диссертации / 25

91

Введение альфа-токоферола интактным животным в дозе 150 мг/кг по срав-

нению с контролем приводит к значительному снижению адгезионной активности перитонеальных макрофагов. На 20-й день повышается количество фагоцитов, не образующих розетки, до 84,30 ± 2,66%, на 10%, а количество розеткообразующих макрофагов 1 типа наоборот снижается на 31,8%, составляя 19,00 ± 1,26%. Одно-

временно индекс адгезионно-фагоцитарной активности уменьшен на 17,8%, что составляет 0,22 ± 0,05.

На 20 день при физиологической беременности у животных активность пе-

ритонеальных макрофагов повышается по сравнению с интактными неберемен-

ными крысами (рис. 3, табл. 10): возрастает количество клеток, образующих ро-

зетки 1-го (34,6 ± 2,12% против 24,6 ± 1,75%), 2-го (7,67 ± 0,94% и 1,82 ± 0,64%), 3-го типа (1,67 ± 0,50% и 0,09 ± 0,09%), ИАФА по сравнению с небеременными животными увеличивается на 181%. Активность плацентарных макрофагов у этой группы животных гораздо ниже, чем перитонеальных: процент клеток, не адгези-

рующих эритроциты составляет 81,1 ± 4,17%, образующих розетки 1-го типа –

16,7 ± 3,17%, розеток 2-го типа 1,78 ± 0,91%, индекс адгезионно-фагоцитарной активности меньше на 72%. При поступлении нитрита натрия во время беремен-

ности у крыс еще больше повышается активность перитонеальных макрофагов,

образующих розетки 2-го (на 265%) и 3-го (на 489%) типа, процент розеток 1-го типа достоверно не меняется, ИАФА по сравнению с интактными беременными крысами увеличивается почти в 5 раз и составляет 2,47 ± 0,60 при 1,13 ± 0,14 у

интактных беременных крыс. В этих условиях активность плацентарных макро-

фагов не повышается и находится на уровне интактных беременных животных, и,

соответственно, достоверно ниже по значениям МФ1, МФ2, ИАФА по сравнению с перитонеальными макрофагами своей группы.

При введении неселективного антагониста NO-синтаз также активируется фагоцитарная активность перитонеальных макрофагов (см. рис. 3, табл. 10). Как и при воздействии нитрита, увеличивается число розеток 2-го (до 28,0 ± 6,64%) и 3-

го (до 9,17 ± 2,77%) типа, величина ИАФА возрастает на 512%. Активность пла-

92

центарных макрофагов у этой группы крыс также повышается по сравнению со 2-

й группой за счет достоверного снижения количества клеток без эритроцитов до

43,8 ± 3,84 при 81,1 ± 4,17% в контроле, и увеличения числа макрофагов 1-го типа

(от 16,7 ± 3,17% до 33,2 ± 2,18%), 2-го типа (от 1,78 ± 0,91% до 18,5 ± 2,98%), 3-го типа (от 1,78 ± 0,91% до 4,00 ± 1,41%), ИАФА возрастает на 622%. По сравнению с перитонеальными макрофагами своей группы активность клеток плаценты ниже по показателям МФ2, МФ3, индексу адгезионно-фагоцитарной активности.

Рис. 3. Изменение ИАФА перитонеальных (черный) и плацентарных (серый)

макрофагов у беременных крыс 4-й, 6-й, 8-й и 10-й групп по сравнению со 2-

й группой (p < 0,05).

93

Таблица 10

Функциональная активность макрофагов

у небеременных и беременных крыс

Примечание: * - достоверное отличие 2-й группы от 1-й группы (р < 0,05); ^ - достоверное отличие активности перитонеальных от плацентарных макро-

фагов у крыс 2-й группы; #- достоверное отличие активности перитонеальных и плацентарных макрофагов 2-й группы от 4-й, 6-й, 8-й групп (р < 0,05).

