БИОХИМИЯ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ И КОСТНОЙ ТКАНИ
.pdf«БИОХИМИЯ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ И КОСТНОЙ ТКАНИ»
План
1.Особенности структурной организации и функции соединительной ткани.
2.Особенности первичной и пространственной структуры коллагена.
3.Синтез коллагена: этапы внутриклеточного синтеза и: формирование коллагеновых фибрилл вне клетки.
4.Катаболизм коллагена. Нарушения обмена коллагена и его биохимическая диагностика.
5.Эластин: особенности структуры и функции. Синтез и распад эластина.
6.Структурная организация межклеточного матрикса:
Мукополисахаридозы.
7.Функции и структурная организация костной ткани: клетки,
минеральные и органические компоненты костной ткани, их особенности и
биологические функции.
8.Современные представления о механизмах минерализации и остеокластной резорбции кости.
9.Ремодулирование костной ткани. Влияние гормонов и витаминов на интенсивность обновления костной ткани.
Соединительная ткань - ткань, состоящая из клеток, волокон и основного вещества, составляет 50% от веса тела. Все разновидности соединительной ткани, несмотря на их морфологические различия, построены по общим, единым принципам.
(I –тучная клетка, IIретикулиновые
|
волокна, |
|
III –эластическое |
|
волокно, |
|
V – коллагеновое |
|
волокно, |
Рис. 1. Строение соединительной ткани по А.И.Слуцкому |
V –фибробласт). |
|
Особенности соединительной ткани:
•небольшое число клеток, расположенных друг от друга на значительном расстоянии;
•много межклеточного матрикса;
•много фибриллярных белков;
•наличие волокнистых структур;
наличие протеогликанов.
Рис. 2. Структурная организация соединительной ткани
Функции соединительной ткани в организме:
1.Опорная – каркас органов, обеспечение формы.
2.Непрерывность тканей – межклеточный матрикс.
3.Механическая прочность – кости, хрящи, связки, фасции, апоневрозы, зубы.
4.Барьерная – ограничивает очаг воспаления (коллаген).
5.Защитная – тканевые макрофаги.
6.Пластическая – закрытие дефектов тканей.
7.Поддержание водно-электролитного обмена- протеогликаны и глюкозамингликаны
8.Создание высокоспециализированных структур (кости, хрящи,
сухожилия, базальные мембраны).
Фибриллы коллагена обладают огромной прочностью и практически нерастяжимы. Они могут выдерживать нагрузку, в 10 000 раз превышающую их собственный вес. По прочности коллагеновые фибриллы превосходят прочность стальной проволоки того же сечения.
Структурные
белки
Семейства коллагена и эластина
Неколлагеновые (специализированные)
- коллаген |
|
|
|
|
|
||
- эластин |
адгезивные |
|
антиадгезивные |
||||
|
|
|
|
|
|
|
- остеонектин |
в клетке |
|
|
в мембране клетки |
|
|
вне клетки |
- тенасцин |
(цитоскелет) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
- тромбоспондин |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
- талин |
|
- интегрины |
|
|
- фибронектин |
||
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
- винкулин |
- ламинин |
|
|
- α-актин |
- нидоген |
|
|
Рис. 3. Классификация структурных белков соединительной ткани |
|
Особенности первичной и пространственной структуры |
коллагена.
Коллагены - семейство родственных фибриллярных белков, секретируемых клетками соединительной ткани. Коллагены – самые распространенные белки не только межклеточного матрикса, но и организма в целом, они составляют около ¼ всех белков организма человекаи обеспечивают сопротивление растяжению в отличие от протеогликанов, которые противодействуют сжатию.
Молекулы коллагена состоят из трех полипептидных цепей,
называемых α-цепями, большинство из которых насчитывает 1000 аминокислотных остатков.
Первичная структураколлагена— одиночная полипептидная α-
цепь, к которой присоединен дисахарид (глюкоза + галактоза).
Особенности аминокислотного состава коллагена |
|
||
• |
ГЛИ |
– 30%, АЛА |
– 10%, |
• |
ПРО и оксиПРО |
– 20%, другие АК |
– 40%, |
• |
отсутствует триптофан и цистеин, содержится |
очень мало |
гистидина, метионина и тирозина.
