Всё к 4 итогам стоматологического факультета / 1 итог / 1 итог / Tema_01_Metody_i_tekhnika_Protoplazma_Mezhkletochnoe_veschestvo

ТЕМА 1.

МЕТОДЫ И ТЕХНИКА ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ. ПРОТОПЛАЗМА. МЕЖКЛЕТОЧНОЕ ВЕЩЕСТВО

ЗНАЧЕНИЕ ТЕМЫ

В качестве введения в практическую часть курса главное значение первого занятия видится в первом знакомстве с внутренним миром человеческого организма. Главными и постоянными объектами изучения для студентов в курсе гистологии с цитологией и эмбриологией являются гистологические элементы на светооптическом и ультрамикроскопическом уровнях пространственной организации.

Современные потребности клиники требуют не только реального представления о тонком строении тела, но и умения манипулировать тканевыми и клеточными элементами при осуществлении диагностических и лечебных мероприятий.

ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ

1. Познакомиться с основами приготовления гистологического препарата

2. Идентифицировать основные структурные элементы ткани тела человека

3.С помощью светооптических и электронномикроскопических микрофотографий изучить характерные особенности строения и функционирования живых и неживых гистологических структур.

4.Овладеть набором необходимых терминов и соответствующих им понятий, относящихся к теме.

ОСНОВЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА

Гистологический препарат должен быть тонким (толщина для светового микроскопирования от 5 до 50 мкм) и оптически дифференцирован. Исследования гистологического материала, прежде всего, разделяются на два вида: прижизненное исследование (живого материала); исследование фиксированного (мертвого) материала. Обычно на лабораторных занятиях используются фиксированные препараты, способные долго храниться. Процесс приготовления такого препарата включает ряд принципиальных этапов.

1.Взятие материала производится в кратчайшие сроки после смерти или прижизненно (биопсия). Иссечение ткани производится с минимальной травматизацией, чтобы не произошли прижизненные структурные изменения. Берутся кусочки органов объемом не более 1 см3.

2.Фиксация материала проводится с целью предотвращения процессов самораспада ткани, так называемого аутолиза. В качестве

фиксаторов используют 10-20% формалин, спирт, но чаще - смеси различных фиксирующих веществ.

3.Уплотнение материала производится для обеспечения возможности приготовления тонких срезов. Уплотнение достигается путём пропитывания кусочка различными полимерами или путем замораживания.

4.Приготовление тонких срезов с помощью прибора микротома.

5.Окраска срезов используется для оптической дифференцировки препарата и основана на различных тинкториальных свойствах структурных элементов, составляющих препарат. Тинкториальные свойства – способность к восприятию определенных красителей.

6.Заключение препарата в консервирующую герметичную среду, обеспечивающую его сохранность.

Среди гистологических красителей на основании особенностей диссоциации выделяют кислые красители (эозин, пикриновая кислота, кислый фуксин и др.) и основные красители (гематоксилин, аэур, метиловый зеленый и др.). Структуры, имеющие сродство к кислым красителям, называют ацидофильными или оксифильными.

Термин ацидофилия происходит от латинского аcidum – кислота и греческого philia – любовь, сродство. Термин оксифилия происходит от греческих oxys – кислота и philia – любовь. Структуры, имеющие сродство

косновным красителям, называют базофильными. Термин базофилия происходит от латинского basis – основание и греческого philia – любовь, сродство.

Различают также специальные красители, свойства которых основаны не на кислотных свойствах красящих растворов, а на способности красителей к избирательному выявлению определённых структур или веществ (азотнокислое серебро, осмиевая кислота, судан, орсеин и др.).

Наиболее распространенный в мировой практике способ окраски гистопрепаратов гематоксилин-эозином основан на окрашивании среза двумя данными красителями. При этом гематоксилин окрашивает клеточные ядра в синий или фиолетовый цвет, так как ядра, благодаря высокой концентрации нуклеиновых кислот, имеют сродство к основным красителям. Клеточные ядра - базофильные структуры. Эозин, как кислый краситель, часто окрашивает цитоплазму клеток и межклеточное вещество в розовый цвет, когда в них преобладают основные компоненты. В таких случаях цитоплазма и межклеточное вещество называются ацидофильными или оксифильными.

