Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

Иллюстрационное пособие по общей микробиологии

.pdf
Скачиваний:
81
Добавлен:
29.06.2023
Размер:
21.12 Mб
Скачать

531

 

Окуляр

 

Тубус

 

Тубусодержатель

Револьвер

 

 

Штатив

Объективы

 

Предметный

Корпус

столик

 

Конденсор

Макрометрический

винт

 

Зеркало

 

 

Микрометрический

 

винт

 

Основание

Устройство светового микроскопа.

Иммерсионное масло.

Нанесение на препарат иммерсионного масла.

532

Микроскопирование препарата с иммерсионной системой.

Грамположительные (синие) и грамотрицательные (розовые) клетки при иммерсионной микроскопии.

533

Тема 3: Приготовление препарата для микроскопического исследования. Окраска препарата по Граму.

Цель занятия: Обучить студентов методике приготовления препарата для микроскопического исследования и технике окраски препарата по Граму.

Задачи занятия:

1.Освоение студентами методики приготовления препаратов для микроскопического исследования.

2.Освоение методики окраски препарата по Граму.

После изучения темы студент должен:

знать:

-правила приготовления препаратов для микроскопического исследования;

уметь:

-пользоваться световым микроскопом;

владеть:

-методикой окраски препарата по Граму;

-техникой микроскопирования с иммерсионной системой.

Справочные материалы

Приготовление препаратов. Для приготовления препарата на обезжиренное предметное стекло наносят каплю воды или изотонического раствора хлорида натрия, в которую бактериологической петлей вносят исследуемый материал и круговыми движениями петли распределяют его таким образом, чтобы получить тонкий и равномерный мазок диаметром 1-1,5 см. Если исследуют жидкий материал, то его наносят на предметное стекло непосредственно петлей и готовят мазок. После приготовления препарата петлю прокаливают в пламени спиртовки. Для приготовления препарата из жидкой микробной культуры можно использовать пастеровскую пипетку, которую после нанесения капли на стекло помещают в емкость с дезинфицирующим раствором. Приготовленные мазки высушивают на воздухе при комнатной температуре. Для ускорения высыхания препарат можно осторожно подогреть в струе теплого воздуха высоко над пламенем спиртовки. Правильно высушенный препарат имеет вид сплошного белого налета на поверхности предметного стекла.

Фиксацию препарата осуществляют физическим методом: предметное стекло медленно проводят 3 раза через пламя спиртовки.

Методика окрашивания бактерий по Граму:

1.На фиксированный препарат наносят несколько капель раствора генцианового фиолетового или помещают полоску фильтровальной бумаги, на которую наливают раствор красителя. Краситель выдерживают в течение 1-2 минут, после чего избыток красителя сливают или снимают фильтровальную бумагу.

2.Не промывая препарата, наносят несколько капель раствора Люголя и выдерживают в течение 1-2 минут до почернения препарата. Избыток красителя сливают.

3.На препарат наносят несколько капель этилового спирта (96%) и выдерживают в течение 30 секунд. После этого спирт сливают, препарат промывают водой, избыток воды сливают.

534

4.На препарат наносят несколько капель раствора фуксина и выдерживают в течение 1-2 минут. Избыток красителя смывают водой.

5.Препарат высушивают фильтровальной бумагой и досушивают на воздухе.

Порядок микроскопирования:

1.Зеркало микроскопа устанавливают в соответствии с освещением (естественное или искусственное) и под малым увеличением (объектив х40, окуляр х7) и поднятом конденсоре регулируют освещенность поля зрения.

2.На окрашенный препарат капают каплю иммерсионного масла и препарат устанавливают на предметный столик микроскопа (при необходимости препарат закрепляют держателями).

3.Обычный объектив микроскопа заменяют на иммерсионный (х90).

4.Наблюдая сбоку, с помощью макрометрического винта осторожно опускают тубус до соприкосновения иммерсионного объектива с маслом.

5.Наблюдая в окуляр и осторожно поворачивая макрометрический винт, определяют контуры микробных клеток и с помощью микрометрического винта добиваются их ясного изображения. Изучают препарат.

6.Поднимают тубус и убирают препарат с предметного столика. Объектив протирают мягкой салфеткой, смоченной бензином.

7.Револьвер устанавливают в нейтральное положение, подкладывают под него салфетку, опускают револьвер и конденсор.

Самостоятельная работа.

На практическом занятии студенты готовят препараты грамположительных и грамотрицательных бактерий, окрашивают их по Граму и микроскопируют с иммерсией.

Иллюстративный материал

Рабочее место для окрашивания препаратов.

535

5

1

6

2

7

3

4

8

Этапы приготовления препаратов для микроскопического исследования.

Этапы окраски препарата по Граму.

536

Нанесение на предметное стекло воды.

Отбор культуры с питательной среды.

Фиксирование препарата.

537

Смачивание водой бумажки Синева.

Нанесение раствора Люголя.

Нанесение спирта.

538

Промывание препарата водой.

Нанесение раствора фуксина.

Промывание препарата.

539

Высушивание препарата.

Нанесение на препарат иммерсионного масла.

Микроскопирование препарата с иммерсионной системой.

540

Тема 4: Питательные среды. Посев микроорганизмов на плотные и в жидкие питательные среды.

Цели занятия: Познакомить студентов с классификацией питательных сред. Обучить студентов технике посева микроорганизмов в жидкие и на плотные питательные среды.

Задачи занятия:

1.Ознакомление студентов с микробиологическими питательными средами.

2.Овладение студентами техники посева микроорганизмов в жидкие и на плотные питательные среды.

После изучения темы студент должен:

знать:

- классификацию питательных сред; - правила посева культур на плотные и в жидкие питательные среды;

уметь:

- пользоваться бактериологической петлей;

владеть:

- методикой посева культур в жидкие и на плотные питательные среды; - микробиологическим понятийным аппаратом.

Справочные материалы

Питательные среды, их классификация.

Микроорганизмы культивируют на питательных средах. Питательные среды подразделяются на группы в зависимости от свойств.

По физическому состоянию питательные среды подразделяются на:

-жидкие среды;

-полужидкие среды;

-твердые (плотные) среды;

Жидкие среды представляют собой настои, отвары, бульоны, приготовленные на основе мяса, рыбы, овощей (естественные среды), а также композиции определенных концентраций химических соединений (искусственные среды). Полужидкие среды получают путем добавления к жидким средам 0,5-0,9% агар-агара (желеобразующее вещество, получаемое из морских водорослей). К плотным питательным средам относят среды, содержащие 2-3% агара.

По сложности питательные среды подразделяются на:

-простые, или обычные среды (пептонная вода, мясо-пептонный бульон, мясо-пептонный агар);

-сложные, или специальные среды (кровяной агар, асцитический агар и бульон, мясо-пептонный сахарный бульон, сывороточный агар и бульон, свернутая сыворотка, кровяной бульон).

По происхождению питательные среды подразделяются на:

-естественные среды;

-полусинтетические среды;

-синтетические среды.

Естественные питательные среды - это природные органические среды непостоянного состава, которые включают продукты животного или растительного