всякое / BioFarmLekcii1

опытам, выполнявшимся некоторыми нацистскими врачами во время второй мировой войны. За ним последовала Хельсинкская декларация 1964 г., в дальнейшем (1975, 1983, 1989, 2000 гг.) дорабатывавшаяся. Эта декларация касалась любых биомедицинских исследований на людях.

Цель клинических исследований лекарственных средств – получение научными методами оценок и доказательств эффективности и безопасности лекарственных средств, данных об ожидаемых побочных эффектах от применения, взаимодействия с другими лекарственными средствами на людях.

Проведение фармакологических исследований нового лекарственного препарата на людях является обязательным, так как их положительные результаты являются основанием для регистрации препарата и его внедрения в медицинскую практику.

Большое значение для обеспечения качества вновь регистрируемых лекарственных средств имеет включение в федеральный закон «О лекарственных средствах», принятый Государственной Думой РФ 5 июня 1998 г., статьи, регламентирующей проведение клинических исследований и права пациентов, участвующих в клинических исследованиях (Приложение 1).

Решение о проведение клинических испытаний конкретного лекарственного средства принимается Федеральными органами власти. В России разрешение на проведение клинических исследований лекарственных препаратов выдает Фармакологический комитет МЗ СР РФ, на основании детальной экспертизы результатов разработки и доклинических исследований.

Обеспечение точности и достоверности получаемых результатов на этапе клинических исследований достигается соблюдением стандартов качественной клинической практики – Good Clinical Practice (GCP).

Правила качественных клинических испытаний (Good clinical practice) — это система требований по организации клинических испытаний, регламентирующая их планирование, проведение, завершение, проверку, а также анализ результатов, составление отчетов и ведение документации, обеспечивающая научную обоснованность исследований, этическую приемлемость и полную документированность клинических характеристик терапевтического, диагностического, профилактического продукта.

На данный момент в мировой практике существует несколько руководств по первому использованию новых препаратов на человеке, в том числе материалы Королевского колледжа врачей (Великобритания), Британской ассоциации фармацевтической промышленности (ABPI) и Международного совета научных медицинских организаций (неправительственная международная организация, созданная в 1948 г. под эгидой ВОЗ ЮНЕСКО для рассмотрения этических и социальных аспектов медицинских исследований).

Термин «GCP» («надлежащая клиническая практика») был впервые употреблен Администрацией по пищевым и лекарственным продуктам США (FDA) для описания методических указаний по клиническим испытаниям фармацевтических препаратов. Этим руководством были очерчены обязанности спонсоров исследования, клинических исследователей и тех, кто контролировал ход исследований. В них также были включены рекомендации относительно создания и функционирования этических комитетов, порядка получения согласия пациентов на участие в испытаниях и сбора данных о побочных действиях.

Страны Европейского экономического сообщества, Япония, скандинавские страны, Франция, Германия, Италия, Испания и Великобритания выпустили свои инструктивные материалы по клинической практике, которые, однако, не носят обязательного характера (исключение для Франции, США и Японии).

Эти инструкции используются в качестве исходных материалов для разработки национальных правил в странах, не имеющих таковых, а также для ориентации в проведении конкретных исследований. Правила адресованы прежде всего фармацевтической промышленности и всем, кто участвует в сборе клинических данных, предназначенных для включения в заявку на регистрацию нового препарата.

До недавнего времени в России действовал ОСТ 42-511-99 «Правила проведения качественных клинических испытаний в Российской Федерации», утвержденный 29.12.98 г., дата введения 01.01.99 г. В настоящее время «Правила клинической практики в Российской Федерации» утверждены приказом МЗ РФ № 266 от 19.06.2003 г. (Приложение 2).

Основным элементом GCP является обязательное документально оформленное добровольное согласие пациента или здорового лица на участие в эксперименте. При этом речь идет о согласии человека, детально проинформированного о возможном риске, — так называемом информированном согласии. Информированное

законодательством.

Организаторы и исследователи обязаны запрашивать мнение комитетов по этике по протоколам клинических исследований и сообщать им о побочных реакциях в ходе испытаний. Исследования не должны начинаться до получения заключений этических комитетов, принципы информированного согласия должны соблюдаться в каждом испытании и его участникам должны быть гарантированы компенсация и лечение в случае ущерба здоровью.

Определена также ответственность спонсоров и исследователей за обработку и хранение данных, обеспечение качества исследований, заботу о здоровье пациента и т. п.

GCP следует рассматривать как способ защиты людей, на которых испытываются препараты, поощрения рационального использования ресурсов организаторами и исследователями, получения объективных, надежных результатов в качестве основы фармакотерапии. GCP учитывает всемирно признанную Хельсинкскую декларацию о правах человека и определяет статус и обязанности врачей медицинского учреждения и фармацевтической

промышленности, обеспечивает права человека в отношении пациентов и здоровых лиц, участвующих в исследованиях.