Полипептидную цепь коллагена можно представить как последовательность триплетов: ГЛИ-Х- Y, чаще всего в положении Х
– стоит пролин, а в положении Y- оксипролин. Каждая из этих аминокислот имеет большое значение для формирования коллагеновых фибрилл.
Вторичная структура коллагена - левозакрученная α-спираль,
которая отличается от α-спирали глобулярных белков тем, что стабилизирована не за счет водородных связей, а силами стерического
отталкивания пирролидиновых колец в остатках пролина ( пролин и оксипролин относятся к иминокислотам и не образуют водородные связи). На один виток спирали приходится 3 аминокислоты, а не 3,6как это характерно для вторичной структуры глобулярных белков, поэтому в цепи глицин всегда находится над глицином, а пролин, благодаря своей структуре, вызывает изгибы в полипептидной цепи,обеспечивая левозакрученную спиральную конформацию.
Третичная структура коллагена - правозакрученная суперспираль из трех α спиралей, которую часто называют тропоколлагеном. Цепи удерживаются друг около друга водородными связями. Глицин, имеющий вместо радикала атом водорода,позволяет цепям плотно прилегать друг к другу, способствует образованию линейной молекулы тропоколлагена. Дополнительную стабильность тройной спирали (тропоколлагену) придает наличие большого количества остатков пролина, вокруг которых невозможно врaщение полипептидной цепи, и остатков гидроксипролина, образующего внутримолекулярные водородные связи. Пролин и гидроксипролин ограничивают вращение полипептидного стержня и увеличивают стабильность тройной спирали.
Рис.4. Строение молекулы тропоколлагена
Этапы синтеза и созревания коллагена
Синтез и созревание коллагена – сложный многоэтапный процесс, начинающийся в клетке, а завершающийся в межклеточном матриксе. Включает в себя целый ряд посттрансляционных изменений.
I этап. Синтез на полирибосомах, связанных с мембранами ЭР, препро-α-цепей, содержащих на N –конце гидрофобный «сигнальный» пептид и дополнительные участки N- и С –концевые пропептиды.
Рис. 5. Строение препро-α-цепей коллагена.
II этап. Посттрансляционная модификация - гидроксилирование лизина и пролина (ферменты: лизил- и пролилгидроксилазы). В этой реакции используются кислород и α-кетоглутарат; в качестве кофакторов участвуют ион Fe+2 и аскорбиновая кислота. Гидроксилирование пролина необходимо для стабилизации тройной спирали коллагена (ОН-группы гидроксипролина участвуют в образовании водородных связей), а гидроксилирование лизина очень важно для последующего образования ковалентных связей между молекулами коллагена при сборке коллагеновых фибрилл.
III этап. Гликозилирование гидроксилизина: после завершения гидроксилирования при участии специфических гликозилтрансфераз в состав молекулы проколлагена вводятся углеводные группы. Чаще всего этими углеводами служат галактоза или дисахарид галактозилглюкоза. Они образуют ковалентную 0-гликозидную связь с 5-ОН-группой гидроксилизина.
Рис. 6. Углеводные компоненты коллагена
IV этап. Образование тройной спирали молекулы проколлагена – после отщепления частичным протеолизом «сигнального» пептида.
V этап. Образование молекулы тропоколлагена:
▪перемещение молекулы проколлагена из ЭР в аппарат Гольджи;
▪включение в секреторные пузырьки и секреция в межклеточный матрикс; ▪ отщепление N- и С –концевых пропептидов под действием Е: проколлагенпептидаз у коллагенов I, II, и III типов.
VI этап. Фибриллогенез –это процесс самосборки коллагеновых
фибрилл, фиксированных межмолекулярными ковалентными связями (сшивками), которые встречаются только в коллагене и эластине. Коллагеновые фибриллы обладают поперечной исчерченностью — чередованием темных и светлых участков.
Рис. 7. Дезаминирование остатков лизина в коллагене и образование межмолекулярных сшивок.
В формировании этих связей участвуют остатки лизина и гидроксилизина и их альдегидные производные, которые образуются в результате окислительного дезаминирования с участием Cu2+ содержащего фермента лизилоксидазы в присутствии витаминов РР и В6.
