Приготовление и применение композиционного гемопрепарата научно-практические рекомендации

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ДЕПАРТАМЕНТ НАУЧНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКОЙПОЛИТИКИ И ОБРАЗОВАНИЯ

ФГБОУ ВО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им . В.Р. Филиппова»

ПРИГОТОВЛЕНИЕИПРИМЕНЕНИЕ КОМПОЗИЦИОННОГОГЕМОПРЕПАРАТА

Научно-практические рекомендации

Улан-Удэ Издательство БГСХА им. В.Р. Филиппова

2015

1

УДК 619:579 (07) П 755

Рекомендовано к печати научно-техническим советом ФГБОУ ВО «Бурятская ГСХА им. В.Р. Филиппова» Протокол №8 от 29 апреля

Рецензенты:

О.Б. Бадмаева – к.в.н., доцент каф. инноваций и бизнеса ФГБОУ ВО «Бурятская ГСХА им. В.Р. Филиппова»; П.И. Евдокимов – д.в.н., профессор, заслуженный ветврачРФ,заместительначальникаУправленияветерина-

рии Республики Бурятия

Коллектив авторов:

О.С. Дансарунова, В.Ц. Цыдыпов, Н.В. Ковалева, Б.Ц. Будажанаев, С.М. Алексеева

Приготовлениеиприменениекомпозиционногоге-

П755 мопрепарата:научно-практическиерекомендации.–Улан- Удэ: Изд-во БГСХА им. В.Р. Филиппова, 2015 – 18 с.

Научно-практическиерекомендациисоставленынаоснованииэкс- периментальныхисследований,проведенныхавтораминабольшомобъеме материала. В работе освещены вопросы приготовления композиционногогемопрепаратанаосновекровиубойного крупногорогатогоскота с использованием молочной сыворотки и молочно-кислых бактерий. Показаны результаты применения препарата лабораторным и сельскохозяйственнымживотным,определеныоптимальныедозыипорядокприменения композиционного гемопрепарата для повышения содержания полезной микрофлоры в желудочно-кишечном тракте животных. Рекомендации предназначены для ветеринарных специалистов, студентов факультета ветеринарной медицины, аспирантов.

УДК 619:579 (07)

© Дансарунова О.С., Цыдыпов В.Ц., Ковалева Н.В., Будажанаев Б.Ц., Алексеева С.М., 2015 © ФГБОУ ВО «Бурятская государственная

сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова», 2015

2

Введение

Вжизнедеятельности организма животного важнейшую роль играет нормальный микробиоценоз, а именно микрофлора кишечника. Кишечная микрофлора обеспечивает постоянство внутренней среды макроорганизма. Благодаря сбалансированному соотношению и оптимальномуколичествуаэробныхи анаэробныхмикрооорганизмовв кишечнике осуществляется неспецифическая защита организма животного от бактерий, вызывающих кишечные инфекции, и обеспечивается выработка факторов иммунной защиты [1, С. 15-17].

Впоследниегодыведущееместосредиболезнейживотныхзанимают кишечные и острые респираторные инфекции, обусловленные нарушениямимикроэндоэкологииорганизма:дисбактериозом,иммунодефицитным состоянием и истощением адаптационных механизмов,поэтомуветеринарнаянаука находится всостоянии постоянного поискаоптимальнойстратегииитактикиборьбыза поддержаниездоровья животных, за обеспечение продовольственной безопасности и получение качественной и экологически чистой продукции животноводства. Поэтому на сегодняшний день остается актуальным применение научно обоснованной системы повышения ветеринарного благополучия животных с помощью физиологических методов коррекции микроэндоэкологии организма [2, С. 16-17].

Насегодняшнийденьперспективнымнаправлениемвветеринарной практике для профилактики и лечения заболеваний желудочнокишечного тракта животных является использование таких физиологических корректоровмикроэндоэкологии,какбиопрепаратынаоснове крови и молочно-кислых бактерий (бифидобактерии и лактобактерии). Кровь убойных животных представляет собой ценное сырье для производства профилактических средств, поскольку имеет высокую биологическуюценность,обусловленнуюзначительнымсодержанием хорошо усвояемых и полноценных белков, минеральных солей, фер- ментов,витаминовидругихвеществ[3,С.10-11].Следовательно,кровь как ингредиент композиционного гемопрепарата вызывает научный интересвпоискеновыхбиологическиактивныхсредстввпрофилактике дисбиозов и иммунодефицитных состоянийу животных.

Всвязисэтимнамипредложенатехнологияприготовленияиприменения композиционного гемопрепарата животным для повышения со- держанияполезноймикрофлорыжелудочно-кишечноготрактаиуменьше- ниячислапатогенныхиусловно-патогенныхмикроорганизмов.

