Окраска по Граму в модификации Синева
1. На препарат кладут квадратик фильтровальной бумаги, пропитанной карболовый раствором генцианвиолета и
высушенный, затем увлажняют его 2-3 каплями воды. Окрашивают - 2 минуты.
2. Сбросив пинцетом фильтровальную бумагу, на препарат наливают раствор Люголя (водно-спиртовый раствор
йодистого калия и кристаллического йода) на 2 минуты.
3. Слив раствор Люголя, не промывая препарат водой,
наливают на него для обесцвечивания несколько капель 960 спирта (обесцвечивание должно производиться при покачивании стекла) на 30 секунд.
4. Быстро смыв спирт водой, препарат докрашивают раствором фуксина Пфейффера, после чего промывают водой и высушивают. Окрашивают - 2 минуты.
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Принцип окраски по Граму
В основе окраски по Граму лежит различие в строении клеточной стенки (КС) бактерий.
- Грамположительные бактерии имеют толстую,
многослойную КС, поэтому при окраске комплекс
генцианфиолетовый-йод прочно связывается с КС, и не отмывается спиртом. Бактерии красятся
в сине-фиолетовый цвет.
- Грамотрицательные бактерии имеют тонкую,
малослойную КС, поэтому при окраске комплекс генцианфилетовый-йод непрочно связывается с КС, и отмывается спиртом. Бесцветные бактерии
красятся фуксином в розово-красный цвет.
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Контроль окраски по Граму
При окраске по Граму неизвестной бактерии на одном стекле готовят три мазка из разных культур
(для контроля).
Мазок в середине стекла готовят из изучаемой культуры, а по концам стекла с одной стороны:
-из культуры стафилококка (заведомо грамположительная – окраска сине-фиолетовая),
ас другой
-из культуры кишечной палочки (заведомо грамотрицательная - окраска розово-красная).
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Окраска по Граму
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Рисунки к занятию № 2
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Рисунки к занятию 2
Рост на среде Пешкова
жгутики |
«висячая капля» |
подвижные неподвижные
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Рисунки к занятию 2
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ
Доцент Наумов Г.Н., КубГМУ