•с каждым циклом ПЦР количество ампликонов увеличивается экспоненциально (приближается к зависимости 2n, где n — число циклов). За 30-40 циклов амплификации в растворе накапливается 108 молекул ампликона

3стадия

высокоспецифичная детекция: используется флуоресцентный зонд – олигонуклеотид, комплементарный внутренней последовательности амплифицируемого фрагмента + флуоресцентная молекула и молекула-«гаситель». Из-за близости последних энергия переходит на

в силу близости флуорофора и «гасителя» энергия, поглощенная флуорофором, переходит на «гасителя»; при этом сигнал флуоресценции отсутствует

http://www.ld.ru/PCR/ilist-4314.html

Детекция ампликонов в агарозном геле

•Детекция НК основана на использовании веществ, активирующих свою способность к флуоресценции в результате присоединения к ДНК . В качестве основного представителя применяется бромистый этидий. Этот способ детекции основан на том факте, что флуоресценция бромистого этидия под действием ультрафиолетового излучения значительно возрастает при их внедрении в двухцепочечные молекулы ДНК.

•Для разделения нуклеиновых кислот применяют различные концентрации геля, в зависимости от длины исследуемой НК.

•Агарозный гель позволяет идентифицировать фрагменты до 2 т.п.н. (2 т.н.) и более