Стоматологический факультет

Модульная единица 1.2 «Экология микроорганизмов. Микробиология полости рта»

ЗАНЯТИЕ № 1.2.1

САНИТАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ. ЗНАЧЕНИЕ В СТОМАТОЛОГИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ

Цель занятия:

изучить микрофлору объектов окружающей среды (воды, почвы, воздуха) и методы их санитарно-микробиологической оценки.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Природные микробиоценозы. Экологические связи в микробиоценозах.

2. Санитарно-микробиологические исследования объектов внешней среды:

   • воздуха,

   • воды,

   • почвы,

   • пищевых продуктов.

3. Санитарно-микробиологические исследования рук, оборудования и спецодежды персонала.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

• проводить оценку санитарно–бактериологического состояния воздуха, воды,

смывов с рук, предметов, оборудования.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ:

• методами микробиологических исследований с использованием медико-технической аппаратуры;

• методами противоэпидемических и др. мероприятий, направленных на обеспечение безопасности жизни и здоровья людей.

Работа № 1. Санитарно-бактериологическая оценка микрофлоры воздуха

Цель: изучить методы оценки санитарно-бактериологического состояния воздуха.

Самостоятельная работа:

А) по готовым посевам сделать расчет ОМЧ по формуле Омелянского. Оценить чистоту воздуха по справочной таблице (см. теоретическую справку).

Посев воздуха методом седиментации (по Коху) на МПА для определения ОМЧ.

Результат:

Б) определить наличие СПМ (гемолитических стрептококков) на кровяном агаре.

Посев воздуха аспирационным методом (по Кротову) на кровяной агар для определения СПМ (см. теоретическую справку). Условие: V= 1000 дм³_.

Результат:

Заполнить таблицу.

Опыт	Метод	Результат	Оценка (чистый, грязный)
№ 1 № 2	Посев по Коху Посев по Коху	ОМЧ = количество гемолитических стрептококков =

Вывод:

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 2. Санитарно-бактериологическая оценка микрофлоры воды

Цель: изучить методы оценки санитарно-бактериологического состояния воды.

Самостоятельная работа: оценить санитарно-бактериологическое состояние питьевой воды по результатам посевов. Определить ОМЧ, титр БГКП, индекс БГКП.

Оценить чистоту воды (см. теоретическую справку).

А) посев воды глубинным методом на МПА для определения ОМЧ.

Результат:

Б) посев воды методом мембранных фильтров на среду Эндо для определения общего количества колиформных бактерий (БГКП, от лат. Escheriсhia coli - кишечная палочка) в 100 мл воды (см. теоретическую справку).

Результат:

Заполнить таблицу:

Опыт	метод	Результат	оценка (норма, выше нормы, ниже нормы)
№ 3 № 4	глубинный посев мембранных фильтров	ОМЧ = Количество колиформных бактерий

Вывод:

_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 3. Санитарно-бактериологическая оценка микрофлоры рук

Цель: изучить методы санитарно-бактериологического контроля в ЛПУ.

Самостоятельная работа:

А) сделать посев микрофлоры кожи рук методом отпечатков на МПА и среду Эндо. Записать в тетрадь номер своего посева Посевы изучить на следующем занятии.

Б) сделать посев микрофлоры с кожи рук стерильным ватным тампоном, смоченным в физ. растворе на среды ЖСА (для выявления золотистого стафилококка), Эндо (для выявления кишечной и синегнойной палочки) и Сабуро (для выявления грибов).

Подпись преподавателя ________________________________________________

Самостоятельная работа студента во внеурочное время:

Ответить на вопросы:

Как правильно провести санитарно-бактериологические исследования объектов окружающей среды_____________________________________________________________

_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Перечислите санитарно-показательные микроорганизмы

А) воздуха____________________________________________________________________

Б) воды______________________________________________________________________

В) почвы _____________________________________________________________________

Требования, предъявляемые к СПМ______________________________________________

___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Методы качественного и количественного изучения микро­флоры кожи рук _____________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Методы санитарно-бактериологического исследования объектов в лечебно-профилактических учреждениях __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Подпись преподавателя _______________________________________________

