кровь забирают в процедурном кабинете, соблюдая правила асептики и антисептики;

2.Лучше забирать кровь до назначения антибактериальной терапии, если антибиотики назначены, то перед очередным введением антибиотика;

3.Натощак или через 3 часа после еды;

4.Во время подъема температуры;

5.Количество крови: у взрослых 10 мл, 2 пробы из двух сосудов или двух участков одного сосуда (локтевой вены), у детей (в зависимости от возраста) –

1,5-5 мл. Кровь помещают во флаконы со специальной транспортной средой; 6. Кровь из подключичного катетера необходимо забирать только при по-

дозрении на катетер-ассоциированную инфекцию.

Диагностика сепсиса проводится бактериологическим методом с посе-

вом крови на специальные питательные среды в аэробных и анаэробных усло-

виях культивирования. Посев крови необходимо проводить несколько раз.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1.Световая микроскопия препаратов из чистых культур стафилококков, стрептококков и пневмококков, окрашенных по Граму.

2.Световая микроскопия нативных препаратов из крови больного сепсисом, окрашенных по Граму.

3.Схема бактериологического исследования крови больного с подозрением на аэробный сепсис.

I этап исследования.

Посев крови больного во флаконы со специальной средой для аэробного и анаэробного культивирования в соотношении 1:10; приготовление мазка крови, окрашивание по Граму, световая микроскопия.

Посевы инкубируют при 370С в течение 8-10 дней, ежедневно просматривая их.

II этап исследования (через 24-48 часов).

1)Изучение характера роста в жидкой питательной среде:

2)Приготовление мазков из жидкой питательной среды, окрашивание по Граму, микроскопия:

3)Высев на плотные питательные среды с целью получения чистой куль-

туры и определения антибиотикочувствительности. Посевы инкубируют при 370С 24-48 часов.

12