Переливание компонентов крови Определение группы крови, Rh-фактора, совместимость крови, 9-капельная проба

Определение группы крови по системе АВО

Методика взятия крови.

Обычно кровь берут специальными одноразовыми копьями или иглами, нанося колотую рану в область подушечки ногтевой фаланги IV пальца левой кисти. У детей можно брать кровь из мочки уха, а у грудных детей – из пятки. Выступающая из ранки капля крови снимается чистым предметным стеклом или стеклянной палочкой и наносится на плоскость, на которой определяется группа крови. Взятие крови для определения группы возможно также при венепункции.

В настоящее время используют три способа определения группы крови по системе АВО:

1. с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток;

2. с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов (перёкрестный метод);

3. с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и

анти-В).

При плановом исследовании группу крови определяют в стационаре с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток или цоликлонов. Затем кровь направляется в серологическую лабораторию для перепроверки группы крови перекрёстным методом. Данные о группе крови, полученные в лаборатории должны совпадать с данными, полученными врачом в стационаре. Если результаты исследований не совпадают, оба исследования нужно повторить.

При определении группы крови в экстренном порядке дежурный врач определяет группу крови сам, а перепроверку выполняют в лаборатории на следующий день.

Определение групп крови с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток

1. Маркировка белого планшета с обозначением сывороток O(I), A(II), B(III) и AB(IY) групп и фамилии пациента. После этого на неё под соответствующие обозначения наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки в объеме 0,1 мл (капля около 1 см в диаметре) по две серии каждой из групп.

2. Исследуемую кровь забирают уголком предметного стекла или стеклянной палочкой, переносят в каждую каплю сыворотки и перемешивают. При этом количество крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки.

3. Тарелку периодически покачивают и наблюдают за агглютинацией в течение 5 мин.

4. Добавляют по одной капле физиологического раствора в те капли, где произошла агглютинация, размешивают и оценивают результат реакции.

При положительной реакции появляются мелкие красные зернышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. При этом сыворотка обесцвечивается. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, в ней нет агглютинатов.

Оценку результатов проводят по наличию или отсутствию агглютинации с соответствующими сыворотками (таб 1).

Таб. 1. Оценка результатов определения группы крови со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками

При агглютинации с сыворотками всех трех групп, для исключения неспецифической агглютинации (панагглютинации) необходимо провести дополнительное контрольное исследование крови со стандартной сывороткой группы AB(IY), не содержащей агглютининов. При отсутствии агглютинации в этой капле и при наличии агглютинации со стандартными сыворотками групп O(I), A(II), B(III) кровь можно отнести к группе AB(IY).

Если исследуемая кровь содержит слабый агглютиноген А₂, то реакция агглютинации с сыворотками групп O(I) и B(III) наступает позже (на 3-4 мин). Чтобы избежать ошибки, оценивать группу крови необходимо через 5 мин.

Определение групп крови перекрёстным способом

Этот способ чаще используют в серологических лабораториях. Суть метода состоит в определении наличия или отсутствия в исследуемой крови агглютиногенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, а также агглютининов α и β с помощью стандартных эритроцитов. Реакцию со стандартными сыворотками проводят описанным выше способом.

Для проведения реакции со стандартными эритроцитами необходимы стандартные эритроциты O(I), A(II), B(III) групп.

Методика проведения реакции

1. Кровь для исследования берут из вены в сухую пробирку, центрифугируют или отстаивают в течение 20-30 мин для получения сыворотки.

2. На маркированную тарелку наносят три большие капли (0,1 мл) сыворотки исследуемой из пробирки, а затем в эти капли добавляют по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов.

3. Тарелку покачивают и наблюдают за агглютинацией в течение 5 мин. Затем в капли с агглютинацией добавляют физиологический раствор и оценивают результат.

Оценивают данные, полученные при обеих реакциях (таб. 2).

Таб. 2. Оценка результатов определения группы крови перекрёстным способом

+ агглютинация; ─ агглютинация отсутствует.

Результат перекрёстного способа считают достоверным, если при оценке результатов реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами группы исследуемой крови совпадают.

Определение групп крови моноклональными антителами

Для определения группы крови используют моноклональные антитела, для получения которых применяют гибридомную биотехнологию. Разработаны стандартные реагенты — моноклональные антитела: цоликлоны анти-А и анти-В, применяемые для определения агглютиногенов эритроцитов. Цоликлоны используют в виде лиофилизированного порошка красного (анти-А) или синего (анти-В) цвета, порошок разводят изотоническим раствором натрия хлорида непос­редственно перед исследованием.

Техника проведения реакции

Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А и анти-В. Рядом с ними наносят по одной маленькой капле (0,01 мл) исследуемой крови. После перемешивания составных частей за реакцией агглютинации наблюдают в течение 2-3 мин.

Оценка результатов проводится по наличию или отсутствию агглютинации (таб 3) При наличие агглютинации с цоликлонами анти-А и анти-В проводят контрольное исследование с физиологическим раствором. Реакция должна быть отрицательная.

Таб. 3. Схема оценки результатов определения групп крови с помощью моноклональных антител (цоликлоны анти-А и анти-В)

+ агглютинация; ─ агглютинация отсутствует.