Вопрос 164 Фитохимические методы анализа лекарственного растительного сырья, содержащего дубильные вещества. Методы выделения и идентификации

1. Экстракция растительного материала орг. растворителями: обрабатывают сырье петролейным эфиром, бензолом или смесью бензол-хлороформ (1:1) для удаления основной массы хлорофилла, терпеноидов и липидов → экстрагируют этиловым эфиром, который извлекает некоторые фенольные соединения, в т.ч. оксикоричные кислоты и катехины → проводят экстракцию этилацетатом, в результате которой в экстракт переходят лейкоантоцианы, димерные проантоцианидины, эфиры оксикоричных кислот и др. → растительный материал экстрагируют метиловым или этиловым спиртом, при этом в раствор переходят многие дубильные вещества и другие фенольные соединения.

2. Выделение фенольных соединений, в т.ч. и некоторых компонентов дубильных веществ, осаждением из водных или спирто-водных растворов солями свинца. Полученные осадки затем обрабатывают разбавленной H2SO4. Суммарные извлечения дубильных веществ разделяют на индивидуальные компоненты с помощью хроматографических методов.

3. Для более детальной идентификации используют: УФ, ИК (инфракрасной) и ПМР (протонно-магнитного резонанса) методы.

Качественные реакции:

Для качественного определения предварительно используют водное извлечение.

Реакции осаждения:

1. Образование осадков с растворами желатина (образуется муть, исчезающая при

добавлении избытка реактива)

2. Образование осадков с растворами алкалоидов (положено в основу

использования дубильных веществ в качестве противоядия при отравлении алкалоидами. В результате появляется осадок)

3. Образование осадков с растворами солей тяжелых металлов (с ацетатом свинца

образуется желтый осадок)

4. Реакция с бромной водой (Конденсированные дубильные в-ва образуют желто-

оранжевый осадок)

Цветные реакции:

1. Реакция с р-ром железоаммониевых квасцов (или хлорида окисного железа):

Гидролизуемые – черно-синее окрашивание

Конденсированные – черно-зеленое

2. Реакция с диазореактивом. При этом, как и в случае с другими фенольными

в-вами, развивается различная окраска (коричневая и т.д.).

3. Реакция с формальдегидом в присутствии hCl.

Конденсированные дубильные в-ва – образуется кирпично-красный осадок.

Гидролизуемые дубильные в-ва – синее или фиолетовой окрашивание.

4. Реакция c NaNO3 и HCl. Гидролизуемые дубильные в-ва дают коричневое окраш-е

5. Реакция с уксусной к-той и ацетатом свинца. Гидролизуемые дубильные в-ва

образуют осадок. При наличии конденсированных дубильных веществ фильтрат окрасится в черно-зеленый цвет от прибавления р-ра железоаммонийных квасцов и ацетата свинца.

6. Реакция с бихроматом калия. Наблюдается потемнение раствора или выпадение

желто-коричневого осадка.

7. Реакция с раствором Фолина - Дениса (смесь фосфорномолибденовой и

фосфорновольфрамовой кислот). Образуется вольфрамовая или молибденовая синь.

Количественное определение

1. Титрометрический метод (или метод Левенталя), основанный на окислительных реакциях (оксидиметрия). Оксидиметрия для дубильных веществ проводится путем окисления перманганата калия (перманганатометрия).

2. Метод Якимова и Курницковой, основанный на осаждении дубильных веществ раствором желатина, определенной концентрации.

3. Фотоколориметрическимй метод, основанный на реакциях с солями окисного железа, фосфорно-вольфрамовой кислотой и т.д.

4. Метод нефелометрический. Основан на измерении интенсивности света, рассеянного суспензией частиц, находящихся в анализируемом растворе. Интенсивность рассеянного света Iр связана пропорциональной зависимостью с размерами и количеством вещества, находящихся в частицах.