Альфа-токоферол, вводимый при беременности, существенного влияния на процесс фагоцитоза эритроцитов перитонеальными макрофагами не оказывает

(см. рис. 3, табл. 10). Однако активность плацентарных макрофагов достоверно повышается за счет МФ1. Их количество увеличивается на 59% (от 16,7±3,17% до

26,6 ± 2,91%).

94

НМПК существенно снижает активность перитонеальных макрофагов (табл.

11, рис. 3): количество клеток без розеток составляет 68,9 ± 3,53% при 55,1 ±

2,64% у интактных беременных крыс, снижен процент клеток, образующих розет-

ки 2-го и 3-го типа, ИАФА меньше на 40% и составляет 0,67 ± 0,11 при 1,13 ± 0,14

у интактных крыс. Активность плацентарных макрофагов в этих условиях меня-

ется противоположным образом – она увеличивается за счет клеток, не адгезиру-

ющих эритроциты, и составляет 69,6 ± 2,65% при 81,1 ± 4,17% у крыс 2-й группы.

При нарушении маточно-плацентарного кровообращения на фоне поступ-

ления с питьевой водой нитрита натрия активность перитонеальных макрофагов достоверно меньше, чем у животных 4-й группы (МФ0 увеличивается от 28,1 ± 4,68% до 40,0 ± 1,39%; МФ3 снижается от 27,4 ± 5,00% до 10,7 ± 20,8%; ИАФА уменьшается почти в 2 раза) (см. табл. 11). По сравнению с изолированным НМПК активность перитонеальных макрофагов достоверно выше по проценту МФ1 и МФ2, индекс адгезионно-фагоцитарной активности увеличивается на

230%. Активность плацентарных макрофагов при НМПК на фоне введения нит-

рита натрия достоверно выше по сравнению с 4-й группой (МФО снижается от

85,1 ± 4,21% до 72,0 ± 2,86%; МФ1 увеличивается от 12,4 ± 2,64% до 21,4 ± 2,27%). По сравнению с изолированным НМПК достоверные отличия отсутству-

ют.

НМПК на фоне введения антагониста оксида азота по сравнению с 6-й

группой достоверно снижает активность перитонеальных макрофагов (увеличива-

ется количество МФ0 на 117%, снижается МФ2 и ИАФА на 62% и 70% соответ-

ственно) (см. табл. 11). По сравнению с изолированным НМПК фагоцитарная ак-

тивность меняется противоположным образом по тем же критериям (МФ0, МФ2,

ИАФА). У плацентарных макрофагов крыс 12-й группы по сравнению с введени-

ем L-NAME изменения активности сходны с перитонеальными макрофагами,

МФ0 увеличивается от 43,8 ± 3,84% до 61,5 ± 4,99%, МФ2 снижается от 18,5 ± 2,98% до 7,80 ± 2,23%. По сравнению с изолированным НМПК достоверных от-

личий не отмечается.

95

Таблица 11 Функциональная активность макрофагов при НМПК у крыс

Примечание: °- достоверное отличие 2-й группы от 10-й группы (р < 0,05);

#- достоверное отличие 10-й группы от 11, 12, 13-й групп (р < 0,05); *- достовер-

ное отличие 11, 12, 13-й групп от 4, 6, 8-й групп соответственно (р < 0,05).

НМПК на фоне введения альфа-токоферола на активность перитонеальных макрофагов по сравнению с 8-й группой достоверно не влияет, по сравнению с изолированным НМПК она достоверно повышается за счет снижения МФ0 (от

68,9 ± 3,53% до 50,0 ± 5,40%) и повышения МФ2 (от 4,89 ± 1,54% до 12,7 ± 2,94%)

и достигает уровня интактных крыс (см. табл. 11). Показатели активности плацен-

тарных макрофагов 13-й группы от 8-й и 10-й групп достоверно не отличаются.

96

Влияние различных веществ на активность перитонеальных

макрофагов у интактных небеременных крыс

При введении в среду для инкубации клеток trolox и SOD у небеременных крыс 1-й группы процесс фагоцитоза перитонеальными макрофагами остается на уровне контрольных значений (табл. 12).

