методичка рб

При отборе проб бахчевых культур, капусты, тыквы и других крупных овощей каждая единица продукции рассматривается как точечная проба. Точечные пробы отбирают методом случайной выборки в 3 - 4 местах. Формируют объединенную пробу, из нее отбирают среднюю

пробу массой не менее 3,0 кг.

Количество средних проб устанавливают в соответствии с разделом 4.2.

4.3.8.3.Отбор проб муки, круп, макаронных изделий, бобовых культур, орехов, сахара

икондитерских изделий.

Объем выборки проб муки, крупы, макаронных изделий, бобовых культур, орехов, сахара и кондитерских изделий и т. п. из мешков зависит от количества мешков в партии и определяется в соответствии с нормами отбора проб растениеводства (табл. 12).

Из зашитых мешков точечные пробы отбирают мешочным щупом.

Для отбора проб продуктов, затаренных в коробки, ящики, в выборку включают 10 - 20 % упаковочных единиц, но не менее трех. Отбор точечных проб проводят из раскрытой тары в трех точках (сверху, из середины и снизу). Общая масса точечных проб не менее 1,0 кг. Из точечных проб составляют объединенную пробу, из которой после тщательного перемешивания отбирают методом квартования среднюю пробу. Объем средней пробы не менее 1,0 кг.

Объем средней пробы орехов не менее 0,6 кг.

Количество средних проб устанавливают в соответствии с разделом 4.2.

Отбор проб продуктов, расфасованных в потребительскую тару, производится по п. 4.3.9.

4.3.9. Отбор штучных продуктов

При отборе проб штучных продуктов (консервы, концентраты, соленья, соки, напитки, вина, коньяки, ликероводочная продукция и т. п.), бутылированной воды, продуктов, расфасованных в потребительскую тару (крупы, мука, макаронные изделия, кондитерские изделия, чай, кофе, специи и т. п.) и не упакованных в потребительскую тару (хлеб, булочные и сдобные изделия), единицы штучных продуктов являются точечными пробами.

При отборе проб в выборку включают количество упаковок в соответствии с п. 4.2, (табл. 3) (или 3 % упаковок, но не менее двух).

Из каждой упаковки отбирают 10 % от количества продуктов в упаковке при массе штучных продуктов 0,2 - 3,0 кг (л), но не менее 1,0 кг (л), и 20 % мелких штучных продуктов массой менее 0,2 кг, но не менее 1,0 кг (л).

Отбор проб штучной продукции икры лососевых и осетровых рыб при массе штучной продукции 0,03 - 0,05 кг составляет 1 % от объема партии, но не менее 5 банок.

Хлеб, булочные и сдобные изделия, неупакованные в потребительскую тару, отбирают от партии (с лотков, из ящиков, мешков и т. п.) как штучные продукты согласно п. 4.2 (табл. 3).

При мелкой расфасовке хлебобулочных изделий (менее 0,2 кг) от партии отбирают 20 % штучных изделий.

Из точечных проб составляют объединенную пробу, из которой после тщательного перемешивания отбирают среднюю пробу. Масса средней пробы не менее 1,0 кг (л).

Масса объединенной и средней пробы чая, кофе, специй составляет не менее 0,5 кг.

Масса средней пробы икры лососевых и осетровых рыб не менее 0,25 кг.

Масса (объем) средней пробы бутылированной питьевой воды, столовых и минеральных вод промышленного розлива для измерения суммарной альфа- и бета-активности должна быть не менее 2 литров.

Количество средних проб устанавливают в соответствии с разделом 4.2.

4.3.10. Отбор проб продуктов специализированного детского питания, лечебного питания, питания дошкольников и школьников, биологически активных добавок к пище и питания

беременных и кормящих женщин

4.3.10.1.Продукты детского питания на молочной основе (адаптированные смеси, сухие и жидкие молочные продукты).

При расфасовке детского питания в крупную транспортную тару в выборку включают 3 % упаковок, но не менее двух. От продуктов детского питания, расфасованного в мелкую тару - 5 % упаковок, но не менее трех. Из каждой отобранной упаковки отбирают 1 % от всех штучных продуктов, но не менее 1 коробки (банки). Из точечных проб формируют объединенную пробу, из которой отбирают среднюю пробу. Масса средней пробы жидкого продукта 1,0

кг, сухого продукта - 0,6 кг.

