Puv_mikra_bilety

Билет 8

1. Метод Грама — метод окраски микроорганизмов для исследования, позволяющий дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки. 

Метод окраски по Граму в модификации Синева

1)На фиксированный мазок наносят 2-3 капли воды и кладут полоску фильтровальной бумаги, пропитанную генцианвиолетом. Окрашивают 1-2 минуты.

2) Бумажку снимают, сливают краску и, не промывая водой, наливают на препарат р-р Люголя на 1 минуту.

3) Раствор Люголя сливают и наливают на препарат спирт с йодом на 30 секунд. Затем промывают водой.

4) После окрашивают мазок водным фуксином в течение минуты.

5) Промывают водой, высушивают препарат фильтровальной бумагой, микроскопируют.

2. Среда Эндо — дифференциально-диагностическая пит среда, испол для выделения и дифференциации микроорганизмов кишечной группы. 

Состав мясопептонный агар, лактоза, фуксин, сульфат натрия. Среда имеет розовый оттенок.

Характ микроорг, выросших на среде Эндо. Выросшие колонии не бесцветны и имеют металлический блеск, это говорит о том, что микроорганизмы ферментатируют лактозу.

Билет 4

1. По отношению к окраске по Граму микроорг делятся на грам+ и грам-. Грам+ микроорг окрашиваются в фиолетовый цвет, а грам- – в красный цвет. Разная окраска зависит от разного строения клет стенки микроорг. При окраске по Граму в кл на ур клет оболочки образуется комплекс генциановый фиолетовый + йод. Он нерастворим в воде и слаборастворим в спирте. При обработке этанолом он проходит через клет оболочку грам- микроорг и вымывается – кл становятся бесцветными. При докрашивании фуксином они приобретают красный цвет. Клет оболочка грам+ микроорг не пропускает этот комплекс из-за большого содержания в ней полисахаридов и они сохраняют сине-фиолетовый цвет.

2. Для уст эпидемиологич цепочки выделенную культуру фаготипируют. Фаготипирование может подтвердить идентичность стафилококков, выделенных от разных больных и из объектов внешней среде.

Для фаготипирования испол стандартный набор из 23 бактериофагов, разделённых на 4 гр. В чашку Петри наливают 20 мл 1,5% МПА, дают ему застыть и подсушивают в термостате в течение 30-40 мин. На поверхность агара наносят 1 мл 4-6-час культуры выделенного стафилококка, распр по поверхности всей чашки, избыток жидкости отсасывают или дают ей испариться в термостате в открытой чашке. Предварительно дно чашки делят на секторы или квадраты. Число квадратов или секторов должно соответствовать кол-ву испол фагов. Затем на каждый квадрат или сектор наносят 1 фаг. Чашки ставят в термостат при т 37° С. Результаты опред через 6-7 ч. Если чашки оставляют при комнат т, то учет фаголизиса производят через 18-24 ч. Отмечают квадраты(секторы), где произошел лизис стафилококков.

Билет № 1

1. Методика постановки реакции нейтрализации в цветной пробе.

Постановка. В пробирки вносят по 0.25 мл рабочего разведения вируса и соответствующего разведения сыворотки. Смесь выдерживают при комнат т 30-60 мин., добавляют в пробирки по 0.25 мл клет суспензии, закрывают пробирки пробками. Термостат 6-8 дней при 37 гр. Учет рН 7.4 и выше- репродукция вируса, 7.2 ниже- вирус нейтрализуется антителами.

В результате жизнедеят кл в пит среде накапливаются кислые продукты и pH среды смещается в кислую сторону . В результате цвет входящего в состав среды индикатора становится желтым. При заражении культуры кл цитопатогенными вирусами метаболизм кл подавляется, рН среды и ее цвет не изменяются, она остается красной.

2. Алгоритм определения чувствительности бак к а/б методом стандартных дисков.

Приготовленную взвесь микроорг засевают на поверхность спец среды (АГВ или агар Мюллера-Хинтона) в чашки Петри. Затем стерильным пинцетом на засеянную поверхность помещают на равном друг от друга расстоянии, от центра и краев чашки Петри стандартные бумажные диски, пропитанные р-ром различных а/б. Засеянные чашки инкубируют в термостате при т оптимальной для роста данных бак. Если бак чувствительны к а/б, то вокруг диска образуется зона задержки роста. Диаметр этой зоны соответствует степени чувствительности бак к а/б. Окончательный результат оценивается по спец таблицам, в кот указаны диаметры зон задержки роста стандартных культур, чувствительных, устойчивых и умеренно устойчивых.