3

1. Технология приготовления композиционного гемопрепарата

Данный препаратразработанна кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы, микробиологииивирусологииФГБОУВО«Бурятскаягосударственнаясельскохозяйственная академияим. В. Р. Филиппова».

Способ приготовления композиционного гемопрепарата состоит из смешивания изъятой крови убойного крупного рогатого скота с молочной сывороткой, сквашенной при 37°С чистыми культурами в дозеLactobacillusplantarum2x109 КОЕ,Lactobacillusfermentum2x109

КОЕи Bifidobacteriumbifidum5x108 КОЕ. В качестве антикоагулянта и консерванта крови использовали цитрат натрия в количестве 3,8 г. на 1 л. крови. Кровь смешивали с молочной сывороткой в соотношении 1,5:1. Емкости для смешивания и хранения крови предварительно стерилизовали, охлаждали и вносили заданное количество молочной сыворотки. Плотно закрытые емкости с предварительно обработанной кровью хранили при температуре +4/+6°С. Композиционный гемопрепарат использовали по мере надобности в течение 30 суток. В 1 мл композиционного гемопрепарата содержалось лактобактерий 4х109 кл/мл культуры, бифидобактерий 5х109 кл/мл культуры. В процессе хранения количество клеток молочно-кислых бактерий

LactobacillusplantarumиLactobacillusfermentumснизилосьдо1,1х109 кл/мл культуры, Bifidobacterium bifidum снизилось до 1,0х108 кл/мл культуры.

2. Влияние композиционногогемопрепарата на кишечную микрофлору лабораторныхживотных

Определениебезвредностикомпозиционногогемопрепаратапроводилипутемпостановкибиопробынабелыхмышахикроликах.Для поставленной задачи было сформировано 4 группы животных. Первыедвегруппы животныхсостоялиизбеспородныхбелыхмышейсо среднейживоймассой21,9±0,903по5особей–опытнаяиконтрольная. Мышам опытной группы назначали композиционный гемопрепарат пероральнымспособомвдозе1млна20гмассытелаживотного1раз в сутки в течение 15 дней. Перед введением заданного средства и на 5-е, 10-е, 15-е сутки эксперимента был определен количественный и качественныйсоставкишечноймикрофлорыживотных.Взвешивание белых мышей проводили до применения композиционного гемопре- паратаина15-есуткиотначалаопыта.Результатыэкспериментапред-

4

ставлены в таблицах 1 и 2.

Вторыедве группыживотныхсостоялиизкроликовпороды«Ве- ликан»ввозрасте6-7месяцевсосреднейживоймассой1,61±142,2по 5особейвкаждой–опытнаяиконтрольная.Животнымопытнойгруп- пыназначаликомпозиционныйгемопрепаратпероральнымспособом 1 раз всутки вдозе 2мл/кг. Забор фекалий для определения видового и количественного состава микрофлоры кроликов проводили до при- менениязаданногосредства,на7-е,14-е и21-есуткиотначалаопыта. Взвешивание кроликов проводили до применения композиционного гемопрепарата ина21-есуткиопыта.Результатыэкспериментапред- ставлены в таблицах 3 и 4.

Таблица 1 – Динамика концентрации микроорганизмов в кишечном содержимом белых мышей при пероральном введении композиционного гемопрепарата (M±m, n=5)

Примечание:достоверностьразличийсисходнымколичеством*р 0,05;

**р 0,01

Вопытной группе белыхмышейдо применениякомпозиционного гемопрепарата общее микробное число составило (3,4±0,45)х108, лактобактерий (3,2±0,46)х106, бифидобактерий (4,3±0,62)х107, энтеробактерий (5,5±0,67)х106, энтерококков (3,9±2,7)х104. На 5-е сутки опыта отметилось увеличение общего микробного числа до (5,4±11,68)х108,лактобактерийдо(1,7±4,51)х107,бифидобактерийдо (2,5±3,00)х108 и уменьшение энтеробактерий до (2,0±2,97)х106, энте-

5

рококков до (0,8±1,61)х104, соответственно. На 10-е сутки применения композиционного гемопрепарата продолжалось увеличиваться количество лактобактерий до (3,3±7,12)х108, бифидобактерий до (3,4±0,87)х109 и общее микробное число до (4,8±0,64)х109, также незначительноувеличилоськоличествоэнтеробактерийдо(3,6±0,64)х108

иэнтерококков до (1,8±0,01)х104. На 15-е сутки эксперимента продолжался рост бифидобактерий до (3,7±0,30)х109 и общего микробногочисладо(4,5±1,57)х1010,незначительноуменьшилосьчислолактобактерий до (3,2±0,28)х108, энтеробактерий до (3,5±0,15)х106 и энтерококков до (1,7±7,4)х104.