Любые нарушения правил гистологического препарирования могут вызвать появление артефактов – случайных структур, возникающие во время обработки материала и не свойственные изучаемому объекту.

ПРАВИЛА ВЫПОЛНЕНИЯ ТИПОВОГО ПРАКТИЧЕСКОГО ЗАНЯТИЯ ПО ГИСТОЛОГИИ

На занятия студенты используют специальный альбом и наборы цветных карандашей. Принципиально использование именно карандашей, а не фломастеров, чтобы иметь возможность рисовать разную интенсивность окраски. Так же для фиксации изучаемых препаратов возможно использовать компьютеры.

Практическое занятие по гистологии предполагает изучение микрофотографий препаратов с помощью программы QuPath.

Изучение гистопрепаратов сопровождается адекватными по цвету и форме зарисовками с обозначением характерных структур соответствующими терминами. Рекомендуется дополнять обозначения к рисунку словесными «портретами», произвольными замечаниями и схемами для облегчения восприятия и восстановления в памяти при повторении (вербальная идентификация).

Выполнение практического занятия оформляется студентами в персональных альбомах в виде протокола с указанием даты и темы занятия. Указывается номер, название, окраска гистопрепаратов.

На лицевой стороне альбома указываются: а) фамилия, имя, отчество студента; б) группа, курс и факультет.

Изучение каждого гистологического препарата предполагает использование учебно-методической инструкции.

В план лабораторного занятия включается изучение электронограмм, сопровождающих демонстрацию характерных признаков, изучаемых объектов на ультрамикроскопическом уровне. Названия электронограмм, обозначения характерных структур, а также пояснения к ним заносятся в протокол.

Результатом практического занятия и основанием для аттестации студента служит умение узнавать и называть характерные структуры гистологического препарата и электронограмм, а также правильно оформленный протокол.

ОБЪЕКТЫ ИЗУЧЕНИЯ

1.Препарат 18. Мультиполярные нервные клетки (поперечный срез спинного мозга)

2.Препарат 31. Овоцит (в яичнике кошки)

3. Препарат 7. Симпласт (исчерченные мышечные волокна языка)

4. Препарат 8. Межклеточное вещество эластического хряща

(поперечный срез ушной раковины)

ИНСТРУКЦИИ К ИЗУЧЕНИЮ ГИСТОПРЕПАРАТОВ

Препарат 18. Мультиполярные нервные клетки

(поперечный срез спинного мозга) Окраска: импрегнация серебром

На препарате представлен поперечный срез спинного мозга. В зависимости от особенностей препарирования срез может иметь черносерую или желто-коричневую окраску.

В препарате на малом увеличении (Фото 1.1) видны отростчатые клетки (красный овал).

Фото 1.1. Поперечный срез спинного мозга (малое увеличение)

На большом увеличении (Фото 1.2) в одной из клеток срез прошел через бледно окрашенное ядро (1). Ядросодержащие части нейронов, так называемые тела, содержат развитую фибриллярную цитоплазму (2) и имеют разные размеры и формы. Отростки клеток (3) также варьируются по численности, длине и разветвленности. Цитолемма (4) у клеток визуально не различима.

Вместе с тем, такие клетки характеризуются звездчатой, многополюсной формой тела, и, потому, называются мультиполярными.

Фото 1.3. Овоцит в яичнике (большое увеличение)

На большом увеличении (Фото 1.4) найдите клетку, в которой хорошо видно крупное ядро (1) и светло-розовая цитоплазма (2). Оболочка клетки (3) не заметна.

2 2

1

3 1

3

Фото 1.4. Овоцит в яичнике (большое увеличение)

Обозначения:

1.Ядро

2.Цитоплазма

3.Цитолемма

Задание:

1)создать протокол занятия в альбоме;

2)с помощью фото 1.4 зарисовать и подписать основные части клетки в соответствии со списком обозначений.

