644

Ò à á ë è ö à 3 9

Влияние упаковочного материала и сроков хранения на качественные показатели таблеток с интерфероном

* р > 0,05 по отношению исходным данным качественных показателей каждого вида упаковки.

Таким образом, предлагаемая нами технология позволяет сохранять активность ИФН в данной лекарственной форме, расфасованной в изу- ченных нами упаковках при температуре от 2 до 8 îС, не менее двух лет (срок наблюдения 27 мес.).

Контрольные вопросы к главе 7

1.Каковы преимущества оральной таблетированной формы перед энтеральной?

2.Каковы главные составляющие оральной таблетки с интерфероном?

3.Каковы показатели определяют качество таблеточной массы?

4.Каковы основные технологические стадии получения таблеток с интерфероном?

5.Каковы требования к микробиологической чистоте таблетированных препаратов?

6.Что влияет на адсорбцию специфических составляющих таблеток?

7.Какие регламентируемые показатели учитываются при оценке ка- чества таблетированных препаратов?

121

ГЛАВА 8 БИОДОСТУПНОСТЬ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ

СОСТАВЛЯЮЩЕЙ ТАБЛЕТИРОВАННОЙ ФОРМЫ

В данной главе представлены материалы по оценке биодоступности ИФН в таблетках, предназначенных для рассасывания в полости рта, что создает длительный контакт действующего начала со слизистой ротовой полости.

Биодоступность ИФН в таблетках изучена in vivo и in vitro.

8.1. Сравнительная оценка динамики всасывания интерферона, введенного животным орально в форме таблетки и раствора

Изучение биодоступности лекарственных средств в таблетках является важным тестом в оценке их терапевтической эффективности. Все компоненты таблетки, физические условия технологических операций могут оказывать влияние на процесс освобождения специфической составляющей и интенсивность е¸ лекарственного действия в организме. Наибольшее значение для оральных таблеток ИФН имеет процесс всасывания биологически активного вещества, поэтому при проведении биофармацевти- ческой оценки препарата особое значение имеют опыты in vivo .

Исследование степени биодоступности in vivo (фармакокинетики) интерферона в таблетках проводили на 5 кроликах породы Шиншилла массой 2,5–3,0 кг в каждой группе. Использовали два способа введения: оральный и внутримышечный. Животным вводили очищенный ИФН с противовирусной активностью 4000 МЕ в таблетке – первой и второй группе, 4000 МЕ/мл внутримышечно – третьей группе.

Для орального введения интерферона использовали два способа. Таблетку с интерфероном предварительно измельчали и растворяли в 0,7 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, затем абсорбировали на губку, которую

122

ñпомощью зажима Кохера вводили в полость рта кролика. Данная методика предусмотрена в СП 3.3.2.561-96 «Государственные испытания и регистрация новых медицинских иммунобиологических препаратов». При втором способе таблетку с ИФН помещали в марлевый мешочек, который

ñпомощью зажима держали в полости рта кроликов. ИФН из губки и таблетки поступал на слизистую рта и затем всасывался в кровь. Для определения полноты всасывания препарата делали смывы с губок и марли, в которых определяли противовирусную активность. Контрольной группе вводили очищенный ИФН внутримышечно в объеме 1,0 мл в ягодичную мышцу с соблюдением правил асептики.

До начала эксперимента, через 30 минут после введения препарата и далее с интервалом один час в течение 8 часов, у каждого кролика брали кровь из краевой вены уха в количестве 1,0 мл в центрифужные пробирки с антикоагулянтом, в качестве которого использовали 6% раствор цитрата натрия в соотношении 1:9. Кровь центрифугировали, отделяли плазму, в которой определяли уровень противовирусной активности интерферона методом цитопатического действия.

Âходе всего эксперимента проводили оценку общего состояния и поведения животных. В процессе опыта и затем в течение последующих 7 суток нами не выявлено каких-либо отклонений в состоянии и поведении животных, получавших таблетку с интерфероном, по сравнению с кроликами, которым препарат был введен внутримышечно. Дыхание у животных спокойное, не затрудненное, повышенного слюнотечения не отмечается, мочеиспускание без особенностей, моча при визуальной оценке обычная.

