- •6091501 «Харчові технології та інженерія»
- •Передмова
- •Правила роботи в мікробіологічній лабораторії.
- •Методи стерилізації
- •Порядок роботи з мікроскопом:
- •2. Методи приготування препаратів мікроорганізмів Техніка відбору культури для приготування препарату
- •Дослідження живих клітин мікроорганізмів методом «роздавленої краплі».
- •Фіксовані препарати мікроорганізмів
- •Цитохімічні методи дослідження мікроорганізмів
- •1. Забарвлення клітин мікроорганізмів за Грамом
- •2. Забарвлення спор у бактерій
- •3. Забарвлення включень клітин мікроорганізмів
- •Принципи складання поживних середовищ для культивування мікроорганізмів
- •Культивування мікроорганізмів
- •Техніка посіву.
- •Зберігання мікроорганізмів
- •Мікробіологічні методи дослідження різних об'єктів. Кількісний аналіз.
- •Кількісний облік мікроорганізмів шляхом підрахунку колоній (чашковий метод Коха)
- •Дослідження харчових продуктів.
- •1. Визначення мікробного числа грунту
- •2. Визначення мікробного числа повітря
- •3. Визначення мікробного числа води
- •4. Визначення мікробної забрудненості предметів побуту і рук
- •Визначення мікробного числа молока
- •Мікробіологічні методи дослідження різних об'єктів. Якісний аналіз.
- •1. Підрахунок колоній, що виросли на поживному середовищі в чашках Петрі і визначення мікробного числа
- •Вивчення культуральних властивостей колоній мікроорганізмів, які виросли в чашках Петрі на мпа
- •3. Встановлення чистоти і морфологічних властивостей бактерій, переважаючих в досліджуваному об'єкті.
- •4. Виділення чистої культури бактерій, переважаючих в досліджуваному об'єкті
- •Контрольні питання:
Дослідження харчових продуктів.
Порядок узяття проб, методи їх дослідження і нормативи якості регламентуються нормативно-технічною документацією.
Вихідним матеріалом для посівів продуктів твердої консистенції зазвичай є 10 % суспензія продукту. При дослідженні продукту твердої консистенції за допомогою годинникого скла і стерильного скальпеля беруть пробу продукту (1–15 г), переносять в стерильну ступку (або гомогенізатор) і розтерають в однорідну масу (можна додати стерильний кварцевий пісок). Отриману наважку кількісно і асептично переносять в колбу з 100 мл стерильного фізіологічного розчину (або стерильної водопроводної води) – це перше розведення (1:100).
Рідкі і напіврідкі продукти ретельно перемішують і в разі різкої кислої реакції підлужують 10%-ним стерильним розчином бікарбонату натрію до рН 7,2–7,4. Рідкий продукт або отриману суспензію твердого продукту використовують для приготування набору розведень, кількість яких залежно від характеру продукту і від передбачуваного обсіменіння.
Суспензію в колбі ретельно збовтують протягом 3–5 хв, стерильною піпеткою беруть 1 мл отриманої суспензії і переносять в пробірку з 9 мл стерильного розчину NaCl. Це друге розведення 1:103. Суспензію цього розведення перемішують за допомогою іншої стерильної піпетки, вбираючи і випускаючи з неї отриману суспензію. Цю процедуру повторюють 3–5 разів, що забезпечує перемішування суспензій і зменшує адсорбцію кліток на стінках піпетки. Потім піпеткою беруть 1 мл цієї суспензії і переносять її в іншу пробірку – це розведення 1:104. Таким же чином, готують і подальші розведення.
Загальну кількість бактерій в 1 г (мл) продукту враховують по зростанню колоній мезофільних мікроорганізмів на м’ясо-пептонному агарі.
► ХІД РОБОТИ: ◄
Робота виконується на двох заняттях.
Завдання на перше заняття:
Підготовка поживного середовища для кількісного обліку мікроорганізмів чашковим методом.
Засів поживного середовища | пробами грунту, повітря, води, молока, змивом з рук для визначення відповідного мікробного числа.
1. Визначення мікробного числа грунту
Порядок проведення роботи:
1. Наважку грунту (1 г), суспендують 2 хв в 100 мл стерильної водогінної води. Дають відстоятися частинкам грунту протягом 5-10 хв.
2. З надосадочної рідини відбирають 1 мл і переносять в пробірку, заповнену 9 мл стерильної водогінної води (розведення 1:103).
3. Струшують суспензію, відбирають 1 мл надосадочної рідини і переносять в іншу пробірку з 9 мл води (розведення 1:104).
4. Посів проводять з останньої пробірки: 0,05 мл суспензії переносять в чашку Петрі і заливають заздалегідь розплавленим поживним агаром. Акуратно перемішують. Дають застигнути агару.
5. Чашки перевертають догори дном і інкубують при 37°С 48 г. Підрахунок колоній, що виросли, проводиться на наступному занятті.
2. Визначення мікробного числа повітря
Методи мікробіологічного дослідження повітря підрозділяють на седиментаційні та аспіраційних. Найбільш простим є седиментаційний метод Коха: стерильні чашки Петрі з твердим поживним середовищем відкривають в місцях відбору проб повітря і витримують протягом певного часу (5–30 хв), після чого закривають і термостатують. За кількістю колоній, що виросли, підраховують мікробне число повітря, користуючись правилом Омелянського. Відповідно до цього правила вважають, що на поверхню поживного середовища площею 100 см2 протягом 5 хв осідає стільки мікроорганізмів, скільки їх міститься в 10 л повітря. Кожна мікробна клітина започатковує одну колонію. Знаючи кількість колоній, що виросли, і час експозиції, обчислюють кількість мікробів, які містяться в 1 м3 (1000 л) повітря.
Порядок проведення роботи:
Для визначення мікробної забрудненості повітря розплавляють на водяній бані стерильне середовище (МПА) і заливають в стерильну чашку. Чашку ставлять в місці відбору проб і відкривають на 10 хв. Час витримки відмічають на кришці чашки. Потім чашку з МПА термостатують при 37 °С 48 г, перевернувши догори дном. Підрахунок колоній ведуть на наступному занятті.