«Пестрый ряд» (среды Гисса).
•Состав: к 1% пептонной воде добавляют 0,5% раствор определен-
ного углевода (глюкоза, лактоза, мальтоза, маннит и др.) и индикатор Андреде (кислый фуксин в 1 N растворе NaOH), разливают по пробиркам.
Впробирки помещают поплавок (трубка длиной около 3 см, один конец которой запаян) для улавливания газообразных продуктов, образующихся при разложении углеводов. Среда при рН 7,2-7,4 бесцветна.
При разложении углеводов она приобретает малиновый цвет.
•Идентификация бактерий по биохимическим признакам с помощью сред "пестрого ряда". Короткий "пестрый ряд" включает жидкие среды Гисса с моно- и дисахаридами: глюкозой, лактозой, сахарозой, мальтозой и с 6-атомным спиртом — маннитом.
Вдлинный "пестрый ряд" наряду с перечисленными углеводами вводят среды с разнообразными моносахаридами (арабиноза, ксилоза, рамноза, галактоза и др.) и спиртами (глицерин, дульцит, инозит и др.).
•Чистую культуру исследуемого микроорганизма засевают петлей в среды "пестрого ряда". Посевы инкубируют при 37 °С в течение 18-24 ч
или больше. В том случае, если бактерии ферментируют углевод до образования кислых продуктов, наблюдается изменение цвета среды; при разложении углевода до кислоты и газообразных продуктов
наряду с изменением цвета появляется пузырек газа в поплавке. Если используют среды с полужидким агаром, то образование газа
регистрируется по разрыву столбика. При отсутствии ферментации цвет
среды не меняется. |
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ |
|
Среды Гисса («короткий пёстрый ряд») с индикатором Андреде
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Среды Гисса («короткий пёстрый ряд») с индикатором Андреде
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Среда Клиглера: Состав: МПА, 1 % лактозы,
0,1% глюкозы, тиосульфат натрия и сульфат железа, индикатор феноловый красный.
Посев по поверхности и уколом в столбик агара.
Учет результата:
При ферментации только глюкозы – желтый столбик,
скошенная часть не меняет окраску.
При ферментации глюкозы,
и лактозы (E. coli) –
вся среда желтая.
При образовании H2S (сальмонеллы, протей) –
агар чернеет.
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
РОСТ НА СРЕДАХ ГИССА
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Биохимические признаки, используемые
для идентификации бактерий
Способность расщеплять белки (протеолити-
ческие свойства) изучают на белковых средах
(свернутая сыворотка, полужидкий желатин) –
обладающие протеолитическими свойствами бактерии растворяют питательную среду.
Определение уреазы
проводится в среде Гисса с мочевиной и индикатором феноловым красным.
При наличии гидролиза мочевины происходит защелачивание среды за счет образования аммиака, и среда
краснеет.
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
ПРОТЕОЛИЗ. РАЗЖИЖЕНИЕ ЖЕЛАТИНА
ЛАКМУСОВОЕ МОЛОКО
Тест позволяет определить не только способность бактерий расщеплять белки, но и степень выраженности их протеолитической активности по «+++ системе»,
но и редуцирующую активность
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Биохимические признаки, используемые
для идентификации бактерий
Способность выделять летучие соединения
(сероводород, индол) определяют с помощью индикаторных бумажек, вставленных под пробку в пробирку с жидкой культурой микроорганизма.
Фильтровальную бумажку на H2S пропитывают раствором ацетата свинца и высушивают.
При выделении сероводорода бумажка чернеет.
Фильтровальную бумажку на индол пропитывают раствором щавелевой кислоты и высушивают.
При выделении индола бумажка краснеет.
Образование аммиака. Для определения способности к образованию аммиака проводят посев в МПБ, и между его поверхностью и пробкой закрепляют полоску лакмусовой бумаги. При положительном результате
бумажка синеет.
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
ВЫДЕЛЕНИЕ ЛЕТУЧИХ СОЕДИНЕНИЙ
сероводород |
индол |
аммиак |
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