4.3.10.2.Продукты детского питания на зерновой (крупяной) и плодоовощной основе.

Отбор проб производится по п. 4.3.10.1.

4.3.10.3.Продукты детского питания на мясной и рыбной основе.

Отбор проб производится по п. 4.3.10.1. Масса средней пробы 0,5 - 1,0кг.

4.3.10.4.Продукты специализированного лечебного питания.

Отбор проб производится по п. п. 4.3.10.1 - 4.3.10.3.

4.3.10.5.Продукты дошкольного и школьного питания.

Отбор проб производится как при отборе проб обычных продуктов питания (п. п.

4.3.1; 4.3.2; 4.3.9).

4.3.10.6. Биологически активные добавки к пище.

При расфасовке БАД в крупную потребительскую тару (0,3 - 1,0 кг) в выборку включают 3 % транспортных упаковок, но не менее двух. Отбор точечных проб сухих БАД и формирование средней пробы производят по п. 4.3.1.6 (Сухие молочные продукты), жидких по п. 4.3.1.1 (Молоко). Величина средней пробы не менее 0,5 кг.

При расфасовке БАД в потребительскую тару в виде упаковок с бластерами, капсулами, драже, упаковок с флаконами, бутылочками, пакетами, брикетами и т. п., упаковки рассматривают как штучную продукцию. В качестве точечных проб из партии отбирают 20 % штучных изделий. Из точечных проб составляют объединенную пробу, из которой после тщательного перемешивания изготавливают среднюю пробу. Масса объединенной и средней пробы для сухих БАД не менее 0,5 кг, для жидких - не менее 1,0 л.

4.3.10.7.Продукты для недоношенных детей.

Отбор проб производится по п.п. 4.3.10.1 - 4.3.10.3.

4.3.10.8.Продукты для питания беременных и кормящих женщин.

Отбор проб производится, как при отборе проб обычных продуктов питания (п. п.

4.3.1, 4.3.2, 4.3.4, 4.3.8, 4.3.9).

Подготовка проб для радиохимического анализа производится в соответствии с методическими указаниями Министерства здравоохранения РФ МУК 2.6.1.1194-03. Ниже приводится извлечение из них.

4.4.Правила упаковки и транспортирования средних проб

4.4.1.Отобранные для исследования жидкие пробы (молоко, молочные продукты, вода и др.) помещают в сухую чистую стеклянную или полиэтиленовую посуду (банки с навинчивающимися пробками, бутылки, флаконы), которую герметически закрывают. При необходимости скоропортящиеся пробы (молоко, молочные продукты и т. п.) консервируют 40 %-ным раствором формалина (1 - 2 мл/л).

4.4.2.Пробы корнеплодов, клубнеплодов, овощей, фруктов, бахчевых культур и т. п. помещают в двустенные полиэтиленовые или бумажные мешки и завязывают.

Сыпучие пробы (мука, крупы, макаронные изделия и т. п.) помещают в мешки из плотного полиэтилена и завязывают.

4.4.3.Пробы с большим содержанием влаги (зелень, ягоды и др.) взвешивают непосредственно после отбора, упаковывают в мешки из плотного полиэтилена и завязывают.

4.4.4.Пробы мяса, субпродуктов, костей, рыбы, птицы и т. п. во избежание порчи перед упаковкой завертывают в несколько слоев марли, смоченной 4 - 5 %-ным раствором формалина, помещают в мешки из плотного полиэтилена и завязывают.

4.4.5.Стеклянную, полиэтиленовую посуду, мешки обертывают пергаментной бумагой, обвязывают шпагатом и опечатывают. Каждую пробу снабжают этикеткой, на которой указывают номер и название пробы, дату и место отбора, ее массу, мощность дозы гамма-излучения от партии и гамма-фон в помещении, где хранятся продукты; в случае высушивания указывают массу сырой и высушенной пробы. Этикетку (опись) завертывают в целлофан (полиэтилен) и упаковывают вместе с пробой.