Для обеспечения качества и стандартности исследований, позволяющих четко оценить тот или иной новый лекарственный препарат, необходимы:

детальная характеристика популяции пациентов или добровольцев, чтобы другие исследователи могли воспроизвести эксперимент, а клиницисты — обоснованно использовать его результаты;

использование адекватных групп, включающих достаточное количество испытуемых;

тщательно расписанный план назначения препарата с указанием дозы, количества приемов, времени и пути введения, причем эти указания должны быть сделаны как для исследуемой лекарственной формы, так и для стандартной;

использование при испытании двойного «слепого» метода, когда только руководитель эксперимента знает, какие из испытуемых получают исследуемый препарат, а какие — стандарт или плацебо;

систематический контроль за ведением документации.

Во всем мире ежегодно около 6 млн. человек участвуют в клинических испытаниях новых лекарственных препаратов.

Как правило, страны третьего мира признают результаты клинических испытаний, полученные в промышленно развитых странах. Некоторые государства, например Аргентина, Южная Корея, Россия, Филиппины и др., регистрируют препараты только при повторных клинических испытаниях на своей территории. Новые препараты обычно не испытываются в Восточной Европе и развивающихся странах из-за отсутствия качественного оборудования, невозможности обеспечения стандартных условий в клинике и нехватки высококвалифицированного персонала.

Требованиями GCP определены обязанности клинических экспериментаторов, спонсоров и тех, кто контролирует ход и результаты клинических исследований. В них также включены рекомендации относительно создания и функционирования этических комитетов, порядка получения согласия пациентов на участие в испытаниях и сбора данных о побочных действиях.

Соблюдение требований GСР значительно повышает качество клинических исследований, предотвращает искажение данных. Это, в свою очередь, оказывает положительное влияние на медицинскую тактику в целом и на использование лекарственных средств в частности.

Определение БД на людях является обязательным при разработке новых лекарственных препаратов, используется на конечных этапах исследований и, в случае получения достаточно хороших результатов, является основанием для регистрации препарата и его внедрения в медицинскую практику.

Определение БД на моделях – животных in vivo

Сравнительная сложность определения БД на людях и необходимость решения этических вопросов заставили обратиться к определению биодоступности на животных. Однако исследования in vivo имеют ценность лишь в том случае, если подтверждена корреляция результатов опытов с данными, полученными на людях. Исследования обычно проводят на крупных лабораторных животных – собаках, кроликах, лучший вариант – молодые поросята. В эксперименте также могут использоваться белые крысы. Животные должны быть одного пола, возраста, содержаться в одинаковых условиях при идентичном режиме питания. Крысы или белые мыши должны быть из одного помета, одной линии. В эксперименте использует две группы животных с целью введения стандартной и исследуемой лекарственных форм в количестве 20-30 особей, чтобы полученные результаты были достоверны. Препарат вводят в

соответствии со спецификой той или иной лекарственной формы из расчета определенного количества лекарственного вещества на 1 кг массы тела животного. Далее схема проведения эксперимента не отличается от определения БД на людях. В случае определения БД лекарственных форм местного действия животных на определенных стадиях эксперимента забивают и проводят послойное определение концентрации лекарственного вещества в коже и подкожной жировой клетчатке (мази, пластыри) или слизистой оболочке и подслизистых слоях (суппозитории местного действия).

Недостатками метода является необходимость подтверждения корреляционной связи с методами определения БД на людях, необходимость обеспечения надлежащих условии содержания животных в вивариях, длительность эксперимента и невозможность применения при контроле каждой серии выпуска лекарственных препаратов.

Правила GLР

Необходимость обеспечения стандартности исследований на животных повлекла за собой разработку методологии доклинических испытаний. Основной задачей является обеспечение объективности, достоверности и сопоставимости получаемых результатов доклинических исследований на животных.

Целью доклинических испытаний является получение научно обоснованных оценок и доказательств фармакотерапевтической эффективности и безопасности лекарственных средств, включая определение острой и хронической токсичности на животных.

Стандартность проведения исследований на животных на международном уровне регламентируется правилами надлежащей лабораторной практики – Good Laboratory Practice (GLP).

Правила GLP (Good Laboratory practice) — единая система обеспечения качества и стандартности научных исследований на этапе доклинического изучения новых лекарственных препаратов, включая изучение токсичности

химических соединений. Правила лабораторной практики распространяются на работу фармакологических, токсикологических и других лабораторий биологического профиля и охватывают всю систему доклинических испытаний.

Впервые правила GLP внедрены в 1979 г. в США, а в последующие годы во всех цивилизованных странах.

Это нашло отражение в принятии в 1981 г. организацией экономического сотрудничества и развития (ОЕСД) правил надлежащей лабораторной практики (GLP) в международном масштабе. Национальные требования GLP существуют в США, Франции, Швейцарии и ряде других стран.

Юридический статус требований GLP различен в США и странах Европейского сообщества. В США Администрация пищевых и лекарственных продуктов (FDA) отвечает непосредственно за проверку соблюдения правил GLP и оценку представленных результатов доклинических исследований. Во многих европейских странах проверка соблюдения правил осуществляется организациями, не отвечающими за разрешение препаратов к применению.