Введение ЛПС в малой и большой дозах в культуральную среду вызывает увеличение числа адгезирующих эритроциты перитонеальных макрофагов и уменьшение количества клеток без эритроцитов (в низкой концентрации эта ве-

личина составляет 48,8 ± 5,08%, в высокой 51,6 ± 3,86% при 64,8 ± 2,97% в кон-

троле), увеличивается ИАФА от 0,64 ± 0,10 до 1,71 ± 0,43 и 1,22 ± 0,16 соответ-

ственно.

При инкубации перитонеальных макрофагов с L-NAME у интактных небе-

ременных крыс наблюдается дозозависимый эффект. В низкой концентрации это вещество оказывает тормозное влияние на процесс фагоцитоза (уменьшается ко-

личество клеток, образующих розетки 1-го типа от 28,2 ± 1,53% до 18,8 ± 2,18%).

В высокой концентрации – наоборот – наблюдается активирующее воздействие,

что сопровождается уменьшением числа клеток без эритроцитов и увеличением ИАФА макрофагов (от 0,64 ± 0,10 до 1,30 ± 0,23).

Эстрадиол в низкой концентрации фагоцитоз не активирует, но оказывает стимулирующее влияние в концентрации 100 нмоль/л. При этом уменьшается ко-

личество перитонеальных фагоцитов без адгезированных эритроцитов (от 64,8 ± 2,97% до 45,2 ± 0,72%), увеличивается процент клеток, образующих розетки 2-го типа (от 5,21 ± 1,82% до 18,0 ± 4,28%), что сопровождается увеличением ИАФА на 268%.

Введение водорастворимой формы прогестерона в низкой концентрации не оказывает достоверного влияния на функцию перитонеальных макрофагов. В

97

большей концентрации этот гормон снижает способность макрофагов адгезиро-

вать эритроциты. Это проявляется в уменьшении процента клеток, образующих розетки 1-го типа (от 28,2 ± 1,53% до 20,0 ± 2,32%).

Влияние биологически активных веществ на активность перитонеальных

и плацентарных макрофагов у интактных беременных крыс

При введении в среду для инкубации клеток брюшной полости trolox у бе-

ременных животных это вещество в обеих концентрациях оказывает тормозное влияние на активность макрофагов (табл. 12, 13, рис. 4, 5). В низкой концентра-

ции МФ0 составляет 70,3 ± 5,10%, в высокой 67,7 ± 4,33%, что достоверно ниже показателя интактных эритроцитов беременных крыс - 55,1 ± 2,64%. Также в кон-

центрации 1мкМ уменьшается количество розеток 2-го и 3-го типа на 59 и 81%,

ИАФА составляет 0,60 ± 0,12 при 1,13 ± 0,14 в контроле, в концентрации 25 мкМ МФ3 снижается на 90%, ИАФА на 48%. В отношении плацентарных макрофагов trolox в низкой концентрации оказывает противоположное влияние и способству-

ет повышению количества МФ2 от 16,7 ± 3,17% до 28,8 ± 3,84%. В высокой кон-

центрации это вещество на активность макрофагов влияния не оказывает.

SOD в отношении перитонеальных макрофагов оказывает дозозависимый эффект: в низкой концентрации процент клеток без эритроцитов увеличивается до

70,9 ± 3,23%, в высокой до 80,4 ± 3,04% (см. табл. 12, 13, рис. 4, 5). Такая же зави-

симость, только в сторону снижения, наблюдается в количестве розеток 1-го, 2-го,

3-го типа и ИАФА, который падает на 53% (10 ед./мл) и 69% (100 ед./мл). В от-

ношении плацентарных макрофагов супероксиддисмутаза достоверных влияний не оказывает.