Из результатов, представленных на рис. 14, видно, что параметры кривых противовирусной активности ИФН, введенного внутримышечно и в форме таблеток и растворенной измельченной таблетки, практически не отличаются. На полученных кривых наблюдается двухфазное падение кон-

центрации препарата: сначала идет быстрое снижение (-фаза), а затем медленное (Я-фаза). В -фазе препарат исчезает из крови за счет проникновения в органы и ткани, а после установления равновесия снижение концентрации происходит за счет элиминации препарата (Я-фаза). ИФН, введенный орально в форме таблетки, хорошо проникает в капиллярную систему слизистой ротовой полости. В плазме крови у этих животных ИФН обнаруживается уже через час после его введения. Максимальный уровень ИФН (450,0 28,87 МЕ/мл) регистрируется через 2 ч после введения таблетки и циркулирует в кровяном русле еще в течение 6 ч (всего 8 ч от начала

123

эксперимента). Аналогичные результаты нами получены при оральном введении растворенной измельченной таблетки с ИФН (см. рис. 14).

У группы животных при внутримышечном введении повышение уровня интерферона по отношению к исходному (102,5 15,34 МЕ/мл) регистрировали через 30 мин (193,75 34,7). Он достигал своего пика (612,5 42,7 МЕ/мл) через 3 ч после введения. Терапевтическое действие продолжалось затем в течение 5 ч.

Как видно из результатов, приведенных на рис. 14, средние параметры фармакокинетической кривой в опытных группах кроликов и контрольной практически не отличаются по продолжительности действия. Кроме того, терапевтический эффект при использовании обоих способов введения интерферона одинаковый. Сравнение средних значений площадей под фармакокинетическими кривыми (AUS8) показало, что при внутримышечном использовании ИФН размеры площади составляют 57,55 см2, что почти не отличается от параметров площади при оральном введении растворенной, измельченной таблетки (54,25 см2) и оральном введении таблетки (59,63 см2). По результатам эксперимента видно, что при однократном оральном введении кроликам ИФН в таблетке последний обнаруживали в плазме крови в течение 6 ч. Полученные результаты

Рис. 14. Динамика противовирусной активности интерферона в плазме крови кроликов при его оральном и внутримышечном введении

124

сходны с таковыми при введении ИФН в других формах (суппозитории, растворы) [8;15].

Нами установлено, что ИФН хорошо высвобождается из таблеточной массы в ротовую полость и затем всасывается через слизистую в кровяное русло, что подтверждается результатами определения противовирусной активности препарата в крови кроликов уже через 30 мин после приема. ИФН в таблетках отличается хорошей абсорбцией, высокой относительной и абсолютной биодоступностью, сравнимой со специфической субстанцией, введенной внутримышечно. Кроме того, таблетированная форма интерферона, предназначенная для рассасывания в ротовой полости без разжевывания, является новой удобной и эффективной лекарственной формой.

8.2. Доклиническая оценка безопасности интерферона в таблетках

В соответствии с РД 42-28-8-89 «Доклинические испытания новых медицинских иммунолобиологических препаратов. Основные положения» [65] доклиническая оценка безопасности препарата включа- ет определение острой и хронической токсичности, эмбриотоксичности, тератогенности и мутагенных свойств препарата. Однако в связи с тем, что препарат «Интерферон человеческий лейкоцитарный», применяемый нами в качестве специфической составляющей, широко и длительно используют в медицине, а также и с тем, что в технологии получения таблеток нами не были использованы вещества, не разрешенные в технологии производства лекарственных средств, мы сочли возможным не проводить оценку таких дорогостоящих и трудоемких показателей доклинических исследований, как эмбриотоксичность, тератогенность и мутагенность.

8.2.1. Изучение острой токсичности интерферона в таблетках

Для проведения эксперимента по изучению острой токсичности ИФН в таблетках использовали 80 белых беспородных мышей обоего пола массой 20,0–25,0 г. Животных содержали в виварии Пермского НПО «Биомед» в пластмассовых клетках, в каждой по 10 особей. Было изучено токсическое действие четырех доз препарата и активной суб-

125

станции. Исходя из регламентированной активности 4000 МЕ/табл., для изучения острой токсичности на белых мышах с массой 25 г были приготовлены таблетки с активностью, превышающей в 160–1200 раз курсовую дозу и в 800 – 6000 раз суточную дозу препарата соответственно для четырех доз. Эти таблетки с активностью 4000 МЕ в перерасчете составляли для белых мышей 160000 МЕ/кг; таблетки 7000 МЕ и субстанция 7000 МЕ/мл – 280000 МЕ/кг, 15000 МЕ на мышь соответствует 600000 МЕ/кг и 30000 МЕ на животное – 1200000 МЕ/кг.

Общее состояние подопытных животных оценивали визуально по поведенческим реакциям, внешнему виду и выживаемости. Данные указанного эксперимента представлены в табл. 40.

