ФИЗИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
Регенерация ПС кипячением;
Замена обычной атмосферы
атмосферой индифферентного газа (N2, H2, Ar, Kr);
Добавление в ПС кусочков паренхиматозных органов или мясного фарша, сорбирующих
кислород (среда Китта –Тароцци).
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
АНАЭРОБНЫЕ БОКСЫ
•Наиболее сложным подходом является пересев и культивирование
ванаэробных боксах.
•Это прозрачные камеры со шлюзами и отверстиями для рук с рукавами, заканчивающимися резиновыми перчатками.
•В них создают стерильные условия, заполняют бескислородной газовой смесью, поддерживают температуру 37 °С.
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
Использование веществ, химически связывающих О2 из атмосферы роста анаэробов (напр.,
щелочной раствор пирогаллола.
Добавление в ПС
редуцирующих веществ (глюкоза);
эксикатор
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Жидкая среда для выращивания анаэробных бактерий (ср. Китт-Тароцци)
Среда Китт-Тароцци – МПБ,
содержит кусочки печени и
0,5% глюкозы. Залита слоем
вазелинового масла. Перед засевом среду регенерируют
(прогревают в кипящей водяной бане), это удаляет
растворенный О2.
Остатки О2 адсорбируются печенью и химически связываются глюкозой.
Вазелиновое масло препятствует повторному растворению О2 при охлаждении среды.
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Плотная среда для выращивания анаэробных бактерий (ср. Вильсона-Блера)
МПА, содержит глюкозу,
сульфит натрия и хлорное железо. Строгие анаэробы
окисляют сульфит (SO3) до
сероводорода (H2S), а последний взаимодействует с железом с образованием
черного сульфида железа,
который окрашивает колонии бактерий.
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Кровяной агар Цейсслера:
3%-ный МПА с 1-2 % глюкозы, смешивают (при температуре 50 °С) с 15-20% свежей дефибринированной крови (барана, КРС, лошади, кролика или морской свинки).
Метод Перетца. В расплавленный и охлаждённый сахарный агар вносят суспензию из материала, содержащего анаэробы и заливают под стекло (6х6 см), помещённое на фрагментах спичек в чашку Петри. Под стеклом создаются анаэробные условия.
Наиболее простой и удобной разновидно-
стью метода является метод «перевернутых чашек». При этом исследуемый материал в пробирке с расплавленным сахарным агаром заливают в крышку чашки Петри и закрывают стерильным донышком чашки, избегая обра-
зования пузырьков воздуха. Щель между краями крышки и дном чашки Петри заливают расплавленным парафином.
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
Метод Фортнера – совместный посев на плотную ПС аэробных и анаэробных бактерий.
аэробы |
анаэробы |
Сначала вырастают аэробные бактерии, которые поглощают кислород, а затем в анаэробных условиях растут анаэробы.
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
3-й этап
подтверждение чистоты культуры:
-макроскопически (при осмотре чистая культура должна быть однородной
и ее вид соответствовать
виду пересеянной колонии);
- микроскопически (при сравнении окрашенных по
Граму препаратов-мазков из колонии и чистой
культуры морфология бактерий и их окраска
должны быть идентичны).
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Схема выделения чистой культуры облигатных анаэробов.
•Взятие исследуемого материала осуществляется шприцем с притертым поршнем, после чего материал вносят в пробирку с транспортной средой.
•Выделение чистой культуры проводится со строгим соблюдением анаэробных условий на всех этапах исследования.
1-й этап – получение изолированных колоний.
•Готовят ряд разведений исследуемого материала и делают посев на чашки Петри со средой КАБ или другой питательной средой для культивирования анаэробов.
•Посевы инкубируют в микроанаэростатах, заполненных газовой смесью, при температуре 37 °С в течение 48-72 часов.
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