4.4.6.Упакованные образцы проб размещают в специально приспособленном ящике, перекладывают бумагой или ватой таким образом, чтобы обеспечить целостность отправляемого материала. Ящик опечатывают.

4.4.7.На отобранные пробы составляют сопроводительный документ (акт отбора проб) в 2 экземплярах.

Один экземпляр акта и опись проб упаковывают вместе с пробами, направляемыми на исследование. Второй экземпляр акта остается на предприятии, в торговом учреждении и т. п., где производится отбор проб.

4.4.8.В исследовательской лаборатории полученные пробы регистрируются в специальном журнале, форма которого должна соответствовать форме акта отбора проб.

5. Приготовление счетных образцов и измерение активности стронция-90 и цезия-137 в пробах пищевых продуктов

5.1.Подготовка проб к измерениям

5.1.1.Первичная подготовка проб к измерениям включает в себя обычную обработку пищевых продуктов на первом этапе приготовления пищи и измельчение их с целью лучшего усреднения пробы и увеличения массы пробы, которую можно разместить в измерительной кювете:

• клубни, корнеплоды, фрукты, пищевую зелень, мясо, рыбу и т. п. промывают проточной водой, удаляют несъедобные части продуктов, с колбасных изделий, сыра, с кондитерских изделий снимают защитную оболочку, измельчают с помощью ножа, мясорубки и т. п.;

• твердые продукты, крупяные, бобовые, макаронные, хлебобулочные изделия измельчают

спомощью ножа, мясорубки, терки, кофемолки;

• вязкие продукты (сгущенное молоко, мед, джемы и т. п.) при необходимости можно разбавлять до нужной консистенции дистиллированной водой, определив и зафиксировав исходную массу продукта и объем приготовленной смеси.

5.1.2.Приготовление счетного образца для измерения цезия-137 и стронция-90 зависит от используемого метода измерения и чувствительности используемой радиометрической установки.

При измерении нативных проб предварительно подготовленная проба размещается в выбранной измерительной кювете;

Выбор измерительных кювет определяется методикой измерения радионуклида, допустимым уровнем активности радионуклидов в пищевых продуктах; характеристики измерительных кювет приведены в инструкциях к используемым радиометрическим установкам;

Для определения массы измеряемого образца кювету взвешивают до и после ее заполнения.

5.1.3.При необходимости увеличения чувствительности применяемых при исследовании методов измерения возможно использование аттестованных и утвержденных в установленном порядке методов термического концентрирования или частичного, либо полного радиохимического выделения определяемого радионуклида.

Для радиохимического анализа всех радионуклидов, а также для спектрометрического определения стронция-90 пробы сушат в сушильном шкафу при 100ºС до постоянной массы, сжигают на песчаной бане до полного обугливания и окончания выделения газов, а затем озоляют в муфельной печи при 1000ºС до исчезновения тёмных частиц.

Вопросы к занятию:

1.Отбор проб для радиохимического анализа.

2.Подготовка проб для радиохимического анализа.

Занятие 14. Спектрометрическое определение цезия и стронция – 2 часа.

Цель занятия: освоить методику спектрометрического определения содержания радионуклидов в кормах, воде и пищевых продуктах.

Занятие проводится в ФГБУ «Станция агрохимической службы «Рязанская». Оборудование: спектрометр «Гамма-С».

Спектрометрический анализ радионуклидов основан на определении количества частиц излучения, присущих только данному радионуклиду. В частности, содержание цезия-137 определяется по количеству γ-частиц с энергией 661,66 кэВ, а стронция-90 – β-частиц с энергией 2,28 МэВ (эти частицы, строго говоря, образуются при распаде иттрия-90 – дочернего радионуклида). Для определения цезия пробу помещают в банку Маринелли и взвешивают, а банку ставят в счётный блок спектрометра. Для определения стронция пробу золы помещают на металлическую подложку и взвешивают, а затем подложку ставят в счётный блок спектрометра.

Вопросы к занятию:

1.Принцип спектрометрического анализа..

2.Методика спектрометрического анализа цезия и стронция.

