Методические рекомендации по изучению морфометрических особенностей строения внутренних органов с реализацией в программах по реинтродукции амурского тигра и леопарда дальневосточного

Необходимые анализы и обследования, которые должны пройти все особи, предназначенные для размножения:

1. Оценить поведение, двигательную активность, остроту зрения леопарда и т.п. путем наблюдений. Необходимо учитывать, что на поведение леопарда может влиять присутствие наблюдателя.

2.Провести под общим наркозом тщательное клиническое обследование всех особей в возрасте двух лет и более.

Клиническое обследование дикого животного.

Оценивают телосложение: правильное, неправильное, степень выраженности мышечной массы, развитость костяка, выраженность головы. Необходимо посчитать количество пальцев на лапах (врожденное искривление лучевых и локтевых костей, отсутствие одного пальца было зафиксировано, как минимум, в одном выводке леопардов в неволе).

Упитанность оценивают по наличию подкожного жира. Она может быть повышенной (ожирение), адекватной (хорошая), уменьшенной (худой), низкой (истощение).

Состояние шерстного покрова: цвет, чистота, гладкость прилегания, крепость волоса, равномерность, признаки сечения волос или облысения.

Состояние кожи: цвет, эластичность, чистота, нарушения целостности, состояние подкожной клетчатки, наличие отеков. Если имеются раны, шрамы (рубцы) определяют их положение относительно частей тела, длину, глубину, давность и предмет нанесения.

Лимфатические узлы, подчелюстные, предлопаточные, коленной складки,

Носовая полость осматривается при помощи риноскопа или электрического фонарика. Отмечается наличие выделений, их характер (слизистые, гнойные, геморрагические), цвет и влажность слизистой оболочки.

Ротовая полость осматривается с использованием специального зевника,

наличие язв, папиллом, или других патологий. Проводится исследование зубов: их количество, цвет, состояние эмали, измерение высоты и толщины, наличие и давность повреждений, челюсть с недокусом или перекусом.

При исследовании глаз отмечают наличие выделений, прозрачность роговицы, цвет коньюктивы. Используют офтальмоскоп. Глаза необходимо смазывать специальной смазкой или глазной тетрациклиновой мазью, чтобы избежать высыхания роговицы, накрывать мягкой повязкой на время всей анестезии.

Осмотр ушных раковины, наружного слухового прохода на наличие выделений, эктопаразитов, ран, степени загрязнения, исследование среднего уха с помощью отоскопа с подсветкой или электрического фонарика, микроскопическое исследование содержимого из ушей.

Исследования сердечно-сосудистой системы. Частоту пульса подсчитывают, приложив пальцы к бедренной артерии на внутренней поверхности бедра. У молодых животных более частый пульс. Аускультацией определяют количество сердечных сокращений за 1 минуту (Таблица 1), ритм сердечных сокращений, возможное ослабление или усиление сердечных тонов, наличие их расщепления или раздвоения, аритмии, шумы. При необходимости и по возможности проводят электрокардиограмму. Кровеносные сосуды, из которых берут кровь у тигра: срединная и боковая подкожные вены передней конечности, бедренная вена, головная вена, боковая вена хвоста и яремная вена. Размер шприца и иглы зависит от вены, из которой берут кровь. Обычно применяют размеры иглы 22-18 длиной 2,54-3,81 см. Объем шприца должен быть 6-25 мл. В лучшем случае от каждой особи необходимо взять как минимум 25 мл крови.

Исследование дыхательной системы. Частоту дыхания подсчитывают по движению грудной клетки за одну минуту (Таблица 1). Характер дыхательных шумов определяют путем аускультации при помощи фонендоскопа.