Убелых мышей контрольнойгруппы общее микробное число до постановки опыта составило (4,3±0,32)х108, лактобактерий (2,9±1,66)х106, бифидобактерий (3,9±0,62)х107, энтеробактерий (2,5±1,19)х106 иэнтерококков(2,6±0,2)х104.На5-е суткиэксперимента отметилось уменьшение количества бифидобактерий до (1,5±2,84)х107, лактобактерий до (2,5±3,81)х106, общего микробного числа до (3,4±5,65)х108, увеличение числа энтеробактерий и энтеро-

кокковдо (3,5±2,87)х106, (1,9±1,80)х104, соответственно. На 10-е сут-

ки проведения эксперимента уменьшилось количество энтеробактерий до (3,3±1,01)х106 и общего микробного числа до (2,1±0,65)х108, количествобифидобактерий,лактобактерийиэнтерококковувеличи-

лось до (2,1±0,37)х107, (2,5±0,72)х107 и (4,5±0,23)х104, соответствен-

но.На 15-есуткиопытаколичестволактобактерийибифидобактерий

иобщее микробное число увеличилось до (2,6±0,90)х107, (2,4±1,35)х107, (3,1±0,80)х108, соответственно, незначительно уменьшилось число энтеробактерий до (3,2±0,74)х106 и энтерококков до

(2,7±0,21)х104.

Таблица 2 – Влияние композиционного гемопрепарата на прирост живой массы белых мышей в течение 15 суток, г

Примечание:достоверностьразличийсисходнымколичеством***р 0,001

6

Средняя масса белых мышейопытной и контрольной групп к началу исследования составила 20,8±1,68 и 21±0,70 г, соответственно. Через 15 суток после начала применения композиционного гемопрепарата средняя масса белых мышей опытной группы составила 32,2±1,24 г, что на 7,6 г больше, чем у мышей контрольной группы – 24,6±0,60 г. Наибольший привес отмечается у животных опытной группыисоставляет54,8%,чтона37,7%больше,чемубелыхмышей контрольнойгруппы.

Применение композиционного гемопрепарата опытной группы белых мышей в дозе 1 мл на 20 г массы тела животного 1 раз в сутки втечение15днейпривелокзначительномуувеличению численности полезной микрофлоры: бифидобактерий на 86,0%, лактобактерийна 92% и уменьшению количества условно-патогенных микроорганизмов – энтеробактерий на 63,6%, энтерококков на 43,5%, тогда как у мышейконтрольнойгруппыколичествобифидобактерийсократилось на 61,5%, увеличилось содержимое лактобактерий на 89,6%, энтеробактерий на 28%, энтерококков на 3,8%. Применение композиционного гемопрепарата способствовало приросту живой массы белых мышей опытной группы на 54,8%.

Таблица 3 – Динамика концентрации микроорганизмов в кишечном содержимом кроликов припероральном введении

композиционного гемопрепарата (M±m, n=5)

Примечание:достоверностьразличийсисходнымколичеством*р 0,05;

*** р 0,001

7

Укроликов опытной группы до применения композиционного гемопрепарата общее микробное число составило (4,2+0,74)х108, бифидобактерий(3,5+1,0)х106,лактобактерий(2,4+0,22)х106,энтеробактерий (3,9+0,48)х106, энтерококков (3,6+1,38)х106. На 7-е сутки применения композиционного гемопрепарата общее микробное число сократилосьдо(2,3+0,46)х108,аколичество бифидобактерий,лактобактерий,энтерококкови энтеробактерийвырослодо(7,5+0,76)х106, (3,9+0,52)х106, (5,9+1,40)х106, (4,6+1,12)х107, соответственно. На

14-есуткиэкспериментаукроликовопытнойгруппыотметилосьрез- коеувеличениебифидобактерийдо(4,4+0,61)х108, лактобактерийдо (5,5+0,35)х107 и общего микробного числа до (2,4±0,87)х109, наблюдалось снижение количества энтеробактерий до (4,1+0,68)х106 и энтерококковдо (3,1+0,80)х106.На21-есуткиэкспериментаукроликов опытной группы отметилось увеличение бифидобактерий, лактобактерий и общего микробного числа до (3,3+0,15)х109 , (2,3+0,62)х 108

и(3,4+0,51)х1010, соответственно, снизился рост энтеробактерий до (2,7+086)х106 , число энтерококков не изменилось (3,1+0,63)х106.