Далее остаток аллизина одной молекулы коллагена реагирует с аминогруппой остатка лизина другой молекулы коллагена с образованием ковалентной сшивки. Основа структурной организации коллагеновых фибрилл – ступенчато расположенные параллельные ряды молекул тропоколлагена, которые сдвинуты на ¼ относительно друг друга. Количество поперечных связей в фибриллах коллагена зависит от функции и возраста ткани. С возрастом количество поперечных связей в фибриллах коллагена возрастает, что приводит к замедлению скорости его обмена у пожилых и старых людей.
VII этап. Агрегация фибрилл и образование коллагенового волокна: в
результате спонтанного, специфического соединения между собой тропоколлагеновых фибрилл за счет ковалентных и водородных связей. Коллагеновые волокна состоят из пучков параллельно расположенных фибрилл толщиной в среднем 50—100 нм, связанных между собой гликозаминогликанами и протеогликанами. Толщина волокон зависит от числа фибрилл.
У коллагенов некоторых типов концевые пропептиды не отщепляются, так как они образуют не фибриллы, а сетеподобные структуры, в формировании которых важную роль играют концевые N- и С –пропептиды. В результате образуется молекула тропоколлагена.
Коллагеновые волокна - основные элементы, обеспечивающие механическую прочность соединительной ткани.
Рис. 8. Агрегация фибрилл и образование коллагенового волокна
Локализация различных стадий созревания коллагена
|
Внутриклеточно |
|
Внеклеточно |
|
|
|
|
|
|
||
1. |
Удаление сигнального пептида |
1. Удаление дополнительных пептидов |
|
||
2. |
Гидроксилирование ПРО и ЛИЗ |
2. Образование коллагеновых волокон с |
|||
3.Гликозилирование ГидроксиЛИЗ |
поперечной исчерченностью |
|
|||
4.Образование внутри и |
3.Окислительное |
дезаминирование |
|||
межцепочечных связей в молекуле |
аминогрупп |
ЛИЗ, |
гидроксиЛИЗ |
с |
|
проколлагена |
образованием альдегидных групп. |
|
|||
|
|
4. Образование поперечных связей в |
|||
|
|
фибриллах коллагена |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Секреция
Рис. 9. Схема биосинтеза коллагена
Классификация коллагенов по видам структур, которые они образуют
Структура |
|
|
Характеристика |
|
|
|
||
|
Тип |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
Фибриллы |
I,II,III |
95 % всего |
коллагена |
в |
организме |
|||
|
V, ХI |
человека составляют коллагены I, II и III |
||||||
|
|
типов, которые образуют очень прочные |
||||||
|
|
фибриллы. |
Значительное |
содержание |
||||
|
|
именно |
этих |
типов |
|
коллагена |
||
|
|
объясняется тем, что они являются |
||||||
|
|
основными |
компонентами |
органов и |
||||
|
|
тканей, |
которые |
испытывают |
||||
|
|
механическую |
нагрузку |
(кости, |
||||
|
|
сухожилия, хрящи, межпозвоночные |
||||||
|
|
диски, кровеносные сосуды), а также |
||||||
|
|
участвуют |
в |
образовании |
стромы |
|||
|
|
паренхиматозных |
органов. |
Поэтому |
||||
|
|
коллагены |
I, II и |
III |
типов |
часто |
||
|
|
называют интерстициальными. К классу |
||||||
|
|
фибриллобразующих |
относят |
также |
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
минорные коллагены V и ХI типов. |
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|||||
Ассоциированн |
|
IX,XII,ХI |
|
Коллагены |
этого |
класса сами |
|||||
ые |
с |
V, |
фибрилл не формируют, |
но связываясь |
|||||||
|
|
XVI, XIX |
с |
фибриллярными |
коллагенами, |
|
|||||
|
|
|
ограничивают длину, толщину фибрилл |
|
|||||||
|
|
|
и |
обеспечивают |
их |
ориентацию. |
|||||
|
|
|
Особенностью |
|
|
коллагенов, |
|
||||
|
|
|
ассоциированных |
с |
фибриллами,, |
||||||
|
|
|
является наличие в их структуре |
|
|||||||
|
|
|