Занятие15.Радиохимическое определение цезия и стронция – 2 часа.

Цель занятия: изучить принцип радиохимического анализа на примере оксалатного метода определения стронция-90.

1. Используемые вещества.

НСl — концентрированная, HNO3 — концентрированная, NH4OH —концентрированный, насыщенные растворы щавелевой кислоты и карбоната аммония, 20% раствор NaOH, "универсальная" индикаторная бумага, растворы носителей иттрия (50 мг/мл) и стронция (50 мг/мл) в пересчете на металлы, этанол и диэтиловый эфир.

2. Приготовление раствора носителя иттрия.

21,6 г Y(N03)3·6H2O растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Раствор отфильтровывают от возможных примесей через фильтр с синей полосой и отбирают параллельно три пробы по 1 мл. Каждую пробу разбавляют водой до 5 мл. Отобранные пробы нагревают до 80—90°С и к каждой добавляют 5 мл насыщенного раствора щавелевой кислоты. Осадок выдерживают в равновесии с раствором 2—3 часа и фильтруют через пористый фильтр № 4, промывают 2 раза водой, спиртом и диэтиловым эфиром (по 2—3 мл). Осадок высушивают до постоянной массы при 45—50°С. Весовая форма Y2(С2О4)з · 9Н2О. Коэффициент пересчета на металл 0,295.

3. Приготовление раствора носителя стронция.

12,1 г Sr(NO3)2 растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Раствор отфильтровывают, отбирают три пробы по 1 мл и разбавляют каждую до 5 мл водой. Пробы нагревают до 80— 90°С и прибавляют при перемешивании 2 мл насыщенного раствора карбоната аммония. Осадок выдерживают 1 ч и отфильтровывают через пористый фильтр №4. Промывают по два раза водой, спиртом и диэтиловым эфиром (2—3 мл), высушивают до постоянной массы при 110— 120°С. Весовая форма БгСОзКоэффициент пересчета на металл 0,594.

4. Ход анализа.

Перед проведением анализа осадок носителей смывают с фильтров минимальным количеством 6М НС1 и собирают в отдельном стаканчике (т.е. по 50 мг стронция и иттрия в пересчете

на металл).

1.К навеске озоленного растительного сырья добавляют раствор, содержащий носители. Нагревают на песчаной бане и постепенно добавляют смесь концентрированных соляной и азотной кислот в объемном соотношении 3:1 ("царская водка") до растворения основной массы озоленного сырья (приблизительно 200 мл).

2.Осадок декантируют и промывают "царской водкой". Промывной раствор добавляют к фильтрату. Осадок промывают водой и высушивают в сушильном шкафу при 80—90°С, охлаждают и проводят регистрацию активности осадка на бета-спектрометре (как правило активность подобных осадков находится на уровне фона).

3.Фильтрат осторожно нейтрализуют 20% раствором NaOH при постоянном перемешивании до рН 3—4, используя универсальную индикаторную бумагу. Затем к раствору приливают при перемешивании 25% раствор NH4OH до рН 8 и 5 мл насыщенного раствора щавелевой кислоты.

4.Выпавший осадок выдерживают 30 мин в равновесии с раствором и отфильтровывают на бунзеновской воронке размером чуть меньше размера счетной кюветы на двойном фильтре

ссиней полосой.

5.Осадок промывают 2—3 водой по 3—5 мл, этанолом и подсушивают, промывкой диэтиловым эфиром.

6.Фильтр с осадком осторожно снимают с воронки и помещают в счетную кювету.

7.Сушат при 40—45°С и измеряют активность образца на бета-спектрометре без учета удельной активности калия.

Вопросы к занятию:

1.Принцип радиохимического анализа..

2.Методика радиохимического анализа цезия и стронция.

Занятие16.Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов животноводства при радиационных поражениях – 2 часа.

Цель занятия: изучить методику ветеринарно-санитарной экспертизы продуктов животноводства при радиационных поражениях животных.

При отправке на мясокомбинат скота из районов с радиоактивным загрязнением на обороте ветеринарного свидетельства следует указать приблизительную дозу облучения, полученную животными.