Исследование пищеварительной системы. Проводят исследование пищевода: пальпация, при необходимости зондирование. Осмотром и

13

пальпацией определяют объем живота, его конфигурацию, консистенцию. У животных желательно исследовать анальное отверстие и состояние анальных желез, которые расположены по бокам анального отверстия, а их протоки открываются в конечную часть прямой кишки. Синдром поражения анальных желез: увеличение их объема, при надавливании выделяется большое количество содержимого с резким запахом. Такое часто регистрируют при болезнях обмена веществ. Отбирают пробы каловых масс для лабораторных исследований.

Половая система самок. Определяется состояние молочной железы, слизистой оболочки влагалища.

Половая система самца. Семенники осматриваются, делаются замеры толщины, длины, проводят пальпацию семенников, пальпация паховых каналов, ректальное исследование предстательной железы (у одного самца дальневосточного леопарда в неволе был отмечен крипторхизм).

Также осматривается слизистая оболочка препуциальной полости: цвет, повреждения.

Мочевыводящая система. Исследование почек и мочевого пузыря: пальпация (наружная и внутренняя) - величина, форма, консистенция, наличие инородных тел в мочевом пузыре, отбор проб мочи путем катетеризации. Дополнительные исследования: лабораторное исследование мочи, рентгеновская картина почек и мочевого пузыря.

Дополнительные исследования проводятся по необходимости и при наличии определенной аппаратуры: артериальное и венозное давление, скорость круга оборота крови, электрокардиограмма, фонокардиограмма, рентгеноскопия, рентгенография, ультразвуковое и эндоскопическое исследования, компьютерная томография; трахео-, бронхоскопия, исследование носового истечения, секрета верхних дыхательных путей.

14

Сбор и анализ биологических материалов

Сбор и анализ биологических материалов (крови, экскрементов, мочи, кожи, шерсти, кала) позволяет получить ценные сведения о конкретной особи и о виде в целом. Пробы крови, если их правильно брали и хранили, скажут о физиологическом состоянии животных, а именно, состоянии крови и кроветворных органов, печени, почек, эндокринной и половой систем. Анализ образцов крови позволит узнать об эффективности процессов пищеварения и может первым известить о наличии токсинов в окружающей среде, которые неблагоприятным образом воздействуют не только на тигров, но и на другие виды животных. Генетический анализ образцов крови и кожи позволит лучше понять отношения между особями. Проверка на наличие заболеваний, посредством взятия крови и смывов со слизистых оболочек, может дать возможность узнать заранее об угрозе дикой популяции тигра. Не все эти анализы нужно проводить сразу же, образцы можно сохранить для дальнейших исследований. Поскольку мы получаем больше информации о животных и угрозах их выживанию, биологические материалы дают нам ключ к определению проблем и принятию решений.

Нужно стараться взять как можно больше биологического материала, но при этом всегда помнить, что безопасность животного является самым главным.

Анализ крови

Анализ крови по следующим показателям: гематокрит, гемоглобин, количество эритроцитов, среднее содержание гемоглобина в эритроцитах (МСН), средний объем эритроцитов (MCV), средняя концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС), количество лейкоцитов и лейкоцитарная формула, количество тромбоцитов.

Биохимический анализ сыворотки крови проводится по следующим показателям: общий белок, альбумин, глобулин, мочевина, креатинин, аланинаминотрансфераза, щелочная фосфатаза, гамма-глутамил трансфераза, общий билирубин

15

Исследование мазков крови на наличие гемопаразитов, включая Babesia spp и Haemobartonella (мазки высушены на воздухе и зафиксированы в метаноле в течение 1 минуты).

Исследование образцов крови с ЭДТА методом ПЦР на наличие дирофилярий, бабезий {Babesia spp) и вируса кошачьей лейкемии.

Паразиты

Эктопаразиты должны быть собраны и зафиксированы в 70% этиловом спирте для последующей идентификации и хранения.

Для выявления эндопаразитов необходимо исследовать свежие экскременты. Для фиксации эндопаразитов рекомендуется 70% этиловый спирт.

