Lecture / Presentation 2 / Методичка Часть 2 леч пед МПФ. Част МБ и ВИР

Во второй пробирке сыворотку смешать с физиологическим раствором и 0,5 мл перенести в третью, снова перемешать и 0,5 мл смеси перенести из третьей пробирки в четвертую, а из четвертой - таким же способом в пятую. После перемешивания из пятой пробирки 0,5 мл смеси удалить в банку с раствором хлорамина.

Впробирки первого ряда добивать по 0,5 мл брюшнотифозного O-диагностикума, а

впробирки второго ряда - по 0,5 мл брюшнотифозного Н-диагностикума. Предварительные результаты реакции учесть после 2-часового инкубирования пробирок в термостате при 37ºC, а окончательные - на следующем занятии, после суточного выдерживания при комнатной температуре.

Произвести учет результатов реакции Видаля по четырехкрестной системе с "О"- и "Н"-диагностикумами. Результаты реакции и заключение записать в тетрадь.

Результаты реакции Видаля

Заключение___________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

6. Разобрать особенности антигенного строения и принципы современной серологической классификации сальмонелл (демонстрация схемы).

8. Приготовить взвесь испражнений больного в физиологическом растворе в соотношении 1:10, профильтровать через ватно-марлевый фильтр и произвести посев взвеси на среду обогащения (магниевая среда) и на дифференциально-диагностические среды Плоскирева или Эндо и висмут-сульфит-агар. Поместить посевы в термостат.

Контрольные вопросы

Чем отличаются сальмонеллы брюшного тифа от сальмонелл паратифов А и В по биохимическим свойствам? Какова антигенная структура сальмонелл?

Какие микробиологические методы используются для диагностики брюшного тифа и паратифов? Какой материал берется от больного для ранней диагностики брюшного тифа и как этот материал исследуется?

Почему при серологической диагностике брюшного тифа используются "О" и "Н" - антигены? Какое значение имеет исследование испражнений при брюшном тифе и паратифах?

Каков порядок исследования испражнений?

Как производится идентификация выделенных чистых культур возбудителей брюшного тифа? Как определяются серологическая группа и серотип сальмонелл?

Как осуществляется фаготипирование брюшнотифозных бактерий и в чем заключается значение этого метода?

Какой материал берется для бактериологического исследования на брюшнотифозное бактерионосительство и каким образом он исследуется?

Как осуществляется серологическая диагностика брюшнотифозного бактерионосительства? Каковы особенности патогенеза брюшного тифа?

Какие существуют иммунопрепараты для профилактики брюшного тифа и паратифов? В чем суть иммунофлуоресцентного метода диагностики брюшного тифа?

43

Какие микроорганизмы чаще всего вызывают пищевые токсикоинфекции? Какие условия способствуют возникновению пищевых токсикоинфекций?

Какие сальмонеллы чаще всего оказываются возбудителями пищевых токсикоинфекций?

Каковы морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические свойства сальмонелл - возбудителей пищевых токсикоинфекций?

Каковы особенности патогенеза пищевых токсикоинфекций?

Какие микробиологические методы используются для диагностики пищевых токсикоинфекций? Что подлежит исследованию при пищевых токсикоинфекциях?

На какие питательные среды следует сеять материал при пищевых токсикоинфекциях? Как производится идентификация сальмонелл - возбудителей пищевых токсикоинфекций?

Как производится исследование пищевых продуктов на наличие условно патогенных микробов кишечной группы?

Как производится исследование пищевых продуктов на наличие стафилококка? Как обнаруживается стафилококковый энтеротоксин?

Какие формы сальмонеллезов бывают у животных?

Каковы эпидемиологические особенности пищевых токсикоинфекций? Каковы меры предупреждения пищевых токсикоинфекций?

Что такое спорадический сальмонеллез и каковы особенности его эпидемиологии?

