диссертации / 25

11

Установлено, что уровень оксида азота и состояние прооксидантной и анти-

оксидантной систем организма существенно изменяют активность перитонеаль-

ных и плацентарных макрофагов.

При изучении влияния L-NAME, ЛПС, эстрадиола и прогестерона, аналога токоферола trolox, супероксиддисмутазы на активность макрофагов, установлено,

что действие этих веществ зависит от места локализации макрофагов и наличия или отсутствия экспериментальной патологии беременности.

Установлено, что в плацентах крыс, получавших нитрит натрия, L-NAME,

альфа-токоферол при физиологической беременности, а также при НМПК,

наблюдаются изменения, приводящие к возникновению задержке внутриутробно-

го развития и гипоксии плода.

Установлены закономерности изменения образования NO и эритроцитарно-

го системогенеза у плодов и крысят, развивавшихся в условиях антенатальной ги-

поксии.

Установлено влияние донатора NO и альфа-токоферола, применяемых в условиях экспериментальной патологии беременности, на постнатальное развитие эритроцитарной системы.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Работа имеет значение для углубленного понимания механизмов, лежащих в основе регуляции работы системы мать - плод. Полученные результаты дают возможность расширить представления о роли оксида азота и альфа-токоферола в организме млекопитающих.

Особое внимание уделяется биологическим факторам воздействия на пла-

центарные макрофаги и макрофаги, образующие перитонеальное микроокруже-

12

ние органов репродуктивной системы. Полученные данные совершенствуют представление о роли NO, женских половых гормонов, антиоксидантов в регуля-

ции функции макрофагов при физиологической и патологической беременности.

Оценка влияния NO, женских половых гормонов, антиоксидантов на функции фа-

гоцитов как значимых продуцентов биологически активных веществ при патоло-

гической беременности открывает возможности разработки селективных методов коррекции функции макрофагов. Это обеспечит новые подходы к целенаправлен-

ной, патогенетически обоснованной терапии фетоплацентарной недостаточности,

улучшит перинатальные исходы у новорожденных.

Неблагоприятное влияние альфа-токоферола, используемого во время бере-

менности, на кровообращение в плаценте и состояние плода, ограничивает воз-

можности использования антиоксидантов для рациональной патогенетической те-

рапии фетоплацентарной недостаточности.

Имеется возможность в динамике проследить особенности эритроцитарного системогенеза в ранний период постнатального развития при физиологической беременности и беременности с НМПК. Проведена сравнительная оценка эффек-

тивности патогенетической терапии НМПК экзогенным NO и витамином Е с точ-

ки зрения влияния этих веществ на развитие эритроцитарной системы у плодов и в ранний постнатальный период. Дано теоретическое обоснование целесообраз-

ности применения препаратов – донаторов оксида азота и антиоксидантов для ле-

чения хронической фетоплацентарной недостаточности.

РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Результаты работы внедрены в учебный процесс (лекционный курс) ГБОУ

13

ВПО «Ивановская государственная медицинская академия» Министерства здра-

воохранения Российской Федерации на кафедре нормальной физиологии (Акт о внедрении предложения «Особенности функционирования системы мать - плод при воздействии донатора оксида азота и ингибитора его синтеза»), на кафедре патофизиологии, клинической патофизиологии и иммунологии (Акт о внедрении предложения «Особенности эритроцитарного системогенеза плодов и крысят,

развивавшихся при нарушении маточно-плацентарного кровообращения»), на ка-

федре фармакологии и клинической фармакологии (Акт о внедрении предложе-

ния «Особенности влияния альфа-токоферола на функциональную систему мать -

плод при неосложненной беременности»), в практику работы лаборатории клини-

ческой биохимии и генетики ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский ин-

ститут материнства и детства им. В. Н. Городкова» Министерства здравоохране-

ния Российской Федерации (Акт о внедрении предложения «Оценка влияния био-

логически активных веществ на функциональную активность макрофагов»).

МЕТОДОЛОГИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Моделирование экспериментальной патологии беременности. Уменьше-

ние количества сосудов, кровоснабжающих плод, позволяет получить наруше-

ние работы системы мать - плод в виде экспериментальной модели фетопла-

центарной недостаточности у здоровых животных.

Метод хронического эксперимента позволяет исследовать физиологиче-

ские и биохимические показатели жизнедеятельности организма при физиоло-

гической беременности и беременности с НМПК.

14

Фармакологические воздействие непосредственно на животных. Различ-

ные вещества по-разному влияют на состояние системы мать - плод. Это поз-

воляет изучать зависимость ее функционирования от изменений уровня раз-

личных факторов в организме.

Прямое воздействие на макрофаги биологически активными веществами.

Этот метод позволяет вмешиваться в естественную регуляцию работы фагоци-

тов и сравнить их функцию при физиологической беременности и беременно-

сти с НМПК.