Таблица 40

Оценка острой токсичности препарата интерферона на белых мышах при оральном введении

Как видно из материалов табл. 40, максимально переносимую дозу для ИФН в форме таблетки для орального введения выявить не удается. В течение 14-дневного периода наблюдения все животные остались живы. Это указывает на то, что токсическая доза для данного препарата при пероральном введении составляет величину, превышающую в 1200 раз курсовую дозу или в 6000 раз суточную.

126

8.2.2. Изучение хронической токсичности препарата интерферона в таблетках при многократном введении экспериментальным животным

Хроническую токсичность ИФН в таблетках изучали на кроликах породы Шиншилла весовой категории 2,5–3,0 кг. При этом исследовали три группы животных: первая получала ИФН в таблетках в суммарной дозе 10000 МЕ/кг, вторая –2500 МЕ/кг, контрольная – животные всасывали из губки 0,9% раствор натрия хлорида.

Âтечение всего периода наблюдения (1,5 мес.) у подопытных животных, которым вводили ИФН в форме таблетки из расчета суточной дозы 200 МЕ на кг веса человека, превышение противовирусной активности интерферона для кролика в первой группе составляет в 50 раз, во второй – в 12,5 раз. Признаки интоксикации и изменения в поведении животных не регистрировались. Гибели животных не отмечалось.

Âдинамике массы тела подопытных животных контрольной

èопытной групп статистически достоверных различий нами не отме- чено (табл. 41).

Таблица 41

Оценка влияния ИФН в таблетках на изменение массы тела кроликов

*р>0,5; **р>0,1 по сравнению с контролем.

Ñцелью изучения влияния ИФН в таблетках в дозах 10000 МЕ/кг

è2500 МЕ/кг при ежедневном приеме в течение 1,5 мес. нами проведена сравнительная оценка крови экспериментальных животных до приема препарата и на следующий день после окончания эксперимента. Данные представлены в табл. 42.

127

Ò à á ë è ö à 4 2

Оценка показателей периферической крови различных групп кроликов в зависимости от вводимых доз ИФН в таблетках

* р>0,05 по сравнению с контролем.

Как видно из табл. 42, статистически достоверных изменений коли- чества эритроцитов и лейкоцитарной формулы, а также концентрации гемоглобина не обнаруживается.

В ходе эксперимента у всех групп опытных животных изучали также биохимические показатели сыворотки крови на следующий день после последнего введения таблеток с ИФН (продолжительность опыта 1,5 мес.). Полученные данные представлены в табл. 43.

Как видно из табл. 43, ежедневный прием высокой дозы интерферона в течение всего эксперимента не оказывает существенного влияния на биохимические показатели крови (активность ферментов печени, содержание белка, иммуноглобулинов, уровень креатинина и щелочной фос-

128

фатазы). Об этом свидетельствует отсутствие существенных различий изучаемых показателей у животных контрольной и опытных групп.

Ò à á ë è ö à 4 3

Оценка биохимических показателей сыворотки крови у групп кроликов, получавших ИФН в таблетках в различных дозах

* р>0,05 по сравнению с контролем.

Электрофореграммы белков сыворотки крови кроликов опытных групп ¹ 1 (кролики ¹ 1–5) и ¹ 2 (кролики ¹ 6–10) в конце испытаний (нумерация с ¹ 1 до ¹ 10) представлены на рис. 15 . Из полученных данных видно, что у каждой особи картина электрофоретического разделения белков сыворотки крови имеет свой характерный профиль, не совпадающий с другими. Следует отметить, что аналогичное исследование по окончании испытаний не выявило изменений в белковом профиле ни у одного кролика рис. 16. Это свидетельствует о том, что интерферон в таблетках не оказывает отрицательного воздействия на белоксинтезирующую функцию печени и соответственно на показатели белков сыворотки крови. Данный вывод подтверждают результаты оценки процентного содержания белков в сыворотке крови, представленные в табл. 44.

Из материалов, представленных в табл. 44, видно, что у кроликов к концу эксперимента возрастает процентное содержание иммуноглобулина G. Более того, у кроликов опытных групп оно увеличивается на несколько большую величину, чем в контрольной группе.

129

Оценка относительной массы органов подопытных кроликов по сравнению с контрольными не выявляет существенных изменений, вызванных длительным приемом таблеток с ИФН (табл. 45).

Рис. 15. Электрофореграммы белков сыворотки крови кроликов опытных групп ¹1 (кролики ¹1–5) и ¹2 (кролики ¹ 6–10) перед началом испытаний (нумерация в обратном порядке с ¹10 до ¹1)

Рис. 16. Электрофореграммы белков сыворотки крови кроликов опытных групп ¹ 1 (кролики ¹ 1–5) и ¹ 2 (кролики ¹ 6–10) в конце испытаний (нумерация с ¹1 по ¹ 10)

130