38. Что такое волютин, как его выявляют и у каких бактерий?

Волютин, или метахроматические зёрна (метахроматин) – запасное вещество, состоящее из полифосфатов и веществ, близких к нуклеиновым кислотам. В них сосредоточены запасы органического фосфора.

Волютин локализован в цитоплазме (у бактерий и актиномицетов) или в вакуолях (у грибов и водорослей). Окрашивается основными красителями. Волютин при окрашивании метиленовой синью приобретает фиолетово-чёрный цвет. Способность приобретать иной цвет, чем цвет окрашивающего вещества, называется метахромазией. Название «волютин» произошло от Spirillum volutans (Спириллы кувыркающейся), в клетках которой он был впервые обнаружен.

Волютин в микроорганизмах в виде крупных гранул находится в вакуолях дрожжей или цитоплазме бактерий (уксуснокислых, молочнокислых, азотфиксирующих) и актиномицетов.

39. Этапы выделения чистой культуры возбудителя.

Первый этап: материал больного высеивают на плотные среды (дефферинциально-диагностические) с целю получения изолированный колоний.

Второй этап: На основании культуральных свойств (особенности роста микробов на жидких и плотных питательных средах.) мы ищем подозрительные колонии. И их отсеиваем на питательную среду (скошенный питательный агар). Остатки исследуемых колоний осторожно, не касаясь других, снимают из поверхности среды и засевают на скошенный агар или на секторы чашки Петри с питательной средой для получения чистой культуры.

Третий этап: Сначала обращают внимание на особенности роста микроорганизмов на среде и делают мазок, крася его за методом Грама, с целью проверки культуры на чистоту. Если под микроскопом наблюдают бактерии однотипной морфологии, размеров и тинкториальних (способность краситься) свойств, делают вывод, что культура чиста.

40. Как изучают протеолитические свойства бактерий?

Протеолитические свойства проявляются выделением во внешнюю среду протеолитических ферментов, которые расщепляют белки до промежуточных продуктов (пептоны, полипептиды, аминокислоты) или до продуктов конечного распада (индол, сероводород, аммиак и др.)

Протеолитические свойства бактериальной культуры определяют, засевая ее на среды с белковыми субстратами (желатин, пептон и др.).

Желатин используется как показатель наличия или отсутствия у изучаемой бактериальной культуры протеолитической активности как таковой.

1. Если бактерии обладают протеолитической активностью, то они будут разжижать столбик желатина, засеваемый уколом. При этом для идентификации некоторых видов значение имеет и то, как именно разжижается желатин (послойно, перевернутой елочкой, воронкой и т.п.).

2. Бактерии, не обладающие протеолитической активностью, желатин не разжижают.

41. Как изучают сахаролитические свойства бактерий?

Сахаролитические свойства изучаются на средах Гисса (среды пёстрого ряда). Среда Гисса представляет собой столбик полужидкого агара (засевается уколом), в состав которого входит определенный углевод и индикатор. Принцип действия среды Гисса аналогичен принципу действия вышеописанных сред, но так как среда полужидкая, то в положительном случае (ферментации данного углевода) она полностью меняет цвет. Конкретная световая гамма сред Гисса зависит от вводимого в их состав индикатора (индикатор Андреде обуславливает переход от синего, если углевод не утилизируется, к красному, при утилизации углевода; индикатор ВР – водный голубой и розоловая кислота – наоборот, от красного к синему и т.п.). Совокупность сред Гисса, используемых для засева бактериальной культуры, называется рядом Гисса или пестрым рядом.

1) Наиболее информативны при дифференциации энтеробактерий пять углеводов: лактоза, глюкоза, манит, мальтоза и сахароза. Пять сред Гисса с этими углеводами называют коротким рядом Гисса (во всех бактериологических лабораториях стран СНГ они располагаются в штативе именно в таком порядке, в котором они здесь перечислены, что позволяет легче визуализировать результат анализа).

2) В случае необходимости определяют способность изучаемой культуры ферментировать и большее количество субстратов (моносахаридов, полисахаридов, спиртов). Тогда говорят о длинном ряде Гисса.