Методы микробиологической диагностики брюшного тифа и паратифов А. Бактериологический

1. Исследование крови больного

44

2. Исследование желчи, мочи, испражнений Исследуемый материал

Б. Серологический

РПГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом. ИФМ. Реакция Видаля.

МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРЮШНОТИФОЗНОГО БАКТЕРИОНОСИТЕЛЬСТВА

А. Бактериологический

Исследование желчи, мочи, испражнений – по классической схеме

Б. Серологический

Реакция пассивной Vi-гемагглютинации (РП-Vi-ГА) для выявления Viантител, определение O-, Н-, Vi-антител одновременно

В. Аллергический

Кожная проба с Ви-тифином

45

Методы микробиологической диагностики пищевых токсикоинфекций, вызываемых сальмонеллами и условно патогенными

бактериями кишечной группы

А. Бактериологический

Материал: остатки пищи, рвотные массы, смывы с предметов, промывные воды, испражнения, моча

Кровь

Б. Иммунологические

Применение реакции иммунофлуоресценции как экспресс-метода для обнаружения сальмонелл.

Реакция агглютинации для выявления антител с парными сыворотками больного по типу реакции Видаля. Для реакции используют диагностикум, живые лабораторные культуры и аутоштаммы.

Применение реакции пассивной гемагглютинации с использованием О- эритроцитарного диагностикума для обнаружения антител и реакции Кумбса для обнаружения неполных антител.

46

Методы микробиологической диагностики пищевых отравлений, вызываемых стафилококками

А. Бактериологический

Материал: остатки пищи, рвотные массы, промывные воды, испражнения, смывы с предметов

МПБ с 6,5% и 10% хлористого натрия и МПБ с 1% глюкозы

МПАМПБ

Биологическая проба на

кошках

Проба на плазмокоагуляцию

Определение фаготипа

Б. Обнаружение стафилококковых энтеротоксинов: непрямой бактериологический, серологический и биологический методы.

В. Энтеротоксин на кошках определяют внутривенным введением материала.

Полученный центрифугат или фильтрат стафилококковой культуры прогревают в кипящей водяной бане в течение 30 минут и вводят кошкам в вену уха или бедренную вену в количестве 0,5 мл на 1 кг веса. Наличие рвоты и поноса или только рвоты, наступившей в сроки от 30 минут до 3 часов, указывает на присутствие энтеротоксина.

47

Приложение к ЗАНЯТИЮ 8

А. Характеристика семейства Enterobacteriaceae

Короткие, не образующие спор палочки с закругленными концами, перитрихи или неподвижные, образующие или не образующие капсулу, грамотрицательны, оксидазонегативны (отсутствует цитохромоксидаза), но каталазопозитивны, ферментируют глюкозу (и другие углеводы) с образованием кислоты или кислоты и газа, как правило, не обладают протеолитической активностью, факультативные анаэробы или аэробы, не требовательны к питательным средам, место обитания – кишечный тракт и/или дыхательные пути, фекально-оральный (иногда – воздушно-капельный) путь передачи, восстанавливают нитраты в нитриты, хемоорганотрофы.

Б. Для фаготипирования брюшнотифозных бактерий, содержащих Vi-антиген, выпускается набор типовых брюшнотифозных Vi -фагов в ампулах с указанием рабочих разведений. Vi-I-фаг - универсальный, лизирует все культуры бактерий, содержащие Viантиген, Vi-II- фаг - лизирует только те штаммы, на которых он пассировался. Этот фаг подразделен на типы, обозначаемые заглавными буквами латинского алфавита. Соответственно типовым фагам существуют фаготипы брюшнотифозных бактерий, которые имеют идентичные обозначения.

В природе циркулирует более сотни фаготипов возбудителя брюшного тифа. На территории нашей страны чаще всего встречаются фаготипы A, F2, EI, С, Е2.

Существуют системы фаготипирования возбудителей паратифа В и паратифа А.

В. Классификация пищевых отравлений

48

Г. Классификация сальмонелл (Salmonella)

Род сальмонелл включает свыше 2000 серовариантов.

