УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ ПО ЦИТОЛОГИИ, ЭМБРИОЛОГИИ И ОБЩЕЙ ГИСТОЛОГИИ (1 СЕМЕСТР)
.pdf
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ
«РОСТОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»
МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Кафедра гистологии, цитологии и эмбриологии
УЧ Е Б Н О Е
ПО С О Б И Е
КПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ ПО ЦИТОЛОГИИ, ЭМБРИОЛОГИИ
ИОБЩЕЙ ГИСТОЛОГИИ
Ростов-на-Дону
2015
ФГБОУ ВО
«РОСТОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»
МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Кафедра гистологии, цитологии и эмбриологии
УЧ Е Б Н О Е
ПО С О Б И Е
КПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ ПО ЦИТОЛОГИИ, ЭМБРИОЛОГИИ
ИОБЩЕЙ ГИСТОЛОГИИ
Ростов-на-Дону
2015
УДК 611-018(07.07)
Издается по решению редакционно-издательского состава и ЦМК Ростовского государственного медицинского университета
Учебное пособие к практическим занятиям по цитологии, эмбриологии и общей гистологии.
Под общей редакцией д.м.н., профессора П.А.Хлопонина. Ростов-на-Дону, РостГМУ, 2015, стр.66.
В подготовке к изданию учебного пособия к практическим занятиям по цитологии, эмбриологии и общей гистологии для студентов всех факультетов Ростовского государственного медицинского университета принимали участие: зав. кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии РостГМУ, профессор П.А. Хлопонин, доценты В.И. Сулима, А.И. Новиков, Л.И. Маркво, О.Ю.Патюченко, В.Н.Давиденко, А.А.Созыкин, ассистент Т.В. Архипова.
«Учебное пособие к практическим занятиям по цитологии, эмбриологии и общей гистологии» представляет материалы, предназначенные студентам I-II курсов Ростовского государственного медицинского университета, для самостоятельной работы практических занятиях и для самостоятельной подготовки по тематическим вопросам дисциплины во внеаудиторное время. В данное пособие включена система заданий и упражнений для выработки практических навыков в работе с микропрепаратами и электронными микрофотографиями. Основные (контрольные) вопросы охватывают материал каждой темы и позволяют студентам самостоятельно определить степень усвоения ими теоретического и практического материала. Предлагаемая студентам ориентировочная основа действий при изучении гистологических микропрепаратов включает не только название препарата, его окраску, увеличение, детали строения клеток и тканей, но и рисунки, схемы в черно-белом изображении, электронные микрофотографии из лучших отечественных и зарубежных атласов по гистологии и эмбриологии. Пособие позволяет студентам планировать свою работу по освоению каждой темы, а также правильно идентифицировать учебные препараты.
Рецензенты: зав. кафедрой патологической анатомии РостГМУ, д.м.н., профессор И.С. Дерижанова;
доцент кафедры общей биологии и генетики РостГМУ,
к.б.н., С.С. Петров.
@ Ростовский государственный медицинский университет, 2015.
СОДЕРЖАНИЕ
Микроскопическая техника………………………….....5
Тема № 1 «Вводное занятие»……………………….15
Тема № 2 «Цитология»………………………………19
Тема № 3 «Общая эмбриология»…………………...26
Тема № 4 «Эпителиальные ткани»…………………28
Тема № 5 «Кровь и лимфа»………………………….34
Тема № 6 «Соединительные ткани»………………..41
Тема № 7 «Скелетные ткани (хрящевые, костные ткани)»……………46
Тема № 8 «Мышечные ткани»………………………52
Тема № 9 «Нервная ткань»……………………….....57
4
МИКРОСКОПИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА
При микроскопировании с помощью биологического микроскопа исследование объекта проводится в проходящем свете и поэтому возможно только при полной прозрачности препарата.
Вбиологическом микроскопе различают следующие части:
1)оптические, с помощью которых получают увеличенное изображение предмета;
2)осветительные, служащие для направления света на препарат и для регулирования силы освещения;
3)механические, служащие оправой для оптических и осветительных частей, а также для перемещения их по отношению к препарату.
