4037
.pdf9.Гниненко Ю. И., Арапова Н. Н. Cenangiumabietis в очагах массового размножения сосновой пяденицы в Северном Казахстане // I съезд микологов России. Тезисы докладов. http://www.mycology.ru/nam/1crm/part3.pdf.
10.Merrill, W. and Wenner, N.G. 1996. Cyclaneus maneedlecast and needle retention of Scots pine. PlantDisease 80:294-298.
11.Мозолевская Е.Г., Соколова Э.С.Проблема инвазий возбудителей болезней и вредителей древесных растений в Москве. Web-портал Чужеродные виды на территории России. http://www.sevin.ru/invasive/publications/mozol_sokol_02_pr.html.
12.Zhou, Y. Synthetic molecular mimics of naturally occurring cyclopentenones exhibit antifungal activity towards pathogenic fungi / Y. Zhou [et al.] // Microbiology, 2011. – 157. – P. 3435-3445.
13.Жимулев, И.Ф. Общая и молекулряная генетика: учеб. пособие для вузов. Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2006. – 479 с.
14.Падутов В.Е.- Генетические ресурсы сосны и ели Беларуси, монография, Гомель, ИЛ НАНБ, 2001, 144 с.
15.Падутов В.Е., Хотылева Л.В., Баранов О.Ю., Ивановская С.И.-
Генетические эффекты трансформации лесных экосистем, Экологическая
генетика, т. VI, № 1, 2008, 3-11 с.
16.Левонтин Р. Генетические основы эволюции: Пер. с англ. - М.,
1978. - 350 с.
17.Состояние лесов Российской Федерации в 2013 году и прогноз на 2014 год. Федеральное бюджетное учреждение «Российский центр защиты леса». Г. Пушкино, 2014 г. 45 с.
18.Алтухов Ю. П., 2003. Генетические процессы в популяциях. - М.:
ИКЦ «Академкнига», 431 с.
19. White, T.J. Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics / T.J. White [et al.] // in PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Innis, M. A., D. H. Gelfand, J. J. Sninsky, and T. J. White eds.). – New York: Academic Press Inc. – 1990. – P. 315-322.
21
Приложение 1
Список оборудования для видовой идентификации фитопатогенов сеянцев
лесных питомников с помощью молекулярно-генетических методов анализа
№ |
Наименование |
Использование |
1 |
Автоматические дозаторы |
Для автоматического дозирования жидкостей |
2 |
Амплификатор (термоциклер) |
Для проведения полимеразной цепной реакции |
|
|
(ПЦР) |
3 |
Весы электронные |
Для взвешивания образцов и химических |
|
|
реактивов |
4 |
Вортекс |
Для перемешивания содержимого пробирок |
5 |
Генетический анализатор |
Для определения нуклеотидной |
|
|
последовательности участков ДНК |
6 |
Камера электрофореза с источником |
Для электрофоретического разделения |
|
питания |
наработанных продуктов ПЦР |
7 |
Мешалка магнитная |
Для перемешивания компонентов раствора |
8 |
Морозильная камера |
Для длительного хранения образцов и |
|
|
химических реактивов (от -20 до -80 °С) |
9 |
ПЦР-бокс |
Рабочее место со стерильными условиями |
10 |
Рециркулятор воздуха и УФ- |
Для стерилизации рабочего помещения |
|
стерилизатор |
|
11 |
рН-метр |
Для измерения рН-среды растворов |
12 |
Система гель-документации |
Для получения электрофореграмм гелей |
13 |
Система очистки воды |
Для получения ультрачистой деионизованной |
|
|
воды |
14 |
Спектрофотометр |
Для качественных и количественных |
|
|
измерений в растворах |
15 |
Термостат твердотельный |
Для инкубации содержимого пробирок при |
|
|