Впервые в России нормативный документ на отечественную систему GLP утвержден приказом Министра медицинской промышленности № 154 от 17.05.91 «Руководящий нормативный документ РД 64-126-91 «Правила доклинической оценки фармакологических средств», разработанные Всероссийским научным центром по безопасности БАВ (ВНЦ БАВ, Старая Купавна).

Внастоящее время «Правила лабораторной практики в Российской Федерации» утверждены приказом МЗ РФ

№267 от 19.06.2003 г., которые устанавливают требования к организации, планированию и проведению доклинических исследований лекарственных средств, оформлению результатов и контролю качества. Минздрав России организует и проводит государственный контроль доклинических исследований лекарственных средств во взаимодействии с ФГУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава России, Фармакологическим комитетом Минздрава России и иными подведомственными научно-исследовательскими организациями, институтами, лабораториями, входящими в систему государственного контроля качества, эффективности и безопасности лекарственных средств.

Правила GLP предъявляют определенные требования, прежде всего к подбору подопытных животных (полу, возрасту, массе), методике комплектования исследуемой и контрольной групп, а также условиям содержания животных, планировке помещений вивария и т. д. К исследованиям допускаются животные, которые по фармакокинетическим характеристикам организма близки к человеку. Доклинические исследования проводятся на здоровых животных.

Надлежащая организация доклинических лабораторных испытаний должна обеспечивать объективность и сопоставимость получаемых данных исследований в опытах in vivo.

Планирование и устройство вивария должно быть согласовано с органами СанЭпидНадзора (СЭН) и ветеринарно-санитарной службы по месту нахождения вивария. Структурными составляющими вивария являются: здание, оборудование, лабораторные животные, обслуживающий персонал.

Здание для вивария должно проектироваться как отдельно стоящее с прилегающей к нему территорией, огороженной забором. Возможно размещение вивария совместно с лабораторией, но в данном случае его следует полностью изолировать от других помещений и разместить на верхних этажах здания. Расстояние между виварием и другими зданиями должно быть не менее 50 метров. Набор площадей помещений определяется объемом и характером работ, а также количеством и видами животных.

Все помещения должны быть снабжены центральным отоплением и облицованы материалами с высокой износоустойчивостью, легко поддающимися мойке и дезинфекции (кафельная плитка, пластиковая краска), пригодными по нормам СЭН для жилых помещений, в том числе и потолки.

Освещение должно быть искусственным с использованием люминесцентных ламп для исключения весенне-летнего обострения поведенческих реакций с периодичностью светового и ночного режима 12/12 часов. Каждое помещение по содержанию животных оборудуется вентиляционной системой или системой кондиционирования, а также мойкой и канализацией.

Основной принцип работы в виварии: исключить занос патогенной микрофлоры в виварий и вынос таковой из вивария.

Помещения для экспериментальных животных должны обеспечивать изоляцию (карантин) поступающих животных, больных животных и животных, подозреваемых в носительстве инфекций; позволять раздельное содержание различных видов животных и животных одного вида, являющихся объектом исследования различных лекарственных средств.

Корма, оборудование и инвентарь для ухода за животными необходимо хранить в помещениях, изолированных от мест содержания животных.

Помещения для сотрудников оборудуются мебелью, пригодной для дезинфекции. Используются индивидуальные шкафы с разделением для истой и грязной одежды. Обязательно наличие душевых-санпропускников.

Оборудование: клетки, стеллажи, тележки, автоклав для стерилизации клеток и стеллажей, сухожаровой шкаф для стерилизации подстилки, овощемойки, овощерезки. Все оборудование должно выдерживать дезинфекцию или подвергаться стерилизации.

Животные приобретаются в питомниках (накладная и ветеринарное свидетельство форма № 1).

ВРоссии создан ряд виварных комплексов для проведения доклинических исследований в соответствии с требованиями GLP. Например, виварно-лабораторный комплекс ВНЦ БАВ (г. Старая Купавна), имеющий сертификат НИИ «Синтелабо» (Франция), питомник Института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова

РАН (ИБХ РАН), виварий ВИЛАР, лаборатория фармакологии АГМУ и т.д. Для примера приведем описание вивария ЗАО ФНПП «Ретиноиды».

Виварий ЗАО ФНПП «Ретиноиды», расположенный на базе Медицинского института Орловского государственного университета, создан для проведения доклинических испытаний вновь разрабатываемых лекарственных средств на грызунах (мыши, крысы, морские свинки), имеет общую площадь – 110 м2, оборудован всем необходимым для содержания животных и соответствует требованиям GLP. Виварий включает административные помещения (кабинет для работы научных сотрудников, бытовая комната, туалет, душевая кабина), зону приема животных (барьерный шлюз, карантин), инженерно-техническую зону (электрощит, регуляторы вентиляции, установка для очистки воды), служебную зону (помещения для хранения корма, подстилки; моечностерилизационный блок), комнаты для содержания животных, операционную комнату. Предусмотрено автоматическое регулирование работы системы освещения, т.е. точное и заданное фиксирование режима день/ночь, системы приточно-вытяжной вентиляции, кондиционирования и увлажнения воздуха. Каждая комната, предназначенная для содержания животных, снабжена бактерицидным ультрафиолетовым облучателемрециркулятором, обеспечивающим обеззараживание воздуха. Виварий оборудован пожарной сигнализацией и средствами пожаротушения. Эксперименты на животных проводятся под контролем ветеринарного врача и биоэтической группы.

