Лабораторный практикум Работа 1. Количественное определение белка в коровьем молоке ксантопротеиновым методом

Диагностическое значение: метод используется для установления питательной ценности молока, контроля его качества и предупреждения фальсификаций молока и молочных продуктов.

Принцип метода: метод основан на способности ароматических аминокислот, входящих в состав белка, образовывать при взаимодействии с концентрированной азотной кислотой нитропроизводные желтого или оранжевого цвета. Интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию белка.

Ход работы: в пробирку добавить 5 мл молока и 4,5 мл 2% раствора NaOH, хорошо перемешать, выдержать при комнатной температуре 10 мин. Затем 1 мл этой смеси внести в другую пробирку и добавить (осторожно) 1 мл конц. HNO_3, перемешать. Пробирку поместить на 5 мин. в кипящую водяную баню (раствор приобретает лимонно-желтый цвет). Пробирку охладить под краном и добавить по стенке 3 мл 15% раствора аммиака и 5 мл дистиллированной воды, перемешать (раствор приобретает оранжевый цвет). Данный раствор профильтровать через плотный фильтр и проколориметрировать против дистиллированной воды при длине волны 420 нм (синий светофильтр) в кювете толщиной 1 см.

Расчет: Соп_(%) = Еоп х 7,4

Коэффициент 7,4 найден предварительно при параллельном определении содержания белка в молоке фотометрическим методом и методом Кьельдаля.

Вывод из проделанной работы: ______________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

Работа 2. Качественные реакции на составные компоненты казеина

Практическое значение: качественные реакции на фосфатную группу используют для обнаружения фосфопротеинов в исследуемых образцах.

Принцип метода: метод основан на обнаружении в гидролизате казеина белкового компонента с помощью биуретовой реакции и фосфорной кислоты с помощью молибденовой пробы.

Ход работы: в две разные пробирки добавить по 1 мл гидролизата казеина.

1) Биуретовая реакция на белки (первая пробирка): к 1 мл гидролизата добавить 5 капель биуретового реактива и отметить характерное сине-фиолетовое окрашивание.

2) Обнаружение фосфора (молибденовая проба) (вторая пробирка): к 1 мл гидролизата добавить 20 капель молибденового реактива, прокипятить и отметить образование лимонно-желтого цвета. При охлаждении появляется кристаллический осадок фосфорно-молибденового аммония, что доказывает наличие фосфорной кислоты.

Вывод из проделанной работы: ______________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

Работа 3. Определение ферментов молока

Практическое значение: определение в молоке наличия пероксидазы используют для установления факта пастеризации или термической обработки молока.

А) Определение пероксидазы по реакции с йодистым крахмалом

Принцип метода: метод основан на разложении перекиси водорода ферментом пероксидазой содержащейся в молоке и молочных продуктах. Освобождающийся при разложении перекиси активный кислород окисляет йодистый калий, освобождая йод, образующий с крахмалом соединение синего цвета. При отсутствии фермента цвет содержимого пробирки не меняется. Из этого следует, что молоко и молочные продукты подвергались пастеризации при температуре не ниже 80⁰С. Чувствительность метода высока и позволяет обнаружить не менее 5% непастеризованных продуктов к пастеризованным.

Ход работы: в пробирку наливают 3 мл молока, 5 капель йодистокалиевого крахмала и 5 капель 2% раствора перекиси водорода, перемешивают и наблюдают за изменением окраски.

Вывод из проделанной работы: ______________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

Б) Определение пероксидазы бензидиновой пробой

Принцип метода: основан на способности бензидина окисляться в дифенохинондимин (сине-зеленый цвет) в присутствии перекиси водорода под действием фермента пероксидазы, содержащейся в некипяченом молоке.

Ход работы: к 3 мл молока добавляют 1-3 капли раствора бензидина, 1 мл 2% раствора перекиси водорода и наблюдают за изменением окраски.

Вывод из проделанной работы: ______________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________