Теоретическая справка

В природе микроорганизмы заселяют практически любую среду (почва, вода, воздух) и распространены гораздо шире, чем другие живые существа. Благодаря разнообразию механизмов утилизации источников питания и энергии, а также выраженной адаптации к внешним воздействиям, микроорганизмы могут обитать там, где другие формы жизни не выживают. Естественные среды обитания большей части организмов - вода, почва и воздух. Число микроорганизмов, обитающих на растениях и в организмах животных, значительно меньше. Широкое распространение микроорганизмов связано с лёгкостью их распространения по воздуху и воде; в частности, поверхность и дно пресноводных и солёных водоёмов, а также несколько сантиметров верхнего слоя почвы изобилуют микроорганизмами, разрушающими органические вещества. Меньшее количество микроорганизмов колонизирует поверхность и некоторые внутренние полости животных (например, ЖКТ, верхние отделы дыхательных путей) и растений. В зонах обитания микроорганизмы образуют биоценозы - сложные ассоциации со специфическими и часто необычными взаимоотношениями. Каждое микробное сообщество в конкретном биоценозе образуют специфичные аутохтонные микроорганизмы [от греч. autos, свой, + chthon, страна, местность], то есть микробы, присущие конкретной области. В состав этих сообществ могут внедряться аллохтонные микробы [от греч. alios, чужой, + chthon, страна; буквально - чужестранец], (например, паразитические), обычно в них не встречающиеся. В природных биоценозах (почва, вода, воздух) выживают и размножаются лишь те микроорганизмы, которым благоприятствует окружающая среда; их рост прекращается, как только меняются условия окружающей среды. В природе большую часть бактерий поедают хищные простейшие, но часть клеток каждого вида выживает; при наступлении благоприятных условий они дают начало новым клонам микроорганизмов

Принципы проведения санитарно-микробиологических исследований

1. Правильный забор проб: а) с соблюдением стерильности; б) правил транспортировки, позволяющих избежать искажения результатов; в) быстрое проведение исследований или сохранение материала до анализа в холодильнике (не дольше 6-8 часов).

2. Серийность проведения анализов. Для получения адекватных результатов проводят забор серии проб из разных участков объекта. В лаборатории образцы смешивают, затем точно отмеряют необходимое количество материала (среднее по отношению к материалу в целом).

3. Повторность отбора проб, позволяющую получить более достоверную информацию по загрязнению объекта.

4. Применение только стандартных унифицированных методов исследования для получения сравнимых результатов.

1. Использование комплекса тестов.

5. Проведение оценки объектов по совокупности полученных результатов с учетом других показателей - органолептических, химических, физических.

Санитарное состояние объектов внешней среды определяют по двум основным показателям:

• общее микробное число (ОМЧ) – общее количество микроорганизмов в единице объема или массы исследуемой среды - расценивается как показатель интенсивности загрязнения окружающей среды органическими веществами;

• санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ) – косвенный показатель возможного присутствия патогенных микроорганизмов, которые попадают во внешнюю среду из организмов человека, животных и птиц. Для разных объектов внешней среды выбраны определенные виды микроорганизмов. В воде регистрируют БГКП – бактерии группы кишечных палочек (колиформные палочки), энтерококк, стафилококк; в почве – БГКП (колиформные палочки), клостридии перфрингенс, термофилы; в воздухе – золотистый стафилококк, гемолитический стрептококк; на предметах обихода - БГКП, золотистый стафилококк, энтерококк.

Содержание СПМ определяют: 1) прямым подсчетом с помощью специаль­ных камер или электронных счетчиков, предварительно гомогенизируя пробу и внося краситель (эритрозин). Методика позволяет отличить живые от погибших бактерий; 2) посевом на питательные среды.

СПМ должны удовлетворять следующим характеристикам: а) постоянно оби­тать в естественных полостях человека и животных и выделяться в окружающую среду; б) не должны размножаться вне организма, исключая пищевые продукты; в) длительность их выживания в окружающей среде должна быть не меньше, и даже несколько больше, чем у патогенов; г) устойчивость СПМ в окружающей среде должна быть аналогичной или превышать таковую у патогенных микроорганизмов; д) у СПМ не должно быть в окружающей среде «двойников»; е) микроб не должен изменяться в окружающей среде; ж) методы индикации и идентификации СПМ должны быть простыми.

к работе № 1

Микрофлора воздуха

Санитарно-микробиологическое состояние воздуха закрытых помещений оценивают по микробному числу - количеству особей, обнаруживаемых в 1 м³ воздуха, наличию санитарно-показательных бактерий - представителей микрофло­ры дыхательных путей - гемолитический стрептококк, золотистый стафилококк.

Нормативы: чистый воздух зимой: ОМЧ не более 4500, гемолитических стрептококков - до 35;

грязный воздух зимой: ОМЧ более 7000, гемолитических стрептококков – до 124.