При приёмке скота следует провести контроль поверхностного загрязнения егоβ-радио- нуклидами, при их наличии – дезактивацию и повторную радиометрию. После этого необходимо измерить мощность дозы γ-излучения в следующих точках: холка, ягодичная область, бедро, левая голодная ямка и щитовидная железа для выявления внутреннего загрязнения органов и тканей. Сначала проводится выборочная проверка (30 % поголовья), но при обнаружении животных с повышенным содержанием радионуклидов в организме переходят к поголовному контролю. Этих животных следует выдержать на «чистых» кормах для выведения радионуклидов из организма. Прочих животных сортируют. По результатам сортировки:

-по животным, больным заразными и незаразными болезнями без признаков радиационных поражений, решение принимается согласно соответствующим нормативным документам;

-животных с клиническими признаками лучевой болезни, лучевых ожогов и с дозой облучения свыше 6 Зв убивают на мясо в первую очередь;

-животных с дозой облучения от 4 до 6 Зв, но без клинических признаков лучевых поражений убивают во вторую очередь;

-всех остальных животных убивают в последнюю очередь.

Убой скота с лучевыми поражениями и радиоактивным загрязнением. Этих животных следует убивать на санитарной бойне, специально развёрнутом убойном пункте или же в общем цехе, но после «чистых» животных. Съём шкуры и нутровку производят на животных, подвешенных в вертикальном положении за задние ноги. На пищевод и прямую кишку накладывают

лигатуры, весь желудочно-кишечный тракт вынимают целиком. Внутренние органы при повышенном содержании в них радионуклидов вывозят на захоронение, как радиоактивные отходы. Шкуру консервируют мокросолёным способом. После работы производят дезактивацию помещений, оборудования и персонала с последующим радиометрическим контролем.

При внешнем облучении животных проводят послеубойный осмотр туши. При обнаружении патологоанатомических признаков лучевой болезни пробы тканей следует направить на бактериологическое исследование. Мясо, попавшее под нейтронное или γ-облучение, следует выдержать в морозильной камере в течение не менее чем 5 дней для исчезновения наведённой радиоактивности.

При внутреннем облученииубивать животных следует не ранее, чем через 7 – 10 дней после окончания поступления радионуклидов в их организм. Проводят послеубойный осмотр, как указано выше, а также радиометрию туши и органов. Радиометрию предпочтительно проводить переносным спектрометром «Сигнал-М» в исполнении «Таможенник» или ДРГБ-01. Он показывает содержание цезия в мясе. При его отсутствии проводят γ-радиометрию и по её данным все туши подразделяются на группы с таким расчётом, чтобы в каждой группе мощность дозы различалась не более, чем в два раза. От каждой группы отбирается средняя проба мяса и направляется в лабораторию на спектрометрию. При повышенном содержании в тушах радионуклидов лимфоузлы и щитовидная железа конфискуются.

Санитарная оценка мяса. Без ограничений мясо выпускается, если нет патологических изменений.радиоактивность не повышена. Допускаются внешние загрязнения кожи радионуклидами. Если содержание радионуклидов в мясе повышено не более чем в 10 раз против предельно допустимого уровня, мясо направляется на промышленную переработку, а субпродукты – на техническую утилизацию.Если содержание радионуклидов в мясе повышено более чем в 10 раз против предельно допустимого уровня, мясо направляется на техническую утилизацию, а субпродукты – на захоронение. Приобнаружении в мясе кокков, кишечной палочки.протея или возбудителей паратифа оно направляется на промышленную переработку.

Молоко от животных с лучевой болезнью в скрытый период выпускается без ограничений. В первый месяц при появлении симптомов лёгкой и средней степени болезни молоко следует использовать после 30-минутного кипячения. При внутреннем радиоактивном заражении животных молоко следует направлять: на промышленную переработку. Если обнаружится бактериальная обсеменённость молока, то его надлежит использовать согласно соответствующим инструкциям.

