Отчет по лабораторной №4
..docxМИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ АВТОНОМНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ
«Национальный исследовательский ядерный университет «МИФИ»
Обнинский институт атомной энергетики –
филиал федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего образования «Национальный исследовательский ядерный университет «МИФИ»
(ИАТЭ НИЯУ МИФИ)
Инженерно-физический институт биомедицины
Отделение биотехнологий
Кафедра биологии
Отчет по лабораторной работе №4
На тему: «Знакомство с приборами и возможностями исследований в клеточном блоке»
Работу выполнил: Студент
Цель работы
Основной целью лабораторной работы №4 на тему «Знакомство с приборами и возможностями исследований в клеточном блоке» является ознакомиться с исполнительными и/или вычислительными приборами, техниками, методологией научных исследований, которые можно провести в клеточном блоке, а также изучить процесс инкубации и культивирования клеточных агрегатов.
Основные задачи
Основными задачами являются:
Знакомство с возможностями, исполнительными и/или вычислительными приборами, техниками, методологией научных исследований, которые можно провести в клеточном блоке.
Ознакомление с методикой техник инкубации и культивирования клеточных агрегатов.
Ход работы
В начале работы мы были проинформированы о техническом оснащении клеточного блока. Основными для изучения стали CO2 – инкубатор, ламинарный бокс SAVVY и инвертированный микроскоп.
CO2 – инкубатор используется для решения повседневных задач культивирования клеток: обеспечивая отсутствие контаминации благодаря стерилизации горячим воздухом при 180 °C, он надежно имеет постоянное значение pH, поскольку используется бездрейфовая инфракрасная измерительная система FPI. Кроме того, CO2 - инкубаторы отличаются высокой точностью темперирования с превосходной динамикой и работают при хранении культур тканей без риска образования конденсата – даже при высокой влажности воздуха.
В ламинарный боксе SAVVY система осуществляет раздельное управление скоростями входящего и нисходящего воздушных потоков, а также автоматически контролирует воздушный баланс. Отсутствие необходимости механически настраивать баланс воздушных потоков значительно сокращает время технического обслуживания при валидации, смене фильтров и периодических проверках. Высокая точность поддержания установленной скорости воздушных потоков при любой загрязненности фильтров или при изменении условий окружающей среды (влажности, температуры, давления).
Инвертированный микроскоп люминесцентный МИКРОМЕД И ЛЮМ предназначен для исследований малоконтрастных клеточных культур тканей, осадков жидкостей и т.п., находящихся в специальной посуде. Исследования объектов проводятся в проходящем свете по методу светлого поля и фазового контраста, а также в свете видимой люминесценции.
Для культивирования клеток используют питательную среду на основе аминокислот и витаминов. Среда DMEM (Dulbecco′s Modified Eagle′s Medium) является модификацией среды BME (Basal Medium Eagle) и содержит в четыре раза больше аминокислот и витаминов, а также различные добавки, улучшающие рост клеток. Изначально среда DMEM была с содержанием глюкозы 1г/л и применялась для культивирования эмбриональных клеток мыши. Затем появились модификации среды DMEM (с высоким и пониженным содержанием глюкозы, пирувата натрия, различных добавок) для культивирования клеток различных типов, в том числе нетрансформированных клеток и гибридом. Среда DMEM является наиболее распространенной средой для культивирования клеток наряду со средой MEM.
Порядок выполнения экспериментальной работы:
Для начала снимаем нанесенный ранее парафин с крышек реактивов, который наносится для предотвращения выпаривания растворов.
Выливаем старую питательную среду и протираем края чашек Петри ваткой.
С помощью автоматического дозатора со сменными одноразовыми пипетками наливаем смесь реактивов в чашку Петри, необходимую для отделения клеток ото дна чашки и друг от друга.
Промываем чашки, капая раствор на стенки чашки, чтобы клетки отделялись постепенно.
Закрываем чашки Петри и помещаем их в инкубатор для лучшего протекания процесса.
После нахождения в инкубаторе добавляем в чашки одинаковое количество питательной среды, доливая постепенно по 4 мл.
На каждой чашке пишется название клеток, дата и пропорция разведения: 1/16, 1/8 или 1/4.
По необходимости культуры клеток замораживают в жидком азоте для сохранения для дальнейших исследований.
Выводы
В ходе лабораторной работы №4 по теме «Знакомство с приборами и возможностями исследований в клеточном блоке» мы ознакомились с исполнительными и/или вычислительными приборами, техниками, методологией научных исследований, которые можно провести в клеточном блоке, а также изучили процесс инкубации и культивирования клеточных агрегатов.