Метод сравнения позволяет выявить сходства и различия в работе систе-

мы крови и показателях внутренней среды при физиологической беременности и беременности с НМПК.

Онтогенетическое изучение. Изучая развитие эритроцитарной системы у интактных крысят и у крысят, развивавшихся в условиях гипоксии, можно установить, какие изменения в ней являются физиологическими, а какие – па-

тофизиологическими.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1.Нитрит натрия и метиловый эфир L-аргинина при физиологической беремен-

ности противоположным образом меняют концентрацию оксида азота в крови беременных крыс, однонаправленно влияют на уровень свободнорадикальных процессов и активность перитонеальных макрофагов и разнонаправлено – на активность плацентарных фагоцитов. Вводимый при беременности альфа-

токоферол не влияет на фагоцитарную активность макрофагов, но существен-

но снижает ПОЛ.

15

2.Введение беременным крысам нитрита натрия, метилового эфира L-аргинина,

альфа-токоферола вызывает задержку внутриутробного развития плодов и возникновение внутриутробной гипоксии.

3.Экспериментальная патология беременности уменьшает образование оксида азота, стимулирует свободнорадикальные процессы в крови у беременных крыс, снижает активность перитонеальных макрофагов, но активирует пла-

центарные макрофаги. Эти изменения в материнском организме сопровожда-

ются нарушениями кровообращения в плаценте и задержкой развития плода.

4.Нарушение маточно-плацентарного кровообращения на фоне поступления донатора NO усугубляет морфологические изменения плаценты при сохраня-

ющейся гипоксии плода в условиях увеличения оксида азота и нитротирозина как в крови матери, так и плода. Введение метилового эфира L-аргинина при НМПК приводит к компенсаторному повышению уровня NO в крови у матери и плода, и уменьшает выраженность ЗВУР плода. Положительного эффекта от

длительного введения альфа-токоферола во время беременности при экспери-

ментальном нарушении кровообращения не отмечается.

5.Хроническая гипоксия плода в первые дни постнатального периода жизни крысят приводит к повышению содержания оксида азота в крови, способству-

ет стимуляции эритропоэза в красном костном мозге и печени. Активация эритроцитарной системы приводит впоследствии к нарушению ее функциони-

рования.

6.Поступление оксида азота в организм беременных крыс с НМПК предотвра-

щает нарушение функционирования эритроцитарной системы у их потомства

в постнатальном онтогенезе. Альфа-токоферол, вводимый в условиях экспе-

риментальной патологии беременности, не предотвращает отдаленные пост-

гипоксические нарушения эритрона у крысят.

16

СТЕПЕНЬ ДОСТОВЕРНОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ

Исследования проведены на здоровых животных, содержащихся в условиях специализированного вивария. Число животных в экспериментальных группах было достаточным для достижения достоверных результатов.

Полученные результаты обработаны с использованием различных статисти-

ческих методов: вариационный анализ, проверка вида распределения, использо-

вание параметрических и непараметрических статистических критериев.

АПРОБАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ

Материалы диссертации доложены и обсуждены на Республиканской науч-

но-практической конференции «Кардиологические проблемы в акушерстве, гине-

кологии и перинатологии» (Иваново, 2006), XX Съезде физиологического обще-

ства им. И. П. Павлова (Москва, 2007), ежегодных научно-практических конфе-

ренциях студентов и молодых ученых ИвГМА «Неделя науки» (Иваново, 2001 - 2006, 2010, 2011), III Конференции молодых ученых и студентов ФГБУ НИИ нормальной физиологии им. П. К. Анохина РАМН (Москва, 2012), VII, VIII Меж-

дународной Пироговской научной медицинской конференции студентов и моло-

дых ученых (Москва, 2012, 2013).

По теме диссертации опубликовано 22 печатные работы, в том числе 15 ста-

тей в журналах, рекомендованных ВАК РФ для публикаций диссертационных ис-

следований.

17

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 270 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 4-х глав ре-

зультатов исследования, обсуждения полученных результатов, выводов. Библио-

графический список использованной литературы включает 198 работ отечествен-

ных авторов и 230 иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 39 рисун-

ками и 30 таблицами.

18

Глава 1

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. ОСОБЕННОСТИ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ СИСТЕМЫ МАТЬ – ПЛОД

Функциональная система мать - плод обеспечивает сложные интегративные взаимоотношения между матерью и плодом (Гармашева Н. Л., Константинова Н.

Н., 1978; Савченков Ю. И., Лобынцев К. С.,1980; Колесников С. И., Морозова Л.