постоянной необходимой температуре |
16 |
Термо-шейкер |
Для перемешивания и инкубации содержимого |
|
|
пробирок при заданной температуре |
17 |
Холодильная камера |
Для хранения образцов и химических |
|
|
реактивов (от 2 до 8 °С) |
18 |
Центрифуга |
Для разделения компонентов смесей на |
|
|
фракции по массе |
19 |
Шкаф сухожаровый |
Для стерилизации стеклянной посуды |
22
Приложение 2
Список химических реактивов и пластиковой посуды на различных этапах работ для видовой идентификации фитопатогенов сеянцев лесных
питомников с помощью молекулярно-генетических методов анализа
№ |
Этапы работ |
Наименование |
|
п/п |
|||
|
|
||
1 |
Выделение нуклеиновых |
Наконечники для автодозаторов |
|
|
кислот |
|
|
|
Пробирки типа эппендорф объемом 2 мл и 1,5 мл |
||
|
|
Трис(гидроксиметил)аминометан, С4Н11NO3 |
|
|
|
Бромидцетилтриметиламмония(CTAB), С14Н29N(СН3)3Br |
|
|
|
ЭДТА, С10Н14N2Na2O8·2H2O |
|
|
|
Хлористый натрий, NaCl |
|
|
|
Меркаптоэтанол-2 (β) (Тиоэтиленгликоль) |
|
|
|
Этанол, C2H5OH |
|
|
|
Хлороформ, CHCl3 |
|
|
|
Пропанол-2, С3Н7ОН |
|
|
|
Изобутилкарбинол (изоамиловый спирт), |
|
|
|
(CH3)2CHCH2CH2OH |
|
2 |
Полимеразная цепная |
Наконечники для автодозаторов |
|
|
реакция |
Пробирки типа эппендорф объемом на 0,2 мл |
|
|
|
Taq полимераза + буфер + Mg2+ |
|
|
|
Дезокситрифосфаты |
|
|
|
Праймеры |
|
3 |
Электрофоретическое |
Наконечники для автодозаторов |
|
|
разделение продуктов |
Уксусная кислота (ледяная), СН3СООН |
|
|
амплификации |
Агароза[C12H14O5(OH)4]n |
|
|
|
Трис(гидроксиметил)аминометан, С4Н11NO3 |
|
|
|
ЭДТА, С10Н14N2Na2O8·2H2O |
|
|
|
Краска для нанесения на гель |
|
|
|
Бромид этидия, С21Н20N3Br |
|
|
|
Маркер длин фрагментов |
|
|
|
|
|
4 |
Выделение и очистка |
Наконечники для автодозаторов |
|
|
продуктов амплификации |
Пробирки типа эппендорф объемом 1,5 мл |
|
|
из геля |
Набор для выделения ДНК из агарозного геля |
|
|
|
Этанол, C2H5OH |
|
5 |
Секвенирующая |
Наконечники для автодозаторов |
|
|
полимеразная цепная |
|
|
|
Пробирки типа эппендорф объемом на 0,2 мл |
||
|
реакция |
BigDye® Terminator Cycle Sequencing Kit |
|
|
|
|
|
|
|
Праймеры |
|
|
|
|
|
6 |
Очистка продуктов |
Наконечники для автодозаторов |
|
|
секвенирующей |
Пробирки |
|
|
полимеразной цепной |
BigDye® XTerminatorPurificationKit |
|
|
реакции |
|
|
7 |
Определение |
310 GeneticAnalyzerCapillary, |
|
|
нуклеотидной |
POP денатурирующая разделительная матрица |
|
|
последовательности |
Буфер для генетического анализатора 310 с ЭДТА (10X) |
|
|
|
23 |
Сиволапов Владимир Алексеевич Карпеченко Никита Александрович Вепринцев Владислав Николаевич Карпеченко Ирина Юрьевна Сиволапов Алексей Иванович
Биотехнология
Ранняя диагностика заболеваний сеянцев лесных питомников с помощью методов молекулярно-генетического анализа.
Методические указания к практическим занятиям для студентов по направлению подготовки магистров 35.04.09 – Ландшафтная архитектура
Редактор
Подписано в печать 11.2014. Формат 60×90/16. Заказ Объем 1,5 п.л. Усл.п.л. 1,79. Уч.- изд. л. 1,70. Тираж 100 экз.
ФГБОУ ВО «Воронежский государственный лесотехнический университет»
РИО ФГБОУ ВО «ВГЛТУ». 394087, Воронеж, ул. Тимирязева, 8 Отпечатано в УОП ФГБОУ ВО «ВГЛТУ»
394087, г. Воронеж, ул. Тимирязева, 8
24