Развитие реакций клеточного типа.

Методы оценки реакций клеточного типа.

Реакция гиперчувствительности клеточного типа

•лежит в основе развития ряда инфекционных заболеваний, трансплантационного иммунитета, противоопухолевого иммунитета, аутоиммунных заболеваний и контактного дерматита

•Группа аллергических реакций, которые развиваются у сенсибилизированных людей через 48–72 часа после контакта с аллергеном.

•в механизме этих реакций основная роль принадлежит действию сенсибилизированных лимфоцитов на аллерген. Антитела участия не принимают

Аг-аллергенами, индуцирующими реакции клеточного типа, являются

•бактерии, грибы, простейшие, паразиты, вирусы

•клетки собственных тканей организма с измененной антигенной структурой

•антигены гистосовместимости

•специфические антигены опухолей

•комплексные антигены, образующиеся при

участии гаптенов.

Индукция иммунного ответа при клеточно- опосредованных реакциях

•В механизмах индукции гиперчувствительности IV типа важная роль отводится антигенпрезентирующим макрофагам, дендритным и другим клеткам, обеспечивающим фагоцитирование и комплексирование негидролизованной части антигена-аллергена с белками II класса молекул МНС, а также презентацию антигена комплементарному клону Тh0. Одновременно антигенпрезентирующие клетки продуцируют цитокины (IL-12, IL-23, IL-27), обеспечивающие пролиферацию и дифференцировку антигенчувствительных клонов Th1.

•Главным цитокином в реакциях IV типа является гамма-интерферон, продуцируемый Тh1, который вызывает активацию макрофагов, вовлечение их в иммунный ответ за счет их фагоцитарной активности и уничтожения клеток-мишеней в процессе фагоцитоза

•Интерлейкин-2, продуцируемый Тh1, обеспечивает аутокринную активацию этих клеток лимфоцитов и паракринную неспецифическую пролиферацию Т-эффекторов.

•Антигенстимулированные Т-лимфоциты-хелперы и Т-лимфоциты- эффекторы обеспечивают продукцию медиаторов аллергии клеточного или замедленного типа, получивших название лимфокинов

В настоящее время выделено несколько десятков лимфокинов, которые в соответствии с особенностями их биологического действия могут быть разделены на следующие группы:

1.Факторы, влияющие на лимфоциты (фактор переноса Лоуренса, митогенный фактор, фактор, стимулирующий Т- и В-лимфоциты).

2.Факторы, влияющие на макрофаги (миграцию ингибирующий фактор; фактор, активирующий макрофаги; фактор, усиливающий пролиферацию макрофагов).

3.Цитотоксические факторы (лимфотоксин; фактор, тормозящий синтез ДНК; фактор, ингибирующий гемопоэтические стволовые клетки).

4.Факторы хемотаксиса макрофагов, нейтрофилов, лимфоцитов и эозинофилов.

5.Антивирусные и антимикробные факторы.

Методы оценки клеточного иммунного ответа

Примерами методов количественного определения, используемых для оценки клеточного иммунного ответа, являются:

•методы определения пролиферации T-клеток

•методы оценки высвобождения цитокинов (например, IL-2, IL-4, ИФН-γ).

Это предполагает использование T-клеток, иногда совместного культивирования T-клеток с клетками других популяций, к примеру, с дендритными. Для этих целей обычно используют метод

•иммуноферментных пятен (Elispot)

•проточную цитометрию.

В некоторых случаях используют анализ клеточно-опосредованной цитотоксичности.

Определение количества Т- лимфоцитов методом Е–розеткообразования (Е-РОК).

Принцип метода:

•На 1-ом этапе методом центрифугирования в градиенте плотности из крови выделяют лимфоциты.

•На 2-ом этапе с помощью реакции розеткообразования с эритроцитами барана определяют % Т- лимфоцитов от общего числа.

Реакция розеткообразования основана на наличии на поверхности Т-лимфоцитов рецепторов, способных фиксировать эритроциты барана. Поэтому при добавлении к суспензии лимфоцитов эритроцитов барана, последние адсорбируются Т- лимфоцитами. Образующиеся при этом структуры называются розетками.

Определение количества Т-лимфоцитов (CD3+) и их субпопуляций РИФ

Принцип РИФ: лимфоцитарная взвесь обрабатывается моноклональными антителами против отдельных субпопуляций Т-лимфоцитов, а затем – меченой флюорохромом антиглобулиновой сывороткой.

Подсчет флюоресцирующих клеток проводят под люминесцентным микроскопом (двухэтапная РИФ).

Определение иммунорегуляторного индекса (соотношения CD4+/CD8+)

•Иммунорегуляторный индекс (ИРИ) - соотношение Т-хелперов и Т- цитотоксических клеток (CD3+CD4+/CD3+CD8+).

•Изменение соотношения CD4/CD8 в сторону повышения отмечено в острой фазе различных воспалительных заболеваний за счет ↑ CD4 и ↓ CD8.

•Повышение ИРИ сопровождает все аутоиммунные и хронические вирусные инфекции.

•Снижение ИРИ до значений ниже 1,0 за счет ↑ уровня CD8 наблюдается при саркомах, а за счет ↓ CD4 – при СПИДе, туберкулезе, на фоне приема кортикостероидов, при недостаточности питания­.

Оценка способности к пролиферации в реакции бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ).

Принцип метода:

Т- лимфоциты под воздействием некоторых биостимуляторов, например, фитогемагглютинина (ФГА) в культуре in vitro способны превращатся в большие бластоподобные клетки с разрыхленным ядром и базофильной цитоплазмой, активно синтезирующие ДНК.