М.,1985). Она состоит из двух самостоятельных организмов, которые объединены общей целью–обеспечить нормальное развитие плода и рождение здорового жиз-

неспособного потомства. Система мать - плод включает в себя особые структур-

ные и функциональные элементы, рецепторы, механизмы нервной и гуморальной регуляции, пути прямой и обратной связи (Назаров С. Б., 1995). Она образована двумя подсистемами, взаимодействующими друг с другом на различных уровнях:

система матери, создающая условия для развития плода, и система самого плода,

задача которого - обеспечить поддержание собственного гомеостаза.

Плацента является неотъемлемым компонентом системы мать – плод. Пол-

ноценное взаимодействие между организмами матери и плода происходит только после развития этого органа. В тоже время, плаценту нельзя считать самостоя-

тельной подсистемой (Савченков Ю. М., Лобынцев К. С., 1980), так как у нее нет собственных механизмов регуляции, является исполнительным органом и не мо-

жет работать вне системы мать – плод.

Плацента обеспечивает формирование, рост и развитие плода (Федорова М.

В., Калашникова Е. П., 1986). Это провизорный орган, который формируется в

19

процессе эмбриогенеза и заканчивает свое существование после родов. За корот-

кое время опухолеподобный трофобласт трансформируется в сложный орган, со специфической системой гормональной и иммунной регуляции (Савельева Г. М.,

Федорова М. В., 1991).

Плацента человека и мышевидных грызунов в связи с наличием непосред-

ственного контакта крови матери и хориона, относится к гемохориальному типу,

что способствует наиболее оптимальному осуществлению взаимодействий между материнским организмом и организмом плода (Радзинский В. Е., 2004). Однако,

плаценты человека и крысы имеют некоторые морфологические отличия: количе-

ство слоев трофобласта, который отделяет эндотелий матери и плода – у человека один, а у крысы три; существуют особенности морфологии ворсин (De Rijk E. P.C. T. et al., 2002).

Множество функций плаценты связано с особенностями ее структуры на этапах развития, ее морфология меняется в соответствии с потребностями расту-

щего эмбриона и плода (Foweden A. L. et al., 2006). Рост плаценты (включая рост сосудов) связан с увеличением концентрации анаболических гормонов - инсули-

на, инсулиноподобных ростовых факторов, пролактина, плацентарного лактогена,

гормонов щитовидной железы, и снижением катаболических – кортизола и ка-

техоламинов (Foweden A. L. et al., 2005; Gootwine Е., 2004). Регуляция маточно-

плацентарного кровообращения до сих пор не расшифрована в полной мере. Это саморегулирующаяся система с низким сопротивлением току крови и не реаги-

рующая на обычные нервно-гуморальные стимулы (Милованов А. П., 1999). Ин-

тимная связь системы кровообращения матери и плода в области плацентарной площадки и плацентарной мембраны через медленные колебания гемодинамики,

вероятно, передает информацию о состоянии нейровегетативной регуляции от плода к матери и от матери – плоду. Это позволяет перенастраивать обе системы,

прежде всего с запросами плода и отвечает принципам сохранения жизнеспособ-

ности систем. При снижении или нарушении компенсаторных реакций плаценты

20

связь нарушается или вовсе прекращается, что проявляется осложнениями для матери, плода и новорожденного (Рец Ю. В., 2008).

Плацента выполняет множество функций. Через нее обеспечивается трофи-

ка и дыхание плода, выведение продуктов обмена, развитие гормонального и им-

мунного статуса плода (Foweden A. L. et al., 2009). Транспорт веществ через пла-

центарный барьер осуществляется как путем диффузии (вода, некоторые электро-

литы, газы), так и по механизму пиноцитоза, активного транспорта, ультрафиль-

трации. Все процессы переноса веществ прямо зависят от морфологических ха-

рактеристик плаценты, таких как площадь поверхности, толщина барьера, плот-

ность капилляров, материнский кровоток (Sibley С. Р. et al., 2005). Существуют данные (Савельева Г. М., Федорова М. В., 1991), что плацента заменяет плоду не-

достаточно функционирующий гематоэнцефалический барьер, защищая его нерв-

ную систему и весь организм от воздействия неблагоприятных факторов.

1.2. ЭТИОЛОГИЯ И ПАТОГЕНЕЗ ПЛАЦЕНТАРНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ

Развитие плода находится в зависимости от уровня метаболизма в организ-

ме матери, состояния плацентарного барьера, активности маточно-плацентарного кровообращения (Kaufmann P. et. al., 2003).

Нарушения морфологии и функционального состояния плаценты являются одной из главных причин патологического течения беременности и родов, а также важным фактором перинатальной заболеваемости и смертности (Луканская Е. Н., 2013; Полячикова О. Л. и др., 2009; Савельева Г. Н., Федорова М. В., 1991; Сидо-

рова И. С., Макаров И. О., 2000; Nusken K.-D. et al., 2008). По данным В. В. Горя-