глобулярных и фибриллярных доменов. |
|
|||||||
|
|
|
|
|
|||||||
Сети |
|
IV,VIII, |
|
Коллаген IV типа является ключевым |
|||||||
|
|
X |
структурным |
компонентом |
базальных |
||||||
|
|
|
мембран. Пептидные цепи коллагена IV |
||||||||
|
|
|
типа после секреции не подвергаются |
||||||||
|
|
|
протеолитической |
модификации |
и |
||||||
|
|
|
поэтому сохраняют структуру N-и С- |
||||||||
|
|
|
концевых глобулярных пептидов. В |
||||||||
|
|
|
базальной |
|
мембране |
формируется |
|||||
|
|
|
сетчатая |
структура |
с гексагональными |
||||||
|
|
|
ячейками. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Коллаген VIII и Х типа относят к |
|||||||
|
|
|
короткоцепочечным |
|
коллагенам. |
||||||
|
|
|
Преимущественная |
|
|
локализация |
|||||
|
|
|
коллагена |
|
VIII |
типа—кровеносные |
|||||
|
|
|
сосуды и мембраны эндотелия роговицы. |
||||||||
|
|
|
Молекулы этого коллагена - тетрамеры, |
||||||||
|
|
|
из |
которых |
образуются |
гексагональные |
|||||
|
|
|
решетки, |
обеспечивающие прозрачность |
|||||||
|
|
|
роговицы. |
а |
также |
участие |
в |
||||
|
|
|
преломлении световых лучей. |
|
|||||||
|
|
|
|
|
|||||||
Микрофибрил |
|
VI |
|
Коллаген VI типакоротко цепочный |
|||||||
лы |
|
|
белок. |
Образует |
микрофибриллы, |
||||||
|
|
|
которые располагаются между крупными |
||||||||
|
|
|
фибриллами |
|
|
интерстициальных |
|||||
|
|
|
коллагенов. Широко представлен в |
||||||||
|
|
|
хрящевом матриксе, но больше всего его |
||||||||
|
|
|
в межпозвоночных дисках. |
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
«Заякоренн |
|
VII |
|
Коллаген |
VII |
типа |
— |
основной |
|||
ые» |
|
|
структурный компонент «заякоренных» |
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
фибриллы |
|
фибрилл. |
Эти фибриллы обеспечивают |
||
|
|
присоединение эпидермиса к дерме: |
|||
|
|
одним |
концом |
они |
могут |
|
|
присоединяться к lamina densa, на |
|||
|
|
которой лежит кожный эпителий, а |
|||
|
|
другой их конец проникает в более |
|||
|
|
глубокие субэпидермальные слои кожи |
|||
|
|
и связывается там со структурами, |
|||
|
|
называемыми "якорные диски". |
|
||
|
|
|
|
|
|
Катаболизм коллагена
Как и любой белок коллаген функционирует в организме определенное время, а затем распадается. Его относят к медленно обменивающимся белкам. Т1/2 составляет недели или месяцы. Разрушение коллагеновых волокон осуществляется активными формами кислорода (АФК) и/или ферментативно (гидролитически).
Нативный коллаген не гидролизуется обычными пептидгидролазами. Основной фермент его катаболизма – коллагеназа, которая расщепляет пептидные связи в определенных участках спирализованной цепи коллагена .Известны два типа коллагеназ.
Тканевая коллагеназа присутствует у человека в различных органах и тканях. В норме она синтезируется клетками соединительной ткани, прежде всего фибробластами и макрофагами. Тканевая коллагеназа – это металлозависимый фермент, который содержит ионы Zn2+ в активном центре; обладает высокой специфичностью -расщепляет тройную спираль коллагена примерно на ¼ расстояния от С-конца между остатками глицина и лейцина (или изолейцина).
Рис.10. Действие тканевой коллагеназы
Образующиеся фрагменты коллагена растворимы в воде, при температуре тела они спонтанно денатурируются и становятся доступными для действия других протеолитических ферментов. Активность коллагеназы зависит от соотношения в межклеточном матриксе ее активаторов и ингибиторов. Среди активаторов особую роль играют плазмин, калликреин и катепсин В.
Бактериальная коллагеназа синтезируется некоторыми микроорганизмами. Например, CIostridiumhistolyticum(возбудитель