Способы обезвреживания продуктов с повышенным содержанием радионуклидов. Для мяса: обвалка; проварка в течение 3 часов в кусках массой не более 800 г и толщиной не более 8 см; переработка на варёную колбасу с проваркой батонов в кипятке; при этом допускается также разбавление «чистым» мясом с тем, чтобы окончательное содержание радионуклидов в продуктах не превышало предельно допустимого уровня. Для молока: переработка на топлёное масло; менее желательно – на творог кислотным способом или очистка с применением ионообменных смол.

Вопросы к занятию:

1.Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса при лучевых поражениях.

2.Ветеринарно-санитарная экспертиза молока от животных с лучевыми поражениями.

3.Способы обезвреживания продуктов с повышенным содержанием радионуклидов.

Занятие17.Радиоиммунный анализ гормонов в плазме крови животных – 2 часа.

Цель занятия: изучить принцип радиоиммунного анализа на примере определения инсулина в плазме крови.

Инсулин - полипептидный гормон с молекулярной массой около 6000, который образуется в β-клетках островков Лангерганса поджелудочной железы из своего предшественника - проинсулина. Молекула гормона состоит из двух цепей: короткая цепь А содержит 21 остаток аминокислот, а более длинная цепь В - 30 остатков. Сравнительный анализ гормонов, полу-

ченных от животных разных видов и человека, показал незначительные отличия в аминокислотной последовательности этих молекул в 8...10-й позиции цепи А и 30-м положении цепи В. Несмотря на это активность инсулина из поджелудочных желез разных животных приблизительно одинаковая. Предполагают также, что для связывания инсулина клеточными рецепторами специфическое значение имеют аминокислоты в 24...29-м положении цепи В, которые одинаковы у всех млекопитающих животных, в частности у крупного рогатого скота и человека. Это позволяет использовать тест-наборы, предназначенные для определения уровня инсулина у человека, для исследования его у животных.

Из поджелудочной железы инсулин поступает в кровь непрерывно, период его полураспада в периферической крови составляет 8...10 мин. В плазме часть инсулина связывается с белком (связанный инсулин), а часть (свободный инсулин) быстро переходит в ткани - скелетные мышцы, печень, почки, где реализуется действие и происходит инактивация гормона вследствие расщепления его молекул протеолитическими ферментами. Часть инсулина выводится из организма с мочой.

Основная функция инсулина в организме - регуляция уровня глюкозы в крови. Инсулин стимулирует переход глюкозы из крови в ткани. В свою очередь, секреция инсулина по принципу отрицательной обратной связи регулируется уровнем глюкозы в циркулирующей крови: глюкоза вызывает быстрое, в течение 3...5 мин, высвобождение инсулина из панкреатических β-клеток. Кроме того, инсулин влияет на транспорт ионов калия и аминокислот через мембраны, а также воздействует через белковый и жировой обмены на общий метаболизм.

Принцип определения инсулина радиоиммунологическим методом общий. Поскольку из всех форм инсулина только свободный инсулин хорошо реагирует с антителами, полученными к кристаллическому гормону, при помощи наборов определяют концентрацию свободного (иммунореактивного) инсулина в сыворотке крови животных. Отечественные наборы «Рио-инс-ПГ-1251», предназначенные для анализа гормона в сыворотке крови человека, вполне применимы для определения инсулина у животных, так как антисыворотка, используемая в этих наборах, имеет 100%-ную перекрестную реакцию с инсулином свиньи и крупного рогатого скота. Набор рассчитан на проведение 100 определений (44 пробы неизвестного образца и 6 проб для построения калибровочной кривой), выполняемых в дубликатах.

Материалы и оборудование: полуавтоматические пипетки на 100 и 800 мкл со сменными наконечниками, стеклянные пипетки на 1 и 10 мл, аппарат для встряхивания пробирок, холодильник низкотемпературный, центрифуга рефрижераторная, гамма-счетчик, дистиллированная вода, резиновые перчатки, тест-набор «Рио-инс-ПГ-1251».

Всостав набора входят: 1251-инсулин активностью 30...74 кБк в лиофилизированной форме, 6 калибровочных проб, содержащих 0, 10, 25, 50, 100 и 200 мкед/мл инсулина, буферный раствор с рН 7,4 12 мл, антисыворотка к инсулину, полученная иммунизацией морских свинок, раствор полиэтиленгликоля.