ЗАО «Ретиноиды» имеет 16 – летний опыт работы в области разработки новых лекарственных препаратов. В хорошо оснащенных лабораториях отдела трудятся 2 профессора, 4 доктора наук, 6 кандидатов наук, 3 научных сотрудника, 8 химиков-аналитиков, 4 лаборанта, технический персонал. Сотрудники имеют международный сертификат по гарантии качества доклинических испытаний (GLP). Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития наше Предприятие включено в Перечень организаций и учреждений, осуществляющих доклинические исследования лекарственных средств.

Организация доклинических лабораторных испытаний должна обеспечивать объективность и сопоставимость получаемых данных исследований в опытах на людях.

ЛЕКЦИЯ «БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

МЕТОДАМИ IN VITRO»

Проводить систематический контроль биологической доступности каждой серии выпускаемых промышленностью готовых лекарственных средств в опытах in vivo не представляется возможным, поэтому в настоящее время широко развиваются специальные методы «in vitro» отражающие в определенной степени биодоступность лекарственных препаратов. Для этих методов характерна точность, воспроизводимость и экономия во времени.

В методах in vitro проводится оценка распадаемости лекарственной формы, а также растворения или высвобождения лекарственных веществ из лекарственной формы.

Под способностью к распаду таблеток, дражированных препаратов, желатиновых капсул понимается их свойство при соприкосновении с водой (или пищеварительными соками) пре вращаться в частицы лекарственных и вспомогательных веществ.

Под условным названием «растворение» (Dissolution) подразумевают скорость растворения и перехода и растворяющую среду фармакологически активных веществ из лекарственной формы.

Доступность, которая определяется в опытах in vitro и описывает кинетику растворения лекарственных веществ, называют фармацевтической.

Определение фармацевтической доступности является первым этапом определения биологической доступности препаратов, так как в настоящее время общепризнанно, что почти для всех групп лекарственных веществ скорость растворения (выхода, высвобождения) взаимосвязана с биологической доступностью, так как всасывание идет только в том случае, если на месте абсорбции присутствует раствор лекарственного вещества.

Без распада же многих лекарственных форм невозможен или замедлен процесс высвобождения лекарственных веществ.

Параметры фармацевтической доступности

Для контроля скорости и степени растворения (высвобождения) лекарственных веществ и корреляции с данными определения БД на живых объектах при определении фармацевтической доступности рассчитывает следующие параметры:

количество лекарственного вещества, растворившееся (высвободившееся) за определенное время или его концентрация в растворе на определенный момент времени от начала эксперимента;

время, необходимое для растворения определенного количества лекарственного вещества (25, 50, 76%). Чаще всего используется параметр – время полурастворения Т 1/2 – время, за которое высвобождается 50% лекарственного вещества, содержащегося в лекарственной форме:

количество суммарно высвободившегося лекарственного вещества в % от содержания его в лекарственной форме:

константа скорости растворения является идеальным параметром для описания процесса растворения

ирассчитывается с учетом законов растворения. Однако ее не во всех случаях можно точно определить, а также рассчитываемая по различным законам растворения, она имеет разные размерности, которые не всегда сопоставимы;

эффективность растворения, которая основывается на интегрировании площади под кривой растворения от её начала до момента времени, к которому в раствор перейдет 100 % лекарственного вещества. Этот показатель особенно хорошо подходит для сравнения лекарственных форм с различными характеристиками pacтворения лекарственных веществ;

среднее время растворения – это среднее арифметическое отдельных времен растворения лекарственных веществ в лекарственных формах. Оно оценивается площадью под кривой растворения, деленной на количество лекарственного вещества, содержащегося в лекарственной форме, и рассчитывается методом статистических моментов.

Во время растворения различают два процесса:

1. Высвобождение молекул из кристаллической решетки.

2.Диффузия высвобожденных молекул в растворитель вплоть до образования конечной концентрации в общем объеме растворителя.

Процесс растворения описывается уравнением:

dCdt Kv S C0 Ct n , г де

Кv – константа скорости растворения;

S – площадь поверхности растворяющегося вещества, м2;

С0 – концентрация препарата в насыщенном растворе (растворимость), кг/м3; Сt – концентрация препарата в растворителе в данный момент времени, кг/м3.

Уравнение растворения позволяет выводить и, тем самым, регулировать определенные параметры, от которых зависит скорость растворения, такие как:

1. Толщина диффузионного слоя (δ).

Константа скорости растворения К при постоянном объеме жидкой фазы определяется уравнением:

δ – коэффициент скорости межфазного переноса; D – коэффициент диффузии.

В большинстве случаев при растворении преобладает диффузионный тип, когда γ>> D/ δ и Kv D

С целью уменьшения толщины диффузионного слоя на поверхности лекарственной формы используют различные способы, обеспечивающие искусственную циркуляцию растворяющей среды.

2. вязкость диффузионного слоя.