Нормативные показатели микробной обсемененности воздуха в помеще­ниях больницы

Типы помещений	Нормы микробной обсемененности КОЕ/м3
	ОМЧ	Золотистый стафилококк
I. Операционные, предоперационные, родильные, стерильные зоны ЦСО, детские палаты роддомов, палаты для недоношенных и травмированных детей	не более 500	не допускается
II. Перевязочные комнаты стерилизации и пастеризации грудного молока, палаты и отделения иммуноослабленных больных, палаты реанимационных отделений, помещения нестерильных зон ЦСО, бактериологические и вирусологические лаборатории, станции переливания крови, фармацевтические цеха	не более 1000	не более 4
III. Палаты, кабинеты и другие помещения ЛПУ (не включенные в I и II категории)	не нормируется	не нормируется

Допустимые уровни микробной обсемененности воздуха некоторых помещений стационара

Место отбора проб	Время отбора проб	Результаты исследования
		ОМЧ (КОЕ/м3)	1 м3 воздуха
			На золотистый стафилококк	На грамотрицательные бактерии
Операционный блок	До работы После работы	Не более 100 1000	Отсутствие Отсутствие	Отсутствие Отсутствие
Реанимационное отделение (палаты)	Подготовленные к работе	Не более 1000	Не более 4	Отсутствие
Процедурные	До работы Во время работы	Не более 50 1000	Отсутствие Не более 1-2	Отсутствие Не более 1-2
Родильные комнаты		не более 1000	Отсутствие	Отсутствие
Палаты для недоношенных детей		не более 750	Отсутствие	Отсутствие

Выявление вирусов и патогенных бактерий из воздуха закрытых помещений проводят по эпидемиологическим показаниям при оценке эффективности обеззараживания воздуха, при контроле санитарно-микробиологического содержания больничных учреждений и т. д.

Методы оценки:

Седиментационный метод (по Коху) - оседание микробов под действием силы тяжести - является простым способом изучения микрофлоры воздуха. Он заключается в том, что чашки Петри со средой оставляют открытыми на определенное время (5-10 минут на общую обсемененность и не менее 40 минут на кокковую микрофлору), затем их закрывают, надписывают и выдерживают 24 часа в термостате и 24 часа при комнатной температуре. Количество выросших колоний соответствует степени загрязненности воздуха: по приблизительному подсчёту на площадь 100 см² в течение 5 минут оседает столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха.

Аспирационный метод (метод Кротова) - более точный количественный метод оп­ределения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью различных приборов (аппарат Кротова и др.).

Аппарат Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через узкую щель плексиглазовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благода­ря постоянному вращению чашки под входной щелью.

Существуют также другие приборы: ПОВ-1, бактериоуловители Речменского, Дьяконова, в которых воздух просасывается с помощью насосов, воздуходувок, аспираторов через материал, задерживающий бактериальный аэрозоль. В качестве такого материала используют стерильную воду, питательные среды, стерильный ватный тампон, пенистые или порошковые фильтры из растворимых материалов. Объем просасываемого воздуха измеряют с помощью газовых часов. После взятия пробы 1 мл жидкости засевают в чашку с мясо-пептонным агаром для определения общего числа бактерий. Через 24 ч инкубации в термостате при 37°С подсчитывают число колоний и делают пересчет на 1 м³ воздуха. С целью определения санитарно-показательных микроорганизмов и патогенных микробов делают посевы на различные элективные среды.

Аппарат Кротова для взятия Устройство автоматического

проб воздуха отбора проб воздуха – ПУ-1Б

После инкубации посева в термостате проводят расчет микробного числа по формуле:

х= ^{а х 1000}

^V

х – количество микробов в м³ воздуха;

а - количество выросших на чашке колоний;

V - объём пропущенного через прибор воздуха, дм³ ;

1000 - объем воздуха, дм³ .

Оценка санитарно-бактериологического состояния воздуха по общему микробному числу на МПА методом Коха проводится по формуле Омелянского:

х= ^{а х 100 х 5 х 1000}

^{В х 10 х Т}

х – количество микробов в м³ воздуха;

а – количество колоний в чашке;

Т – время экспозиции, мин;

В – площадь чашки Петри в см² (78.5 см²);

100 – площадь (см²), на которую происходило оседание микробов;

1000 – объём воздуха в литрах;

5 – время по расчету Омелянского, мин;

10 – объём воздуха (л), из которого происходило оседание микробов.

к работе № 2