Коптическим частям относятся:
а) окуляры;
б) объективы.
К осветительным частям относятся:
а) зеркало; б) конденсор;
в) ирисовая диафрагма.
1. Механические части
К ним относятся:
а) основание штатива; б) тубус; в) тубусодержатель;
г) револьвер; д) столик для микроскопирования с клеммами;
е) микрометрический винт; ж) макрометрический винт (кремальера).
Тубус. В верхней части тубуса помещается окуляр. В нижней части находится подвижный револьвер, в гнезда которого ввинчены объективы. Тубус перемещается вверх и вниз вращениями макро- и микрометрического винтов тубусодержателя.
Макрометрический винт (кремальера) служит для быстрой наводки на фокус, т. е. для получения отчетливого изображения рассматриваемого препарата. Им пользуются главным образом при работе с объективом малого увеличения.
5
Микрометрический винт служит для последующей более четкой установки на фокус и дает возможность при больших увеличениях рассматривать препарат в глубину, т. е. в разных его плоскостях.
При вращении на себя винты поднимают тубус, при вращении от себя — опускают.
2. Осветительные части
Зеркало (плосковогнутое) служит для собирания лучей света и направления их на препарат снизу. Вогнутая поверхность дает более концентрированный пучок света.
Конденсор служит для конденсации («сгущения») лучей света, направляемых зеркалом на рассматриваемый объект.
Диафрагма регулирует четкость изображения деталей препарата. Движением металлического рычажка просвет диафрагмы можно сузить и расширить, так как она состоит из отдельных металлических пластинок (диафрагмаирис). Диафрагмой пользуются обычно при работе с объективом «большого увеличения» т. е. 40х.
3.Оптические части
Кним относятся окуляры и объективы. Объектив— это система линз, которая увеличивает изображение объекта, оно является истинным и обратным.
Окуляр — система линз, увеличивающая еще в несколько (7, 10, 15) раз первичное изображение объекта, полученное с помощью объектива. Увеличение микроскопа равно произведению увеличения, даваемого объективом, на увеличение окуляра (7х8 – «малое увеличение», 7х40 – «большое увеличение»).
Свойства объектива
1.Увеличивающая способность - способность давать увеличенное во много раз изображение объекта. В биологическом микроскопе чаще всего применяются объективы, дающие увеличение в 8 раз (объектив «малого увеличения»), в 40 раз (объектив «большого увеличения»), в 90, 100 и более раз («иммерсионный объектив»).
2.Воспроизводящая способность
(геометрическое совершенство изображения).
Для того, чтобы получить правильное представление о строении изучаемого объекта необходимо получить идеально четкое его изображение.
В оптических микроскопах геометрическое совершенство изображения резко снижается вследствие так называемых аберраций (хроматической, сфери-
6
ческой и других), возникновение которых связано с физическими свойствами линз объектива.
Сферическая аберрация проявляется размытостью контуров изображения, а хроматическая — появлением вокруг контуров изображения цветной каймы в виде радуги.
Объективы, в которых в значительной степени устранены сферическая и отчасти хроматическая аберрации, называются ахроматами.
Объективы с почти полностью устраненными сферической и хроматической аберрациями называются апохроматами. Однако даже в самых совершенных объективах аберрация не может быть устранена полностью.
3. Разрешающая способность объектива — это способность различать максимальное количество подробностей в объекте.
При одной и той же силе увеличения разрешающая способность различных объективов различна. Разрешающая способность находится в прямой зависимости от величины так называемого угла отверстия — апертуры (т. е. величины угла между крайними лучами, падающими от каждой точки ис-
следуемого объекта в фронтальную линзу объектива) и от длины волны световых лучей. Чем короче длина волны, тем больше разрешающая способность. Наибольшую разрешающую способность имеют иммерсионные объективы, их применяют, когда нужно рассмотреть особенно мелкие объекты и детали препарата.