D k 1 , где

k – коэффициент распределения;– вязкость диффузионого слоя.

Поскольку речь идет об обратно пропорциональной зависимости, то растворение будет тем быстрее, чем меньше вязкость диффузионного слоя.

После преобразований с введением указанных обозначений уравнение растворения приобретет вид:

Условия, необходимые для исследования кинетики растворения лекарственных веществ из лекарственных форм

Для оценки растворения необходима совокупность условий (прибор, состав и объем, температура среды растворения, режим перемешивания, время отбора проб, аналитический способ определения содержания вещества в растворяющей среде), позволяющих с достаточной точностью оценить кинетику перехода действующего вещества в раствор. Правильно разработанная методика должна обеспечивать воспроизводимость результатов или незначительную дисперсию результатов

отдельных определений. Наличие правильно подобранных методик чрезвычайно важно прежде всего для фармацевтической технологии, т.к. позволяет провести сравнительную оценку лекарственных форм, полученных по различным технологическим схемам и регламентам. Только в случае установления количественной корреляции между растворением in vitro и всасыванием in vivo на основе разработанной методики может быть сформулирован тест «Растворение».

Состав среды растворения должен быть подобран для каждого отдельного случая с учетом природы ЛВ, их минимальной ионизации в пищеварительном тракте, в котором должно проходить растворение.

В качестве среды растворения наиболее часто используются вода, водные растворы кислот или буферные растворы.

Желательно использование деаэрированной воды, так как растворенный воздух может ухудшать воспроизводимость результатов из-за сорбции его лекарственной формой, что в свою очередь ухудшает смачивание последней. Доказано, что присутствие ферментов практически не влияет на скорость растворения ЛВ и в то же время иногда затрудняет их количественную оценку. Исключение ферментов рекомендовано ВОЗ. Описаны рекомендации по добавлению в среду растворения небольших количеств поверхностно-активных веществ для увеличения скорости растворения целесообразность таких добавок в каждом случае должна быть установлена экспериментальным путем. Если ЛВ очень мало или практически не растворимо в воде (<0,2%), часть водного раствора может быть замещена неводным растворителем, смешивающимся с водой, например этанолом, метанолом или изопропанолом. Важным вопросом является правильный выбор объема среды растворения, который должен быть в 20 раз больше, чем таковой для получения насыщенного раствора вещества, содержащегося в готовой лекарственной форме. Для большинства случаев объем среды колеблется в пределах 500-1000 мл. В процессе растворения объем среды должен оставаться постоянным, по мере отбора проб он возмещается чистым растворителем. Определение растворения должно проводится при температуре тела человека, т.е. при 37 ± 1оС.

Условия перемешивания среды должны обеспечить в каждом месте равномерную концентрацию ЛВ и воспроизводимость результатов. Кроме того, перемешивание увеличивает диффузию, выравнивает температуру, может изменить не только скорость растворения, но и тип кинетики.

Условия перемешивания определяются конструктивными особенностями используемых приборов или приспособлений-мешалок. Интенсивность перемешивания подбирается таким образом, чтобы скорость растворения испытуемого ЛВ коррелировала с биодоступностью, определяемой в опытах in vivo.

Определение активного ингредиента в среде растворения, иногда в низких концентрациях, может вызвать известные трудности. В этом случае по рекомендациям ВОЗ необходимо использовать другой метод, отличающийся от того, который применялся для количественного определения активного вещества в препарате. Выбранный для этой цели метод не обязательно должен быть одинаков с методом количественного определения ЛВ в лекарственной форме. Чаще всего для этой цели применяется спектрофотометрический метод.

Для получения достоверных показателей необходимо сопоставлять данные, получаемые на разных типах приборах и разными методами.

ЛЕКЦИЯ «МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ ДОСТУПНОСТИ»

Для исследования распадаемости и растворения лекарственных веществ из лекарственных форм предложено большое количество методов и приборов. Их разнообразие обусловлено различием в кинетике растворения разных терапевтических групп лекарственных веществ. Если в начале 70-х годов общепризнанной являлась необходимость определения растворения лекарственных веществ мало растворимых или практически нерастворимых в воде, то в настоящее время доказана целесообразность этой оценки для готовых лекарственных средств, содержащих и легкорастворимые вещества.

В зависимости от влияния на определенные параметры растворения методы классифицируют:

1.Методы с естественной циркуляцией растворяющей среды.

2.Методы с искусственной циркуляцией растворяющей среды.

3.Методы определения при нулевой концентрации.

Методы с естественной конвекцией растворяющей среды (статические методы)

Лекарственные формы (таблетки или капсулы) помещают в относительно неподвижный растворитель, перемешивание в котором осуществляется благодаря разности плотностей раствора и чистого растворителя.

В настоящее время известен ряд для определения скорости растворения с естественной конвекцией среды (Рис.

4):

а) в методе сольвометрии лекарственную форму помещают в специальный приемник в форме лодочки, которая погружается в растворяющую среду «Лодочка» соединяется стрелкой со специальной калибровочной шкалой. Вместе с «лодочкой» до нижней позиции погружается и стрелка, которая поднимается вверх по мере растворения ингредиента и таблетки.

