Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника

Забор фекалий производится стерильной стеклянной палочкой в стерильную взвешенную посуду, забирают теплые нативные фекалии, доставляют в лабораторию не позднее чем через 2 часа.

Исследуемый материал помещают в тиогликолевый буфер (способствующий сохранению как аэробной, так и анаэробной микрофлоры), затем готовят десятикратные разведения надосадочной жидкости в физиологическом растворе и высевают на элективные и дифференциально-диагностические среды, соответственно группам выделяемых микроорганизмов, как аэробов, так и анаэробов.

Посевы на факультативные анаэробы инкубируют в обычном термостате при 37⁰С.

Из выросших подозрительных колоний выделяют чистую культуру микроорганизма, проводят полное изучение всех свойств (культуральных, морфологических, биохимических, патогенных и др.), идентифицируют до вида, подвида, типа.

Идентификацию проводят как для выделенных патогенных и условно-патогенных возбудителей, так и представителей нормальной микрофлоры кишечника.

Одновременно на чашках подсчитывают количество выросших колоний определённого рода, вида и производят определение микроорганизмов в 1 г фекалий, при подсчёте учитывают посевную дозу и разведения в буфере, из которых сделан высев.

Полученные результаты сравнивают со справочными данными и делают заключение о состоянии микрофлоры кишечника.

Характеристика культуральных и морфологических свойств некоторых представителей нормальной микрофлоры кишечника человека

1. Энтерококки (род Enterococcus), аэробы.

В настоящее время определяют 2 вида энтерококков – 1) Ent. fecalis и 2) Ent. faecium.

Культивирование этих представителей микрофлоры кишечника проводится на энтерококкагаре.

Энтерококкагар – это ДДС для энтерококков; состав: панкреатический гидролизат казеина, дрожжевой экстракт, твин-80, глюкоза, калия фосфат однозамещенный, натрия карбонат, натрия азид, 2,3,5-трифенилтетразолия хлорид кристаллический фиолетовый, агар.

На этой среде различают 2 вида энтерококков по культуральным свойствам – первый вид даёт колонии мелкие, круглые, гладкие, бордового цвета с металлическим блеском; второй вид – мелкие, гладкие, круглые, сиренево-розовые со светлым ободком.

Морфологические свойства энтерококков: в мазке видны короткие цепочки Гр+ кокков, иногда вытянутой формы или единичные кокки.

2. Бифидобактерии (Bifidobacterium bifidum).

Это Гр+ палочки, строгие анаэробы. Занимают доминирующее положение в облигатной микрофлоре кишечника здорового человека, обладают высокой антагонистической активностью. Своё название получили из-за характерного разветвления на конце палочек – бифиркаций. Культивирование проводится на специальной питательной среде Блаурокка, в пробирках в анаэробных условиях.

Среда Блаурокка готовится следующим образом – к печёночному отвару добавляют пептон, поваренную соль, мясопептонный агар, лактозу, солянокислый цистеин, среду стерилизуют и регенерируют кипячением в течение 40-45 минут.

Культуральные свойства бифидобактерий: на среде Блаурокка, в толще среды, бифидобактерии дают характерный придонный рост в виде “точек с хвостиками” или маленьких комочков.

Морфологические свойства бифидобактерий: в мазке регистрируются характерные Гр+ палочки с разветвлёнными или утолщёнными концами, расположенные в виде римских пятёрок или скоплений, напоминающих китайские иероглифы.

3. Кишечные палочки (Escheriсhia coli).

Факультативные анаэробы. Прямые Гр- палочки с закругленными концами.

ДДС - среда Эндо (питательный агар, 1% лактоза и индикатор – основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия). Свежеприготовленная среда бесцветна или имеет бледно-розовую окраску.

Культуральные свойства: кишечная палочка лактозоположительная образует на среде Эндо колонии тёмно-малинового цвета с металлическим блеском; лактозоотрицательные бактерии образуют бледно-розовые колонии.

Морфологические свойства: Гр- палочки средних размеров, прямые, с закругленными концами, в мазке располагаются хаотично.