Род Salmonella включает единственный вид S. enterica (ранее S. choleraesuis) с семью основными подвидами: S. enterica, S. salamae, S. arizonae, S. diarizonae, S. houtenae, S. bongori, S. indica, которые различаются по ряду биохимических признаков (см. табл.).

Примечание: × - ферментация поздно.

З А Н Я Т И Е 9

Дата ______________

Тема: Микробиологическая диагностика дизентерии и эшерихиозов

План занятия:

1.Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств дизентерийных бактерий.

2.Исследование испражнений больного дизентерией - посев на среду Плоскирева. Пересев подозрительной колонии на МПА, среду Ресселя и среды "пестрого ряда". Агглютинация культуры поливалентными и монорецепторными видовыми, типовыми и групповыми сывортками (разбор схемы).

3.Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств диареегенных кишечных палочек.

4.Исследование испражнений больного эшерихиозом ребѐнка - посев на дифференциаль- но-диагностические среды. Пересев подозрительной колонии на МПА, среду Ресселя и среды "пестрого ряда". Агглютинация культуры поливалентными и монорецепторными видовыми, типовыми и групповыми сыворотками (разбор схемы).

5.Бактериологическая диагностика кишечной инфекции (продолжение). Регистрация результатов посева, сделанного на прошлом занятии. Посев на «пестрый ряд», МПА, среду Пешкова.

Методические указания

1. Приготовить препараты-мазки из культур разных видов шигелл, окрасить по Граму и промикроскопировать. Сравнить морфологию бактерий во всех препаратах и отметить морфологическое сходство их друг с другом. Препараты зарисовать. Изучить биохимические свойства дизентерийных бактерий по демонстрационным наборам сред "пестро-

49

го ряда". Разобрать особенности антигенного строения и принципы современной классификации шигелл.

2.Производят посев испражнений больного дизентерией на чашки с дифференци- ально-диагностической средой Плоскирева. Бактериальной петлей каплю испражнений нанести на пластинку бактоагара Плоскирева и тщательно рассевают штриховым способом. На следующий день находят колонии, подозрительные на дизентерийные (бесцветные, прозрачные). Часть колонии микроскопируют с окраской по Граму, а оставшуюся часть засевают на скошенный МПА, среду Ресселя, среду Пешкова для определения подвижности и среды "пестрого ряда". Затем идентифицируют по антигенным свойствам реакцией агглютинации на стекле, используя видовые, типовые и групповые поливалентные и монорецепторные сыворотки. Для эпидемиологических целей у шигеллы Зонне проводят фаготипирование, хемотипирование или колициногено-/колицинотипирование.

3.Приготовить препараты-мазки из культуры кишечной палочки, окрасить по Граму

ипромикроскопировать. Препарат зарисовать. Изучить биохимические свойства кишечной палочки по демонстрационному набору сред "пестрого ряда". Разобрать особенности антигенного строения и принципы современной классификации E.coli.

4.Производят посев испражнений ребенка, больного эшерихиозом, на чашки с диф- ференциально-диагностическими средами Эндо и Левина. Диареегенная кишечная палочка ни по культуральным, ни по биохимическим свойствам не отличается от непатогенной, отличается наличием определенных факторов патогенности и принадлежностью к вполне определенным серогруппам и сероварам. Поэтому отбор подозрительных колоний со сред Эндо или Левина проводят по результатам реакции агглютинации на стекле с поливалентной ОКА-сывороткой (проверяют не менее 10 одинаковых колоний); колонию, давшую четкую агглютинацию, отсевают для накопления чистой культуры. Далее проверяют развернутые биохимические свойства и определяют принадлежность к серогруппе реакцией агглютинации на стекле живой (за счет К-антигена) и гретой (за счет О-антигена) культуры с поливалентными (ОКВ, ОКС, ОКD, ОКЕ) сыворотками. Принадлежность к серовару (серотипу) определяют в живой культуре с помощью Н-сывороток.