б) В случае метода подвешенной таблетки лекарственная форма крепится к алюминиевой полоске, соединенной с рычагом баланса и поддерживается так в течение всею процесса растворения. По силе, которая затрачивается на сохранение равновесия системы, делают вывод о распадаемости или скорости растворении таблетки.

Схема приборов для определения скорости растворениятс естественной конвекцией среды [А.И. Тенцова,

1974 г.]

в) При методе неподвижного диска лекарственную форму помещают в гнездо акрилового держателя, вводимого в сосуд объемом 25 мл. Сосуд наполняют 0,1 М раствором кислоты хлороводородной. Скорость растворения определяют в перевернутом сосуде при постоянной температуре (37 °С) путем забора пробы растворителя для анализа через установленные интервалы времени.

Методы с искусственной конвекцией растворяющей среды (динамические методы)

Методы с искусственной (принудительной) конвекцией растворяющей среды предусматривают постоянный контакт исследуемой лекарственной формы с новыми порциями растворителя.

Схема приборов для определения скорости растворения с искусственной конвекцией среды

[А.И. Тенцова, 1974 г.]

а) Метод Врубле. Твердую лекарственную форму помещают в неподвижные трубки, находящиеся в растворяющей среде. Трубки крепят к диску, вращающемуся со скоростью 6-12об/мин. В приборе поддерживается температура 37 °С.

б) Метод с пропеллерной мешалкой. Определение осущест-

вляется в приборе, который представляем собой сосуд емкостью 400 мл, содержащий 250 мл растворяющей среды. Исследуемую таблетку опускают на дно емкости. Перемешивание производят трехлопастной мешалкой, которая погружается на глубину 27 мм и вращается со скоростью 59 об/мин. Длина полиэтиленовых лопастей мешалки 5 см.

в) Метод качающейся корзинки. Определение скорости растворения твердых пероральных лекарственных форм в среде 0,1 М раствора кислоты хлороводородной параллельно с определением времени распадаемости.

г) Метод вращающегося диска предложен для плоских таблеток. Таблетку укрепляют в специальном держателе из акрилового пластика так, чтобы действию растворяющей среды подвергалась только одна плоскость. Скорость растворения определяют в 0,1 М растворе кислоты хлороводородной, 200 мл которой наливают в 500-миллилитровую круглодонную колбу. Таблетка с держателем погружается в растворяющую среду на глубину 25 см. Перемешивание жидкой среды обеспечивается мешалкой, вращающейся со скоростью до 400 об/мин. Объем проб 5-10 мл.

д) Метод встряхивания. Испытуемую твердую лекарственную форму помещают в колбу Эрленмейера объемом 150 мл, куда наливают 50 мл 0,61 н раствора кислоты хлороводородной при 37 ± I °С. Частота колебаний колбы 65 кол/мин.

В исследовательской практике наиболее часто используются различные варианты метода мензурки (цилиндра). В частности, для определения скорости растворения препаратов в виде таблеток или капсул в целях исключения возможного влияния гидродинамических факторов, связанных с различным местоположением исследуемой лекарственной формы в сосуде с растворяющей средой, рекомендован прибор с магнитной корзинкой – ячейкой (рис.6), который функционирует по

«методу мензурки».

Схема прибора с магнитной корзинкой ( 1– электроды, 2 – рН-метр; 3 – термостатированный сосуд с постоянной температурой, 4–

пропеллерная мешалка, вращающаяся с постоянной скоростью, 5 – магнитная мешалка)

[А.И. Тенцова, 1974 г.]

Прибор состоит из мензурки объемом 800 мл, корзинки с магнитом, обеспечивающим точное расположение лекарственной формы в сосуде, внешнего магнита, прикрепленного к нижней поверхности сосуда, и мешалки. Корзинка с

магнитом представляет собой проволочный каркас из нержавеющей стали длиной 50 мм, с внутренним диаметром 11 мм для капсул и 15 мм для таблеток. Диаметр отверстий в корзинке 8 мм. Скорость вращения трехлопастной мешалки 60 об/мин при диаметре перемешивания 51 мм и длине лопасти 18 мм. Лопасти закреплены на вертикальной оси диаметром 7 мм. угол наклона лопастей к оси равен 45° и по отношению друг к другу – 60°. При проведении исследования в сосуд наливает 600 мл растворяющей среды, термостатируют прибор при 37 ± 0,5 °С, вводят внутрь сосуда мешалку, погружая её на глубину 41 мм, и помещают в растворяющую среду магнитную корзинку с исследуемой лекарственной формой.

Во всех случаях при определении скорости растворения через определенные интервалы времени производят забор проб для анализа физико-химическими или химическими методами, а в сосуд добавляют равное пробе количество чистого растворителя.

Официнальные методы определения фармацевтической доступности

Тесты «Распадаемости» и «Растворения» в настоящее время включены в фармакопеи многих стран для массовой оценки качества каждой серии производства лекарственных препаратов.