Микробиологические исследования экскрементов

Взять 3 образца свежих экскрементов для посева на патогенную флору

(бактерии Salmonella и Campylobacter spp).

Образцы экскрементов также необходимы для исследования методом ПЦР на наличие вируса панлейкопении и коронавируса кошачьего энтерита.

16

Генетические исследования

Образцы крови с ЭДТА (или кровь в растворе трасферрина, этаноламина и селена можно использовать для определения степени генетического разнообразия и гетерогенности генов класса II главного комплекса гистосовместимости у леопардов, содержащихся в неволе.

Возбудители респираторных заболеваний

Назальный мазок необходимо использовать для посева наBordetella.

Орофарингеальный и конъюнктивальные мазки необходимо исследовать методом ПЦР на наличие калицивируса кошек, хламидофилы, и вируса герпеса кошек.

Орофарингеальные мазки в транспортной системе для вирусов должны быть переданы для посева на калицивирус и вирус герпеса кошек.

Банк биологических образцов

У каждой особи леопарда необходимо взять следующие образцы:

ИССЛЕДОВАНИЯ, КОТОРЫЕ ЖЕЛАТЕЛЬНО ПРОВЕСТИ ДЛЯ КАЖДОГО ЖИВОТНОГО, ПРЕДНАЗНАЧЕННОГО ДЛЯРАЗМНОЖЕНИЯ:

17

1.Исследование репродуктивной системы с помощью ультрасонографии.

2.Сбор спермы у самцов и хранение в жидком азоте.

3.Анализ мочи

Для анализа мочи необходимо использовать свежую порцию мочи, желательно собранную с помощью катетера. Необходимо провести макроскопический анализ и микроскопическое исследование осадков мочи, определить кислотность, удельный вес, количество белка, креатинина и бактерий.

Распространенные вирусные заболевания диких животных семейства кошачьих

Небольшие популяции, особенно с низким генетическим разнообразием, подвержены риску вымирания вследствие вспышек различных инфекций. Пока мало известно о риске распространения инфекционных заболеваний в популяции дальневосточного леопарда, но она потенциально подвержена ряду заболеваний, переносчиками которых являются домашние кошки, собаки и виды-жертвы. Растущее число случаев проявления симптомов чумы плотоядных у амурских тигров говорит о том, что популяции кошачьих на Дальнем Востоке России подвергаются угрозе, которая еще мало изучена. Мало также известно и заболеваниях, угрожающих дальневосточному леопарду. Этот важный аспект необходимо учитывать при планировании мероприятий по сохранению подвида

Всестороннее изучение инфекционных и неинфекционных заболеваний и контроль за их распространением являются неотъемлемой частью как программы по сохранению существующей популяции дальневосточного леопарда на юго-западе Приморья, так и программы создания второй популяции подвида в его историческом ареале. Цель нашей работы – разработать стратегию контроля за распространением заболеваний, в рамках

18

которой будут определены основные заболевания, угрожающие реинтродуцированной популяции леопарда и тигра.

Важным аспектом оценки риска заболевания у видов является определение, действительно ли вид имеет какое-то заболевание или является носителем или был подвержен потенциально инфекционным агентам. Многие обследования «района распространения болезни» были просто обследованиями титров антител, которые не имеют прямой связи с заболеваниями и смертельными исходами. Патология как наука о поступательном движении остается самым надежным средством определения является ли болезнь результатом контакта. Так как новыетехнологии дают возможность выявить токсины и инфекционные агенты, то эта связь агента с патологическим состоянием станет более важной. В противном случае все программы будут парализованы информацией без контекста. Так как возобновление заболевания во время эксперимента невозможно у большинства диких животных, то постулат Коха у патологов, который определяет патоген (или токсины) в рамках соответствующего повреждения, становится весьма полезным.