Препарат 7. Симпласт (исчерченные мышечные волокна языка) Окраска: гематоксилин-эозин

При малом увеличении (Фото 1.5) видно, что основу среза составляют пучки мышечных волокон розового цвета, расположенные в разных направлениях.

На продольном срезе каждое волокно имеет вид длинной розовой ленты (желтые стрелки), образованной гигантской цитоплазмой (1).

Фото 1.5. Симпласт (исчерченные мышечные волокна языка) (малое увеличение)

При большом увеличении (Фото 1.6) видно, что по периферии мышечного волокна располагаются многочисленные овальные ядра (2) синего или фиолетового цвета. Цитолемма (3) на светооптическом уровне не выявляется.

Многоядерность и гигантская цитоплазма – отличительные признаки симпласта по сравнению с обычной клеткой.

2

Фото 1.6 Симпласт (исчерченные мышечные волокна языка) (большое увеличение)

Обозначения:

1.Цитоплазма (ацидофильная)

2.Ядра симпласта (базофильные)

3.Цитолемма

Задание:

1)создать протокол занятия в альбоме;

2)с помощью фото 1.6 зарисовать и подписать характерные структуры в соответствии со списком обозначений.

Препарат 8. Межклеточное вещество эластического хряща

(поперечный срез ушной раковины) Окраска: гематоксилин–орсеин

При малом увеличении (Фото 1.7) в центре препарата видна темная полоска эластического хряща (скобка). На срезе хряща видны неравномерно расположенные пузырьковидные клетки, разделенные межклеточным веществом.

Фото 1.7. Межклеточное вещество эластического хряща (поперечный срез ушной раковины) (малое увеличение)

При большом увеличении (Фото 1.8) видно, что хрящевые клетки (1) лежат одиночно или образуют плотные скопления разной численности. В светлых хрящевых клетках видны темные ядра.

Межклеточное вещество содержит сеть эластических волокон, образующих ветвящиеся пучки в разных направлениях (2.1). Между волокнами видно светлое бесструктурное основное (аморфное) вещество

(2.2).

1

2.1

2.2

Фото 1.8. Межклеточное вещество эластического хряща (поперечный срез ушной раковины) (большое увеличение)

Обозначения:

1.Клетки

2.Межклеточное вещество:

2.1.Эластические волокна

2.2.Основное вещество

Задание:

1)создать протокол занятия в альбоме;

2)с помощью фото 1.8 зарисовать и подписать характерные структуры в соответствии со списком обозначений.

ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ

1.Предмет и задачи курса гистологии с цитологией и эмбриологией. Значение для медицины.

2.Уровни системной организации организма человека. Клеточная теория.

3.Методы гистологического исследования. Гистологическое препарирование. Виды микроскопии. Трехмерное представление в плоскостном препарате.

4.Протоплазма. Клетка. Межклеточное вещество.

СПИСОК РЕКОМЕНДУЕМЫХ ИСТОЧНИКОВ ИНФОРМАЦИИ

1. Лекции кафедры «Гистологии с цитологией и эмбриологией» «ПИМУ»

ЛИТЕРАТУРА:

1.Афанасьев Ю.И., Гистология, эмбриология, цитология: учебник. М.:

ГЭОТАР-Медиа, 2016. – 800 c.: ил.

2.Гистология, эмбриология, цитология [Электронный ресурс]: учебник / Ю.И. Афанасьев, Н.А. Юрина, Е.Ф. Котовский и др.; под ред. Ю.И. Афанасьева, Н.А. Юриной. - 6-е изд. перераб. и доп. – М.: ГЭОТАР-

Медиа, 2016. - http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785970436639.html

3.Гистология, цитология и эмбриология. Атлас [Электронный ресурс]: учебное пособие / Быков В.Л., Юшканцева С.И. - М: ГЭОТАР-Медиа,

2015. - http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785970432013.html