При употреблении иммерсионных объективов на покровное стекло наносят каплю прозрачного кедрового масла (так называемого иммерсионного масла), в которое погружают фронтальную линзу объектива. Иммерсионное масло преломляет лучи света почти так же, как и стекло препарата. Поэтому лучи, идущие через стекло препарата в объектив, не рассеиваются перед объективом.
Это позволяет получить значительно больший угол отверстия, чем при «сухих» системах, и значительно повысить таким образом разрешающую способность объектива.
Минимальное расстояние, при котором две точки, располагающиеся рядом, не сливаются в одну, а изображаются раздельно, называются линейным пределом разрешения. Этот предел даже в самых совершенных оптических системах не бывает меньше 0,2 микрометра, перешагнуть этот предел в оптическом микроскопе не удается. Только электронный микроскоп, в котором роль лучей света выполняют потоки электронов с очень короткой длиной волны, позволяет преодолеть этот порог. Разрешающая способность электронного микроскопа во много раз больше.
7
Рис. 1. Световой микроскоп МБС-11 и его составляющие: 1) окуляр, 2) тубус, 3) револьвер, 4) объектив, 5) предметный столик, 6) светофильтр, 7) зеркало, 8) винт конденсора, 9) микровинт, 10) макрометрический винт, 11) штатив микроскопа.
Метод исследования биологических объектов с помощью светового микроскопа
При исследовании клеток и тканей с помощью обычного биологического микроскопа необходимо подвергнуть их предварительной обработке. Это вызвано тем, что показатели преломления отдельных деталей живой структуры почти одинаковы и не дают четкого микроскопического изображения. Имеются методы прижизненного (витального) и посмертного (мортального) исследования биологических объектов.
Для окраски живого объекта применяют красители, обладающие минимальной токсичностью, так называемые витальные красители. Краситель вводят животному либо внутривенно (краска наиболее полно проникает в органы исследуемого животного), либо погружают живую ткань в раствор красителя.
Прижизненные красители бывают кислыми (трипановая синь, литиевый кармин) или основными (янус зеленый, метиленовая синь, нейтральный крас-
8
ный); и те, и другие применяются, как правило, в очень слабых разведениях
(1:1000, 1:5000 и т. п.).
Более широкое применение имеет микроскопическое исследование убитых объектов, из которых готовятся постоянные гистологические препараты.
Метод изготовления постоянных гистологических препаратов
Материалом, из которого изготовляются постоянные гистологические препараты, служат небольшие (обычно не больше 1 см3) кусочки органов, которые берут либо от трупа (не позже 24 часов после смерти), либо от живого организма (например, при операциях, при биопсии — с диагностической целью).
Процесс приготовления постоянного гистологического препарата складывается из нескольких этапов:
-взятие материала, фиксация;
-обезвоживание, просветление;
-уплотнение объекта заливкой в плотные среды или замораживанием;
-изготовление срезов на микротоме;
-окрашивание срезов;
-заключение в окончательную среду.
Фиксация производится с целью сохранения прижизненной структуры тканей, для предохранения от разложения, а также для уплотнения. При пропитывании тканей фиксатором в них происходит свертывание (коагуляция) белков.
Фиксаторы делят на простые и сложные.
Простые фиксаторы: 10-12-15% растворы формалина, спирт, 0,5-1-2% растворы осмиевой кислоты.
Сложные фиксаторы: жидкость Карнуа, в состав которой входят спирт, хлороформ и ледяная уксусная кислота, жидкость Ценкера, в состав которой входят растворы сулемы, двухромовокислого калия и уксусной кислоты; жидкость Буэна, состоящая из насыщенного водного раствора пикриновой кислоты, формалина и ледяной уксусной кислоты.
Количество фиксатора должно в десятки раз превосходить объем фиксируемого кусочка. Выбор фиксатора определяется целями исследования и характером фиксируемого материала. В одних фиксаторах объект может сохраняться неопределенно долгое время, в других — не более нескольких часов. После фиксации в большинстве случаев фиксированные кусочки промываются в проточной водопроводной воде.
Обезвоживание кусочка в спиртах восходящей крепости (50°, 70°, 900, 100°), удаление спирта и просветление объекта ксилолом, хлороформом и др.
9