98

У беременных крыс ЛПС вызывает лишь незначительное увеличение актив-

ности перитонеальных макрофагов в большей концентрации: количество клеток без эритроцитов уменьшается и составляет 48,0 ± 1,21% при 55,1 ± 2,64% в кон-

троле, также возрастает число МФ2, ИАФА возрастает до 1,50 ± 0,08 по сравне-

нию с 1,13 ±0,14 у интактных эритроцитов (см. табл. 12, 13, рис. 4, 5). При инку-

бации плацентарных макрофагов с ЛПС их активность значительно возрастает. В

концентрации 10 нг/мл и 100 нг/мл по сравнению со 2-й группой снижается про-

цент МФ0 от 81,1 ± 4,17% до 52,8 ± 4,55% и 45,1 ± 5,25% соответственно; увели-

чивается количество МФ1 от 16,7 ± 3,17% до 33,4 ± 2,99% и 35,2 ± 2,96%;

%

*

**

*

*

Рис. 4. Изменение ИАФА при воздействии на перитонеальные макрофаги бе-

ременных крыс различными веществами (1, 2 – разные концентрации липо-

полисахарида; 4, 5 – разные концентрации L-NAME; 7, 8 – разные концен-

трации Trolox; 10, 11 – разные концентрации SOD; 13, 14 – разные концен-

трации прогестерона; 16, 17 – разные концентрации эстрадиола) (* - р < 0,05).

99

%

700

*

600

500

*

300

* *

200

*

100

0

-100

Рис. 5. Изменение ИАФА при воздействии на плацентарные макрофаги бе-

ременных крыс различными веществами (1, 2 – разные концентрации липо-

полисахарида; 4, 5 – разные концентрации L-NAME; 7, 8 – разные концен-

трации Trolox; 10, 11 – разные концентрации SOD; 13, 14 – разные концен-

трации прогестерона; 16, 17 – разные концентрации эстрадиола) (* - р < 0,05).

возрастает МФ2 от 1,78 ± 0,91% до 11,0 ± 1,26% и 17,3 ± 3,38%; повышается МФ3

от 0,33 ± 0,31 до 2,11 ± 0,60% и 1,67 ± 0,47%. ИАФА в первом случае повышается почти в 4 раза, во втором – более, чем в 6 раз.

У беременных крыс L-NAME достоверно снижает активность перитонеаль-

ных макрофагов только в высокой концентрации за счет макрофагов, образующих розетки 3-го типа и ИАФА (см. табл. 12, 13, рис. 4, 5). Активность плацентарных макрофагов антагонист оксида азота не изменяет.

У крыс 2-й группы эстрадиол и прогестерон достоверных влияний на актив-

ность перитонеальных макрофагов не оказывают (см. табл. 12, 13, рис. 4, 5). При инкубации плацентарных макрофагов с эстрадиолом он оказывает стимулирую-

щее влияние в обеих концентрациях. В концентрации 10 нМ 100 нМ по сравне-

нию со 2-й группой снижается процент МФ0 от 81,1 ± 4,17% до 54,2 ± 4,99% и

45,7 ± 5,72% соответственно; увеличивается количество МФ1 от 16,7 ± 3,17% до

100

32,0 ± 2,68% и 31,9 ± 2,84%; возрастает МФ2 от 1,78 ± 0,91% до 10,1 ± 1,73% и

17,8 ± 3,34%; в концентрации 100 нм повышается МФ3 от 0,33 ± 0,31% до 4,00 ± 1,36%. ИАФА в первом случае возрастает на 184%, во втором – на 358%.

При инкубации плацентарных макрофагов с прогестероном он также оказы-

вает стимулирующее влияние в обеих концентрациях (см. табл. 12, 13, рис. 4, 5).

В концентрации 10 нМ 100 нМ по сравнению со 2-й группой снижается процент МФ0 от 81,1 ± 4,17% до 55,6 ± 2,15% и 50,6 ± 3,13% соответственно; увеличивает-

ся количество МФ1 от 16,7 ± 3,17% до 35,9 ± 2,56% и 33,1 ± 2,88%; возрастает МФ2 от 1,78 ± 0,91% до 6,80 ± 1,31% и 12,4 ± 2,38%; повышается МФ3 от 0,33 ± 0,31% до 1,67 ± 0,27% и 3,33 ± 0,94%. ИАФА в низкой концентрации возрастает на 105%, в высокой – на 200%, при этом наблюдается дозозависимый эффект.