Однако, после теоретического анализа риска заболеваемости и изучения информации, полученной в ходе исследований, проведенных на территории предполагаемого выпуска леопардов, было установлено, что существует ряд заболеваний, представляющих собой потенциальную угрозу для реинтродуцированной популяции:

Вирусчумы плотоядных

Риск заражения:

Контакт с не вакцинированными домашними собаками или в местах охоты, где находятся инфицированные туши зараженных животных. Эпизоотия вируса собачьей чумы в соседних популяциях плотоядных предшествовала эпизоотии двух вирусов собачьей чумы среди крупных животных из семейства кошачьих в Калифорнии и Африке. В Африке увеличение доминирования серотипа вируса собачьей чумы у собак, живущих в соседних деревнях, предшествовало эпизоотии

19

львов.

Патогенность:

Занимает второе место по самому высокому коэффициенту смертности любого инфекционного заболевания, после бешенства, у домашних собак. Домашние кошки экспериментально зараженные вирусом собачьей чумы остаются бессимптомными и не распространяют вирус.

Индивидуальные факторы хозяина играют роль в проявлении болезни, например, симптоматический против бессимптомного - кишечный, респираторный и симптомы центральной нервной системы.

Длительный иммунитет у выживших животных.

Способность передаваться:

Прямой контакт с собаками и свободно передвигающимися дикими животными, способными переносить инфекцию.

У плотоядных вирус собачьей чумы передается, аэрозольным путем через дыхательных систему во время острой фазы инфекции. В это время все выделения из организма являются инфицированными и вирус распространяется во внешнюю среду независимо от того есть ли симптомы у животного.Вирус распространяется во все секреции в течение 60-90 дней.

Восприимчивость:

В Калифорнии в 1992 году во время эпизоотии вируса собачьей чумы 16 из 17 погибших животных были крупными животными семейства кошачьих Старого Светалеопарды, львы, тигры (все принадлежали к роду пантер). Только кошки рода Пантеры погибли от инфекциивируса собачьей чумы. Остается определить является ли это результатом повышенной предрасположенности представителей этого рода к развитию тяжелой клинической болезни или просто результатом содержания слишком большого числа представителей этого рода в неволе с повышенным риском заражения вирусом собачьей чумы.

20

Кошачья лейкемия

Риск заражения:

Географическое размещение во всем мире.

Риск заключается в том, что свободно передвигающиеся неприрученные животные из семейства кошачьих могут быть инфицированы вирусом кошачьей лейкемии от свободно передвигающихся домашних кошек, и зависит от преобладания вируса кошачьей лейкемии внутри предыдущей популяции и вероятности, что индивидуумы внутри двух популяцийстолкнутся друг с другом во время активной вирусемии. Домашняя кошка являетсярезервуаром для вируса кошачьей лейкемии. Дикие животные из семейства кошачьих, встречающиеся в районах проживания домашних кошек, потенциально рискуют заразиться инфекцией. Кошки, инфицированные вирусом кошачьей лейкемии, могут оставатьсябессимптомными годами и даже иметь обычный срок жизни. В этом случае тревогу вызывает величина риска, которую представляют для других кошек эти здоровые, устойчиво инфицированные животные.

Патогенность:

Это заболевание вызывает устойчивые инфекции у домашних кошек. Множественные факторы вируса и реципиента способствуют патогенезу болезни, которыйзависит от генетической разновидности вируса, возраста и кошек.Три исхода, наблюдаемые удомашних кошек:

1.Болезнь, протекающая и заканчивающаяся в определенный срок (большинствоинфекций, временная виремия).

2.Устойчивая активная инфекция (устойчивая виремия).

3.Латентный вирус - никаких вирусов и никакого распространения во время латентности (бессимптомный или может перейти в устойчивую виремию).

Около 30% пораженных животных остаются виремическими и клиническая болезнь развивается, тогда как нейтрализующееантитела развиваются в 60% и эти животные не находятся в группе риска заболевания. Примерно в 30% из этих 60% развиваетсякратковременная виремия.

21