В зависимости от консистенции питательные среды могут быть:

1 - жидкими;

2 - полужидкими;

3 - плотными.

Плотность среды достигается добавлением агар-агара.

• Агар-агар – полисахарид, получаемый из водорослей. Он плавится при температуре 100°С, но при охлаждении застывает при температуре 45-50°С. Агар добавляют в концентрации 0,5% – для полужидких сред и 1,5-2% – для создания плотных сред.

Назначение полужидких питательных сред – хранение музейных чистых культур микроорганизмов, а также для изучения их биохимических свойств (например, выделение газа), определение подвижности м/о.

Назначение плотных питательных сред - получение чистых культур микроорганизмов, а также сообществ микроорганизмов (колоний, бактериальных газонов), имеющих макроскопические размеры, для изучения их культуральных свойств.

В практике используют среды, различные по происхождению:

• натуральные питательные среды представляют собой неизмененные нативные (природные) компоненты (сыворотка крови, яичный белок и др.).

• полусинтетические среды включают наряду с химически чистыми соединениями переработанные нативные компоненты неопределенного состава – гидролизаты мяса, дрожжевой экстракт и т.д.

• синтетическими питательными средами называют такие, которые состоят из растворов химически чистых соединений в точно установленных дозировках. Преимуществом синтетических сред являются их строго постоянный состав и воспроизводимость.

Приготовление питательных сред. Основой большинства питательных сред является мясная вода. Ее готовят из свежей нежирной говядины или конины. Мясо освобождают от фасций, связок, сухожилий, удаляют жир, нарезают мелкими кусочками или пропускают через мясорубку. Заливают двойным количеством воды и оставляют на 18-24 ч в прохладном месте. Затем фарш отжимают, а мясной экстракт кипятят на слабом огне в течение 40-60 мин. Фильтруют и доливают водой до первоначального объема. Разливают по колбам и стерилизуют в течение 30 мин при температуре 120^оС.

Мясо-пептонный бульон (МПБ) готовят на мясной воде. К 1 л мясной воды добавляют 1% пептона, 0,5%NaCl. Кипятят до растворения пептона, помешивая. Устанавливают рН 7,2-7,6. рН среды доводят подщелачивая 10% раствором КОН или NаOH. После бульон кипятят в течение 5-10 мин и фильтруют через увлажненный дистиллированной водой бумажный фильтр. Среду разливают по пробиркам и стерилизуют в течение 20 мин при t=120^оС.

Мясо-пептонный агар (МПА). К МПБ добавляют 1,5-2% агар-агара. Агар-агар плавят в бульоне, доводя до кипения, устанавливают рН, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают по флаконам в горячем виде и автоклавируют при 1 атм. 30 мин.

В настоящее время среды готовят из сухих питательных смесей, содержащих остатки продуктов рыбного, костно-мясного происхождения, гидролизаты кормовых дрожжей в соответствии с инструкцией.

По целевому назначению питательные среды делят на основные, элективные (селективные), дифференциально-диагностические, транспортные и консервирующие.

К основным относятся среды, применяемые для выращивания многих бактерий. Это пептические гидролизаты мясных, рыбных продуктов, крови животных или казеина, из которых готовят жидкую среду – питательный бульон (МПБ, бульон Хоттингера) и плотную – питательный агар (МПА, ГРМ-агар). Такие среды также служат основой для приготовления сложных питательных сред – сахарных, кровяных и др., удовлетворяющих пищевые потребности патогенных бактерий.

Элективные питательные среды предназначены для избирательного выделения и накопления микроорганизмов определенного вида (или определенной группы) из материалов, содержащих разнообразную постороннюю микрофлору. При создании элективных питательных сред исходят из биологических особенностей, которые отличают данные микробы от боль­шинства других. Например, 1% пептонная вода, рН 8,0 для селекции холерного вибриона (щелочная реакция среды не препятствует росту холерных вибрионов, но тормозит рост других микроорганизмов);

желточно-солевой агар (ЖСА) содержит повышенные концентрации хлорида натрия (8 – 10%), которые задерживают рост большинства микробов, не препятствуя при этом размножению стафилококков (для большинства микробов, включая патогенные для человека, концентрация соли 3% , лимитирует рост клеток).

Дифференциально-диагностические питательные среды применяют для различения (дифференциации) отдельных видов (или групп) микробов. Принцип составления этих сред основан на различиях в биохимической активности бактерий разных видов вследствие неодинакового набора ферментов (среды Гисса, среда Эндо, Висмут-сульфит агар, Плоскерева, Левина, Олькеницкого, Клиглера, Расселя и др.).

В состав дифференциально-диагностической среды входят следующие компоненты: а) основная питательная среда, обеспечивающая размножение бактерий, б) определенный углевод (например, лактоза), способность использовать который является диагностическим признаком для данного вида, в) цветной индикатор (например, индикатор Андреде), изменение цвета которого свидетельствует о сдвиге рН среды в кислую сторону вследствие ферментации соответствующего углевода. Дифференциально-диагностические среды широко используют в лабораторных микробиологических диагностических исследованиях для дифференциации и идентификации бактерий.

Транспортные и консервирующие среды применяют для времен­ного сохранения микроорганизмов после взятия исследуемого ма­териала и при транспортировке его в лабораторию. Обычно эти среды содержат только буферные и солевые растворы (иногда агар-агар, активированный уголь, твин-80 - для придания полужид­кой консистенции и нейтрализации токсических воздействий); они не предназначены для культивирования микробов (глицериновая смесь для бактерий семейства Enterobacteriaceae).