2.2. Питательная среда для поддержания жизни Drosophila melanogaster

Для поддержания линии необходимо получать ряд последовательных поколений, сохраняя их гомозиготность. Существует опасность потерять линию вследствие генетического засорения культуры или появления пле- сени на поверхности питательной среды. Засорения можно избежать путём постоянного контроля и оценки чистоты линии при каждом пассаже мух, используемых для дальнейшего размножения. Образование плесени можно предупредить путём соблюдения правил асептики и антисептики в процес- се приготовления питательной среды. Если, несмотря на это плесень поя- вилась, от неё можно избавиться путём ряда пересева культуры дрозофилы на свежую питательную среду. Просмотр мух производится тогда, когда они находятся в наркотизи- рованном состоянии. Наркотизация производится в эфиризаторе (морил- ке). Наркотизированные мухи могут оставаться в состоянии наркоза около 5 минут. Наркотизация мух производится следующим образом Пробирка с находящимся в ней мухами осторожно встряхивается (дном о ладонь) до тех пор, пока все мухи не окажутся на дне пробирки. В этот момент открывается пробка эфиризатора и пробирка с мухами надвигается на него. Затем пробирка и эфиризатор переворачиваются так, что эфириза- тор находится внизу, и постукиванием (по его дну) мухи сгоняются на дно. В этот момент пробка эфиризатора закрывается, и экспериментатор ждёт, пока не перестанут двигаться все особи в пробирке. Тогда эфиризатор от- крывают и высыпают всех мух на матовое стекло для анализа. Если мухи начнут двигаться раньше, чем была произведена их оценка и анализ, их за- крывают часовым стеклом, под которое подводится небольшое количество ваты, смоченной эфиром. Мух можно пересыпать из пробирки в пробирку без наркотизации. В лабораторных условиях употребляются пробирки высотой 7,5 см и 3 см диаметром. В такую пробирку наливается среда, слой которой состав- ляет 1,0–1,5см. На это количество среды в пробирку помещают не более 5 самок и такое же количество самцов. При большем количестве самок воз- растает опасность перенаселения, в результате которого плодовитость мух снижается. Если линия обладает низкой жизнеспособностью и плодовито- стью, следует увеличить количество самцов в расчёте на одну самку. Во избежание возможности потери линии, каждую необходимо вести в не- скольких пробирках (не менее 5 – 20). Одна самка может отложить до 200 яиц, но, в течение первых 1-2 су- ток после выхода из куколки, самки откладывают очень мало яиц. Кладка яиц лучше всего происходит на среду, на которой достаточно хорошо про- 19 росли дрожжи; оптимальной считается среда не более 1-2 дней приготов- ления. Использование более «старой» среды не целесообразно. При проведении опытов по скрещиванию самцы находятся вместе с самками около 4–5 суток. После этого, во избежание перенаселения, роди- тельское поколение удаляется из пробирок.

Существуют различные рецепты питательных сред для дрозофилы (Н.Н. Медведев, 1966 и другие), основными компонентами которых явля- ются сахар, дрожжи, манная крупа, вода и агар-агар. В таблице 2.1.1 приводится один из наиболее распространённых и испытанных в условиях лабораторного практикума различных университе- тов рецептов питательной среды для дрозофилы в расчёте на любое коли- чество пробирок. В состав питательной среды могут добавляться другие компоненты: изюм, бананы.

Состав питательной среды для дрозофилы (в расчёте на определённое количеств пробирок)

Количество агар-агара может быть уменьшено или увеличено на 1–2 г на 100 пробирок в зависимости от его качества. Критерий: среда не должна разливаться и вытекать при работе с мухами.