Впервые тест «Растворение» введен в XVIII издание фармакопеи США (USP США) в 1970 г на 7 препаратов и в XIII Национальный формуляр (NF США) на 5 препаратов. С этого времени исследования по изучению скорости растворения интенсивно развивались и уже в фармакопеях США последующих лет число препаратов, подвергаемых испытанию по тесту «растворение», значительно возросло: в 1975 г их было 20, в 1980 г – 71, в 1983 г – 203. В фармакопеях США XXI издания (1985 г) и XXII издания (1989 г) число лекарственных препаратов, оцениваемых по этому тесту, составило более 600.

Тест «Растворение» введен в 1978 г в Европейскую фармакопею, в 1980 г – в Британскую фармакопею (ВР), в 1982 г – в Японскую.

В 1985 г в нашей стране утверждена ВФС «Растворение», которая включена в общую статью ГФ XI издания «Таблетки».

Схемы приборов для определения скорости растворения (а – вращающаяся корзинка, б – вращающаяся мешалка, в –вращающаяся колба) [А.И. Тенцова, 1974 г.]

Среди приборов и методов растворения официальными являются (Рис. 7):

• метод по Pernarowski и прибор «вращающаяся корзинка»

(Rotating Basket) – USP XXII, ВР – 1980, ГФ СССР XI издания;

•метод по Pool и прибор «вращающаяся мешалка» (Rotating paddle) – USP XXII, ВР 1980;

•метод H.P.Koch и прибор «вращающаяся колба» (Rotating flask).

Tecт «Растворение» является общепринятым для таких лекарственных форм, как таблетки, капсулы, спансулы, гранулы, суппозитории, т.е. для пероральных и ректальных лекарственных форм.

В XXII издании (1990 г.) фармакопеи США наряду с приборами и методами по определению кинетики растворения впервые рекомендован метод определения кинетики высвобождения (Drug Release). Данный тест предназначен для проведения испытаний лекарственных форм длительно высвобождающих ЛВ, пролонгированных (покрытых оболочкой) лекарственных форм и систем трансдермальной доставки лекарств. При проведении испытаний пролонгированных (покрытых оболочкой) лекарственных форм используются два метода А и В, которые включают две стадии: кислотную и буферную, и приборы, применяемые при исследовании кинетики растворения.

Схема приборов для определения скорости высвобождения (а – мешалка над диском, б – цилиндр, в – обратно вращающийся диск) [А.И. Тенцова, 1974 г.]

Для исследования высвобождения лекарственных веществ из пролонгированных лекарственных форм и систем трансдермальной доставки предложены три прибора: мешалка над диском (Paddle Over Disk) (рис. 8а), цилиндр (Cylinder) (рис. 8б) и обратно вращающийся диск (Reciprocating Disk) (рис. 8в).

Воснову мешалки над диском положен прибор «вращающаяся мешалка», описанный в тесте «Растворение» с дополнительною частью в виде дискового устройства из нержавеющей стали для удержания трансдермальной системы на дне сосуда. Предназначением дискового устройства является уменьшение до минимума «мертвого» пространства между ним и дном сосуда.

Цилиндр представляет собой «вращающуюся корзинку», где корзинка и ось заменены цилиндрическим элементом из нержавеющей стали, который служит для перемешивания и поддержания температуры в течение всего исследования.

Обратно вращающийся диск представляет собой установку, состоящую из системы откалиброванных по объему и тарированных резервуаров для раствора, сделанных из стекла или другого инертного материала, двигателя и устройства для вертикального покачивания и удержания системы горизонтально по отношению к различному ряду сосудов и системы дисковых держателей. Качающиеся колебания происходят с частотой около трех циклов в 1 мин с амплитудой около 1,9 см в течение определенного времени, указанной в частной статье. Как в тесте «Растворение», так и в тесте «Высвобождение» имеются свои критерии оценки качества лекарственных форм.

Внастоящее время ОФС 42-0003-04 «Растворение» предусматривает проведение исследований как традиционных, так и кишечно-растворимых лекарственных форм, и препаратов с модифицировнным высвобождением.

Определение скорости растворения по фармакопеи США (USP XXII, ВР 1980)

Схема прибора фармакопеи США для определения скорости высвобождения растворимых веществ [И.А. Муравьев, 1980].

Прибор представляет собой трехгорлый сосуд из пластмассы объемом 1 л. В один из тубусов (1) вводят термометр, в другой (2) – стеклянную трубку для взятия проб и их компенсирования, в третий (3) основную деталь прибора – цилиндрическую корзинку (4) высотой 3,6 см и диаметром 2,5 см, сделанную из нержавеющей стали в виде сетки с отверстиями диаметром 400 mes (около 0,351 мм). Корзинка посажена на ось мотора (5). В сосуд наливают 750-900 мл растворяющей среды, в качестве которой в зависимости от природы препарата используют очищенную воду, раствор хлороводородной кислоты различной концентрации, буферные растворы и т.д. Исследуемую лекарственную форму помещают в цилиндрическую корзинку, которую устанавливают на расстоянии 2 см от дна сосуда. Температуру растворяющей среды во время опыта поддерживают постоянной (37 ± 0,5 °С). Скорость вращения корзинки в среде регулируют с точностью ± 5%, она составляет от 25 до 200 об/мин в зависимости от свойств исследуемых препаратов. Через установленные интервалы времени отбирают для анализа по 2-3 мл с целью определения содержания лекарственного вещества. Взятый объем тот час же восполняют чистым растворителем. Определение скорости растворения ведут на 6 образцах одной серии таблеток, каждый раз в опыте используется только одна таблетка. В случае значительных разбросов значений эксперимент повторяют на 12 таблетках, из которых не менее 10 должны отвечать условиям, предусмотренным специальными статьями USP и NF.