5.Найти на чашке с дифференциально-диагностической средой подозрительные лактозонегативные колонии, из части колонии приготовить препарат-мазок, окрасить по Граму и промикроскопировать. Оставшуюся часть колонии пересеять на скошенный МПА, среды «пестрого ряда» и среду Пешкова. Посевы поместить в термостат.

50

Контрольные вопросы

Какие микроорганизмы являются возбудителями дизентерии?

Какие принципы используют для классификации возбудителей дизентерии?

Как отличаются различные виды дизентерийных бактерий по биохимическим свойствам? Каковы особенности антигенного строения бактерий вида Зонне?

Каковы особенности антигенного строения бактерий вида Флекснера?

По каким признакам бактерии вида Флекснера подразделяются на серовары и подсеровары?

Каковы особенности антигенного строения бактерий вида Бойда? Каковы особенности патогенеза дизентерии?

Какие микробиологические методы используются для диагностики дизентерии?

Какой материал исследуется для выделения возбудителей дизентерии и на какие питательные среды его засевают?

Где в организме больного локализуется возбудитель дизентерии? Как следует брать материал от больного дизентерией?

По каким признакам идентифицируют возбудителей дизентерии?

Каково различие между типовыми и групповыми диагностическими агглютинирующими дизентерийными сыворотками?

Для чего необходимо серологическое типирование возбудителей? Какова методика кератоконьюктивальной пробы и каково ее значение?

Каковы методика и цель определения чувствительности дизентерийных бактерий к антибиотикам?

Вкаких случаях и как применяют дизентерийный бактериофаг?

Вчем заключается сущность методов определения чувствительности бактерий Зонне к колицинам и типов колицинов, продуцируемых шигеллами?

Как ставится аллергическая проба Цуверкалова?

Чем обусловлена вирулентность дизентерийных бактерий?

Какие микроорганизмы являются основными представителями нормальной кишечной микрофлоры?

Какое значение имеет кишечная микрофлора для организма человека?

Вкаких случаях возникает дисбактериоз?

Какие препараты применяют для восстановления состава нормальной микрофлоры кишечника?

Почему кишечную палочку считают санитарно-показательным микроорганизмом при загрязнении внешней среды?

Что такое коли-титр и коли-индекс?

Каково антигенное строение кишечной палочки?

Как выделяют чистую культуру диареегенной кишечной палочки?

Какой антиген (O или К) определяют в реакции агглютинации с живой культурой? Как обнаруживают специфический O-антиген у кишечной палочки?

По какому антигену окончательно судят о принадлежности бактерий к патогенному серовару?

Что собой представляют колицины и какое значение имеет определение их типа?

На какие категории и по каким признакам подразделяют диареегенные кишечные палочки?

Какими факторами патогенности обладают энтеротоксигенные кишечные палочки? Каков генетический контроль их синтеза?

Чем обусловлена патогенность энтеропатогенных кишечных палочек? Чем обусловлена патогенность энтероинвазивных кишечных палочек?

Чем объясняется некоторое антигенное и патогенное сходство энтероинвазивных кишечных палочек и шигелл?

С чем связана патогенность знтерогеморрагических кишечных палочек?

51

Каков генетический контроль биосинтеза шигаподобных экзотоксинов у энтерогеморрагических вариантов кишечной палочки?

Каков механизм действия термостабильных и термолабильных энтеротокоинов? Какова молекулярная структура энтеротоксинов?

Каковы основные способы заражения диареегенными кишечными палочками?

Какие категории диареегенных кишечных палочек чаше всего вызывают внутрибольничные вспышки?

Можно ли отличить колонии диареегенных кишечных палочек от колоний непатогенных кишечных палочек на дифференциально-диагностических средах? Если можно, то в каких случаях?

Методы микробиологической диагностики дизентерии А. Бактериологический

Испражнения

Б. Аллергический

Внутрикожная проба с дизентерином (проба Цуверкалова).

52