Материалы / 01. Общая микробиология / Тема 3_Физиология бактерий / Культивирование_анаэробов

Для культивирования анаэробных микроорганизмов необходимо создание бескислородных условий, достигаемое различными методами.

Физико-химические методы направлены на создание бескислородных условий в специальных аппаратах – анаэростатах (рис.1) либо путем удаления из них воздуха с последующей заменой на смесь инертных газов (например СО2+Н2+N2), либо внесение веществ, реакция между которыми идет с поглощением кислорода (например пирогаллол и щелочь) (рис.2).

Доступ кислорода в питательную среду можно затруднить, если исследуемый материал засевать вглубь полужидких или плотных питательных сред, разлитых в пробирки «высоким столбом» в расплавленном состоянии и остуженных до 43°С (рис.3).

По методу Вейона–Виньяля расплавленную и остуженную агаризованную среду с посевным материалом набирают в стеклянные трубочки, которые запаивают с двух концов.

Биологический метод основан на совместном культивировании аэробов и анаэробов на плотных питательных средах в герметически закупоренных чашках Петри (рис.4). Кислород поглощается быстро растущими «жадными» аэробами, посеянными на одной половине среды, и создаются благоприятные условия для роста анаэробов, посев которых сделан на другой половине чашки.

Наиболее удобна для культивирования анаэробов специальная среда Китта-Тароцци. В нее входят сахарный бульон, который наливают в пробирки в количестве 10-12 мл, и кусочки вареных паренхиматозных органов, обладающих редуцирующими свойствами. Перед употреблением среду Китта-Тароцци редуцируют (15-20 мин 80°С на водяной бане) для удаления растворенного в ней кислорода. Для предотвращения доступа О2 наливают небольшое количество стерильного вазелинового масла. Заметный рост анаэробов (помутнение) может наблюдаться через 48 ч и более.