Занятие 22 Тема: «Возбудители дифтерии, коклюша и паракоклюша»

1. Возбудитель дифтерии: название по-латыни, морфология (форма, размеры, расположение, внутриклеточные включения). На каких средах растёт палочка дифтерии?

Классификация. Возбудит дифтерии относится к отделу Firmicutes, семейству Corynebacteriaceae, роду Corynebacterium, виду C. diphtheriae. Название микроба происходит от греч. coryne - булава, bacteria - палочка, diphtheria - пленка.

Морфология. С. diphtheriae (палочка Клебса-Лёффлера) - прямые или слегка изогнутые неподвижные грам+ палочки. Спор и капсул не образуют. Палочки утолщены на концах и напоминают булаву. В мазках бактерии располагаются под углом друг к другу, в виде “растопыренных пальцев”, “иероглифов”, “паркета”, латинских букв V, Y, L и др. На поверхности бактерий имеются фимбрии, облегчающие адгезию к эпителию слизистой оболочки.

Культуральные свойства. Дифтерийная палочка явл аэробом или факультативным анаэробом, температурный оптимум для роста 35-37°С, оптимальная рН 7,6-7,8. Лучше растет на средах, содержащих кровь или сыворотку крови животных, хорошо растет на средах с теллуритом калия. В бульоне наблюдается равномерное помутнение или нежная пленка.

Элективные среды для выращивания C. diphtheriae: -свернутая кровяная сыворотка (среда Ру);

-сыворотка с добавлением сахарного бульона (среда Ру-Лёффлера);

-кровяной агар (КА);

-кровяной теллуритовый агар (среда Клауберга II);

-хинозольная среда Бучина;

-цистин-теллурит-сывороточная среда Тинсдаля-Садыковой.

2. Возбуд дифт: токсинообразование. Методы выявл токсигенности. Что происходит с токсином под действием формалина и тепла?

Токсинообразование. Corynebacterium diphtheriae продуцирует мощный экзотоксин — основной фактор патогенности. Нетоксигенные штаммы дифтерии не вызывают развитие заболевания.

Основные фракции дифтерийного токсина 4 фракции: 1Гистотоксин 2 «Истинный токсин»

3 Гиалуронидаза 4 Гемолизин

Антиген св-ва. О-антигены – термостабил полисахаридные, распол в глубине клет стенки. К-антигены – поверхностные, термолабильные, серовароспецифические. С помощью сывороток к К-антигену С.diph. разделяют на серовары.

Факторы патогенности. Экзотоксин, нарушающий синтез белка и поражающий в связи с этим кл миокарда, надпочечников, почек, нерв ганглиев. Ферменты агрессии — гиалуронидазу, нейраминидазу. К факторам патогенности относится также микрокапсула.

Методы выявления токсигенности Для обнаружения токсигенности дифтерийных бактерий можно испол след способы: 1. Биологические пробы на животных. Внутрикожное заражение морских свинок фильтратом бульонной культуры дифтерийных бактерий вызывает у них некроз в месте введения.

2. Заражение куриных эмбрионов. Дифтерийный токсин вызывает их гибель.

3. Заражение культур клеток. Дифтерийный токсин вызывает отчетливый цитопатический эффект.

4. Метод твердофазного иммуноферментного анализа с использованием меченных пероксидазой антитоксинов.

5. Использование ДНК-зонда для непосредственного обнаружения Юх-оперона в хромосоме дифтерийных бактерий.

6. Обнаружение гена токсигенности (tox) методом ПЦР – наиб быстрый и надежный метод лаб диагн, однако он не дает информацию о способности микроорганизма к экспрессии дифтерийного токсина.

Однако наиб простым и распростр способом опред токсигенности дифтерийных бактерий явл серологический – метод преципитации в геле. Суть: Полоску стерильной фильтровальной бумаги размером 1,5 х 8 см смачивают антитоксической противодифтерийной сывороткой, содержащей 500 АЕ в 1 мл, и наносят на поверхность пит. среды в чашке Петри. Чашку подсушивают в термостате 15—20 мин.

Испытуемые культуры засевают бляшками по обе стороны от бумажки. На 1 чашку засевают несколько штаммов, 1 из кот, заведомо токсигенный, служит контролем. Чашки с посевами инкубируют при 37 °С, результаты учитывают через 24—48 ч. Вследствие встречной диффузии в геле антитоксина и токсина в месте их взаимодействия образуется четкая линия преципитации, кот сливается с линией преципитации контрольного токсигенного штамма. Полоски неспецифической преципитации (они образуются, если в сыворотке кроме антитоксина присутст в небольшом кол-ве др антимикробные антитела) появл поздно, выражены слабо и никогда не сливаются с полоской преципитации контрольного штамма.

Район Рамон установил, что при воздействии формалина и тепла на дифтерийный токсин образуется обезвреженное соед, обладающее антигенными и иммуногенными св-вами. Изучая р-цию флоккуляции дифтерийного токсина с антитоксином, он применял формалин как антисептик для сохр токсина. Добавл формалина к токсину не препятствовало появл феномена флоккуляции, даже если этот токсин подвергался действию умеренного тепла в термостате. Не влияя на способность токсина флоккулировать, формалин резко снижал его токсические св-ва, как и ряд др хим и физ св-в. Р-ция флоккуляции токсинов с антитоксинами сыграла большую роль в разработке метода приготовления анатоксинов.