Укроликов контрольной группы общее микробное число составило (3,6+1,70)х108, бифидобактерий (3,2+1,52)х106, лактобактерий (2,7+0,74)х106, энтеробактерий (3+0,53)х106, энтерококков (3,4+1,0)х106. На 7-е сутки опыта выросло общее микробное число до (17,8+7,14)х108, количество бифидобактерий до (3,5+1,04)х106 и энтеробактерий до (3,5+0,60)х107, одновременно уменьшилось количество лактобактерий до (2,2+0,32)х106 и энтерококков до (2,4+0,60)х106. На 14-е сутки исследования выросло количество лактобактерий до (4,4+0,5)х106 и энтеробактерий до (4,0+0,50)х107, отметилосьснижение бифидобактерийдо(3,2+0,23)х106, энтерококков до (1,6+0,34)х106 иобщегомикробного числадо(11,9+4,77)х108 микробных клеток. На 21-е сутки отметилось увеличение бифидобактерий, энтерококков и общего микробного числа до (2,7+0,54)х107, (4,3+0,76)х106 и (2,2+1,08)х108,иснизилоськоличестволактобактерий

иэнтеробактерий до (2,1+0,69)х106 и (2,7+0,50)х107, соответственно.

8

Таблица 4 – Влияние композиционного гемопрепарата на прирост живой массы кроликов в течение 21 дня, кг

Примечание:достоверностьразличийсисходнымколичеством***р 0,001

Средняя масса кроликов опытной и контрольной групп к началу исследованиясоставила1,56±0,17и1,58±0,24г,соответственно.Через 21деньпосленачалаприменениякомпозиционногогемопрепаратасредняя масса кроликов опытной группы составила 1,91± 0,18 г, что на 0,1 г больше, чем у кроликов контрольной группы 1,81±0,25 г. Наибольший привесотмечаетсяуживотныхопытнойгруппыисоставляет 22,4%, что на 7,9% больше, чем укроликов контрольной группы.

Применение композиционного гемопрепарата опытной группе кроликов в дозе 2 мл на кг/ тела животного 1 раз в сутки в течение 2 дней привело к значительному увеличению численности полезной микрофлоры: бифидобактерий на 94,2%, лактобактерий на 95,8%, уменьшениюколичестваусловно-патогенныхмикроорганизмов–эн- теробактерий на 69,2%, энтерококков на 86,1%, тогда как у кроликов контрольной группы количество бифидобактерий увеличилось на 84,3%, энтеробактерий на 90%, энтерококков на 26,4%, сократилось количество лактобактерий на 77,7%. Применение композиционного гемопрепарата способствовало приросту живой массытела кроликов опытной группы на 22,4%.

3. Применение композиционногогемопрепарата собакам

ОпытвыполнялсявпитомникеУлан-Удэнскогоотрядаведомствен- ной охраны филиала ФГП ВО ЖДТ России на Восточно-Сибирской железной дороге в поселке Южлаг.

Для постановки опыта были отобраны 12 собак со средней массойтела40,6±2,20кг,породы немецкойовчарки,САО(средне-азиат- ской овчарки) и кавказской овчарки. Из них сформировали две группы по 6 животных в каждой – опытная и контрольная.

9

Вопытной группе собакам ежедневно пероральным способом

втечение 21 дня применяли композиционный гемопрепарат из расчета по 2 мл на 1 кг массы тела животного. Перед применением композиционного гемопрепарата было произведено взвешивание собак, определен количественный и качественный состав кишечной микрофлоры собак опытной и контрольной группы. Результаты экспериментов представлены в таблицах 5 и 6.

Таблица 5 – Динамика концентрации микроорганизмов в кишечном содержимом собак при пероральном введении композиционного гемопрепарата (M±m, n=5)

Примечание:достоверностьразличийсисходнымколичеством*р 0,05;

*** р 0,001

До применения композиционного гемопрепарата общее микробноечислоу собакопытнойгруппысоставило (20,74±1,3)х109, бифидобактерий (4,9±0,3)х109,лактобактерий (37,63±7,2)х109,энтеробак-

терий (23,21±0,95)х108,энтерококков(0,45±0,04)х106.На7-е суткиот начала применения композиционного гемопрепарата уменьшилось общее микробное число до (137,7±8,2)х106, энтеробактерий до

(10,02±0,01)х106, энтерококков до (0,41±0,04)х106, а количество би-

фидобактерий и лактобактерий выросло до (8,3±0,5)х109, (67,8±2,1)х109, соответственно. На 14-е сутки эксперимента у собак опытной группы отметилось увеличение бифидобактерий до (8,38±0,6)х109, лактобактерий до (75,3±3,2)х109. Наблюдалось сни-

10