Правила микроскопирования

ПРАВИЛА МИКРОСКОПИРОВАНИЯ. ЦИТОЛОГИЯ.

МИКРОСКОП.

Правила работы с микроскопом:

А. на малом увеличении:

1)Привести микроскоп в рабочее положение, осветив поле зрения и поставив объектив на малое увеличение.

2)Положить препарат покровным стеклом вверх.

3)Вращая макровинт, опустить объектив на 0,5см от препарата; за передвижением наблюдать СБОКУ

4)Наблюдая в окуляр, с помощью макровинта поднимать объектив до

появления изображения.

Б. на большом увеличении:

1)Препарат расположить так, чтобы объект находился в центре поля зрения.

2)Не касаясь рукой препарата, вращая револьвер до щелчка, заменить малое увеличение на большое.

3)Глядя в окуляр, вращая макровинт НА себя, очень медленно поднимать объектив до появления изображения.

4)С помощью винта получить чёткое изображение.

5)При рассмотрении препарата нужно слегка вращать микровинт, что позволяет рассмотреть как глубокие, так и поверхностные слои.

6)По окончании работы с препаратом поставить микроскоп в нейтральное положение, после этого убрать препарат с предметного столика.

Этапы приготовления препарата.

1)Взятие материала (см х см)

2)Фиксация – обработка(химическая или термическая), при которой сохраняется прижизненная структура тканей.

3)Отмывка – избыток фиксации; (отмыть буферным раствором)

4)Обезвоживание – необходимо для удаления воды и уплотнения тканей; используется раствор с возрастающей концентрацией.

5)Пропитка – производится для удаления остатков воды и замены её органической жидкостью (растворителями)

6)Заливка – кусок органа заливаю парафином.

7)Изготовление среза при помощи микротома ( от 5 до 7-6)

8)Окраска

1

9) Заключение под покровное стекло для длительного сохранения препарата.

Красители. Импрегнация.

КРАСИТЕЛИ:

1.Кислые

2.Основные

3.Нейтральные

Кислые – красят щелочную структуру (99% процентов препаратов окрашиваются эозином)

Эозин – тёмно-синий Оксифилия – способность щелочной структуры (цитоплазмы)

окрашиваться кислым красителем (эозином) в розовый цвет.

Основные красители.

Гематоксилин – тёмно-фиолетовый красит в фиолетовый. (базофильная структура)

Базофилия – способность кислой структуры (ядро) окрашиваться основным красителем (гематоксилином) в фиолетовый цвет.

Нейтральные красители окрашивают и кислые, и основные структуры.

Импрегнация – способность солей тяжёлых металлов осаждаться на структурах клеток.

ПОНЯТИЕ О КЛЕТКЕ.

Клеточная теория.

Авторы: Шлейден и Шванн Год: 1837-1838

Положения с расшифровкой:

1)«Клетка – наименьшая единица живого», т.к. клетка способна к воспроизведению(репродукции), использованию и трансформации энергии, метаболизму, чувствительности, адаптации и изменчивости.

2

2)«Сходство клеток разных организмов по строению». Сходство определяется одинаковостью общеклеточных функций, связанных с поддержанием самой живой системы ( синтез нуклеиновых кислот и белков, биоэнергетика клетки и др.)

3)«Размножение клеток путём деления исходной». У клеток эукариот единственным полноценным способом деления клетки является митоз – непрямое деление. Образуется аппарат клеточного деления, клеточное веретено. Митоз наблюдается у всех эукариот.

4)«Клетки как части целого организма». Многоклеточные организмы представляют собой сложные ансамбли специализированных клеток, объединённых в целостные, интегрированные системы тканей и органов, подчинённые и связанные межклеточными, гуморальными и нервными формами регуляции.

Плазмолемма – место обмена материала между клеткой и окружающей её средой.

1 – липиды

2– гидрофобная зона бислоя липидных молекул

3– интегральные белки мембраны

4– полисахариды гликокаликса

Цитоплазма.

Отделена от окружающей среды плазмолеммой; включает в себя гиалоплазму, органеллы и включения.

Гиалоплазма – матрикс цитоплазмы, истинная среда организма.

Мембранный транспорт – транспорт веществ сквозь клеточную мембрану в клетку или из клетки, осуществляемый с помощью различных механизмов.

Важнейшее свойство биологической мембраны состоит в её способности пропускать в клетку и из неё различные вещества. Это имеет большое значение для саморегуляции и поддержания постоянного состава клетки. Такая функция клеточной мембраны выполняется благодаря

3

избирательной проницаемости, т.е. способности пропускать одни вещества и не пропускать другие.

Виды:

1.Пассивный – транспорт веществ по градиенту концентрации, не требующий затрат энергии. Пассивно происходит транспорт гидрофобных веществ сквозь липидный бислой. Пассивно пропускают через себя вещества все белки-каналы и некоторые переносчики.

2.Активный – когда другие белки-переносчики (их иногда называют белки-насосы) переносят через мембрану вещества с затратами энергии, которая обычно поставляется при гидролизе АТФ. Этот вид транспорта осуществляется против градиента концентрации переносимого вещества.

3.Облегченный – характерен для гидрофильных молекул, которые переносятся через мембрану также по градиенту концентрации без затрат энергии, но с помощью специальных мембранных белковпереносчиков (например – транспорт глюкозы)

4.Эндоцитоз – процесс захвата материала внутрь клетки за счёт активности цитоскелета, лежащего под мембраной. Делится на фаго- и пиноцитоз.

5.Экзоцитоз – процесс, обратный эндоцитозу.

Неклеточные структуры.

-Межклеточное вещество

-Симпласт – крупные образования, состоящие из цитоплазмы с множеством ядер. Они возникают вторично в результате слияния отдельных клеток или же при делении одних ядер без деления цитоплазмы.

-Синцитий – после деления исходной клетки дочерние остаются

связанными друг с другом с помощью тонких цитоплазматических перемычек.

Включения – непостоянные структуры клетки, возникающие и исчезающие в зависимости от метаболизма клетки.

1.Трофические (белки, липиды, углеводы)

2.Секреторные (вырабатывает сама клетка для нужд организма; например - гормоны)

4

3.Экскреторные – продукты обмена, подлежащие удалению из клетки.

4.Пигментные – эндогенные, экзогенные (например – билирубин)

Межклеточные контакты.

Простые - сближение плазмолемм соседних клеток на расстояние 15-20 нм Сложные - небольшие парные специализированные участки

плазматических мембран двух соседних клеток. Виды:

1.Запирающие – плотный контакт

2.Сцепляющие – адгезивный поясок, фокальный контакт, десмосомы (механическая связь между клетками)

3.Коммуникационные – щелевые контакты (нексус – перенос ионов и мелких молекул от клетки к клетке), синапсы.

5