Определение распадаемости таблеток, дражированных препаратов и капсул для внутреннего применения

Под «Распадаемостью» подразумевают способность твердой дозированной лекарственной формы распадаться на мелкие частицы или полностью растворяться в сроки, установленные нормативной документацией. Тест «Распадаемость» необходим для текущего контроля качества таблеток и капсул, обеспечения однородности внутри серий, оценки стабильности лекарственных препаратов, разработки единых стандартов при получении препаратов от различных поставщиков. Определение данного показателя по ГФ Х проводили в колбе, В настоящее время проводят с использованием специальных приборов типа «качающаяся корзинка».

Определение в колбе (Метод ГФ Х изд., в настоящее время используется только для предварительной оценки). Таблетку помещают в коническую колбу емкостью 100 мл, прибавляют 50 мл воды, имеющей температуру 37±2 °С. Колбу медленно покачивают (1–2 раза в секунду). Оценку распадаемости проводят на основании не менее 6 определений. Таблетки считают распавшимися, если все взятые для испытания таблетки растворились или превратились в рыхлую массу, которая разрушается при легком прикосновении стеклянной палочки.

Определение распадаемости лекарственных форм по Государственной Фармакопее ХI изд. проводят на лабораторном идентификаторе процесса распадаемости типа «качающаяся корзинка» (Рис. 9).

. Схема лабораторного идентификатора процесса распадаемости (1 – корзинка, 2 – сосуд для жидкости, 3 – термостатирующее устройство, 4 – электромеханическое устройство, А – стеклянная трубка) [ГФ ХI изд].

Прибор состоит из сборной корзинки (1), химического стакана (2) для жидкости вместимостью 1 л, камеры

термостата (3), термостатического устройства, поддерживающего температуру жидкости в пределах 37 ± 2 °С и электромеханического устройства), сообщающего корзинке возвратно-поступательное движение в вертикальной плоскости при частоте 28-32 цикла в минуту, на расстоянии не менее 5 и не более 6 см.

Сборная корзинка состоит из двух пластмассовых дисков диаметром 90 мм, толщиной 6 мм с 6 концентрически расположенными отверстиями диаметром 24 мм, находящимися на равном расстоянии друг от друга и от центра диска. В отверстия дисков вставлены 6 стеклянных трубок длиной 77,5 мм, внутренним диаметром 21,5 мм и толщиной стенок 2 мм. К нижней поверхности нижнего диска прикрепляют проволочную сетку из нержавеющей стали с размером отверстий 2 мм, за исключением случаев, указанных в частной статье.

Корзина снабжена шестью направляющими пластмассовыми дисками (4), которые вставляются в стеклянные трубки. Общая масса диска 1,8-2,1 г, диаметр 20 мм, высота 10 мм. Применение дисков оговаривается в частных статьях.

Перед началом исследований камеру термостата на 2/3 наполняют дистиллированной водой. Химический стакан наполняют дистиллированной водой (0,1 н раствором кислоты хлороводородной или раствором натрия гидрокарбоната рН 7,5-8,0) с температурой 30 °С. Затем включают нагрев и желаемую температуру 37 °С устанавливают и поддерживают постоянной в течение опыта контактным термометром, помещенным в термостат. При достижении температуры, установленной на контактном термометре, начинают определение распадаемости. Для проведения испытаний отбирают 18 образцов.

В каждую трубку сборной корзинки помещают одну таблетку, что позволяет проводить определение распадаемости шести таблеток одновременно. Корзинку опускают в стакан, заполненный жидкостью, размещают так, чтобы при движении она не касалась его стенок, и включают электродвигатель прибора.

За процессом распадаемости наблюдают визуально. Таблетка считается распавшейся, если все частицы разрушившейся таблетки, за исключением остатков пленочного покрытия, прошли через сетку нижнего диска корзинки.

Все образцы должны полностью распадаться, о чем судят по отсутствию частиц на сетке диска. Если 1 или 2 образца не распались, повторяют испытание на оставшихся 12 образцах. Не менее 16 или 18 образцов должны полностью распасться.

Прибор ХНИХФИ “качающаяся корзинка” (рис.10) состоит из сборной корзинки (2), сосуда емкостью 1 л для жидкости, в которой проводят испытание распадаемости таблеток, термостатического устройства, позволяющего поддерживать температуру жидкости в пределах 37±2 °С, электромотора, (1), сообщающего корзинке возвратнопоступательное движение в вертикальной плоскости при частоте циклов 28–32 в минуту на расстояние не менее 5 и не более 6 см.