Приготовление реагентов: все реагенты при приготовлении необходимо перемешивать, избегая потерь на крышках флаконов и пенообразования.

Во флакон с 1251-инсулином приливают 11 мл дистиллированной воды.

Каждую калибровочную пробу растворяют в 0,5 мл дистиллированной воды, оставляют флаконы на 10 мин при комнатной температуре для растворения таблетки, аккуратно перемешивают.

Во флакон с препаратом антисыворотки приливают 11 мл дистиллированной воды. Буферный раствор и раствор полиэтиленгликоля поставляют готовыми для анализа. Выполнение работы. Сыворотку крови (плазму) хранят до анализа при температуре - 20

ºС. Не рекомендуется исследовать гемолизированную сыворотку. Для последующего автоматического расчета концентрации гормона ставят пробы на неспецифическое связывание (Н)и общую активность (Т).

Впробирки Тдобавляют микропипеткой 0,3 мл буфера, в пробирки Н- 0,2, а в остальные - по 0,1 мл в дубликатах.

Во все пробирки вносят по 0,1 мл меченого реагента.

Добавляют по 0,1 мл стандартов (от меньшей концентрации к большей) или исследуемой сыворотки.

Во всё пробирки (кроме Т и Н)приливают по 0,1 мл антисыворотки.

Содержимое всех пробирок тщательно перемешивают на шейкере и инкубируют в течение 3 ч (возможно 18 ч) при 2...8 ºС. При повторных анализах рекомендуется выдерживать одно и то же время инкубации для лучшей сравнимости результатов.

После инкубации в каждую пробирку (кроме 7) добавляют по 0,8 мл (800 мкл) раствора полиэтиленгликоля для разделения свободной и связанной фракций лиганда. Содержимое пробирок интенсивно перемешивают на смесителе в течение 5...8 мин для получения равномерной суспензии белков.

Все пробирки (кроме 7) одновременно центрифугируют 20 мин при 1500...2000 g и 2...8 ºС. После центрифугирования из всех пробирок сливают надосадочный раствор. Для удаления остатков жидкости их оставляют перевернутыми на фильтровальной бумаге в вытяжном шкафу на 10... 15 мин. Затем все пробирки с осадками и пробирки Т помещают на гамма-счет-

чик и измеряют скорость счета в каждой из них за 1 мин.

При использовании счетчиков фирмы ЛКБ концентрация гормона рассчитывается автоматически. Для перевода объемно-весовой концентрации инсулина в молярную рекомендуется пользоваться следующим соотношением: 1 мкед инсулина = 37,3 пг; 1 пг/мл • 0,172 = 1 пмоль/л инсулина.

Коэффициент вариации при проведении анализа одним набором в одно и то же время не превышает 10 %. Чувствительность определения 2...3 мкед/мл. Процент открытия инсулина, добавленного в образцы сыворотки крови, составляет 90...110.

Вопросы к занятию:

1.Принцип радиоиммунного анализа.

2.Методика радииммунного анализа гормонов.

Литература Основная:

1.Лысенко, Н. П. Радиобиология [Текст] / Н. П. Лысенко, В. В. Пак, Л. В. Рогожина, З. Г. Кусурова. – М., С.-Пб., Краснодар: Лань, 2012. – 570 с.

2.Лысенко, Н. П. Радиобиология [Электронный ресурс] / Н. П. Лысенко, В. В. Пак, Л. В. Рогожина, З. Г. Кусурова. – М., С.-Пб., Краснодар: Лань, 2012. – 570 с. – ЭБС «Лань». – Ре-

жим доступа: http://e.lanbook.com.

Дополнительная:

1. Лысенко, Н. П. Практикум по радиобиологии [Текст] / Н. П. Лысенко, В. В. Пак, Л. В. Рогожина, З. Г. Кусурова, С. В. Тимофеев. – М., С.-Пб., Краснодар: Лань, 2007. – 400 с.

Информационные ресурсы:

1. Издательство «Лань» - режим доступа: http://e.lanbook.ru

2. Электронная библиотека РГАТУ - режим доступа: http://bibl.rgatu.ru/web

Оборудование