Качественные пробы.

Принцип: качественные пробы на белок основаны на коагуляции его химическими реактивами (кислотами) или нагреванием. При наличии белка появляется помутнение или выпадает хлопьевидный осадок.

Проба с 20% р-ром сульфосалициловой кислоты.

Реактив: 20% раствор сульфосалициловой кислоты (хранить во флаконе из темного стекла в темном месте!).

Приготовление реактива: 20 г кислоты + 80 мл дистиллированной воды.

Ход определения:

К 2-3 мл прозрачной мочи добавляют 2-3 капли 20% р-ра сульфосалициловой к-ты - опыт.

В отдельную пробирку наливают 2-3 мл профильтрованной мочи - контроль.

Учет результатов:

Опытную пробирку сравнивают с контрольной на черном фоне.

Наличие помутнения – положительная реакция.

Необходимо подогреть пробирку – если истинный белок, муть усилится, если ложный (соли, слизь) – исчезнет.

Недостатки пробы:

• проба c сульфосалициловой кислотой дает положительный результат не только с сывороточным белком, но и с альбумозой и другими белками (при нагревании муть от альбумозы растворяется, а от белка усиливается);

• избыток сульфосалициловой кислоты может привести к растворению белка – проба из положительной становится отрицательной

Кольцевая проба Геллера.

Реактивы: 50% р-р азотной кислоты или реактив Ларионовой.

Приготовление реактива: мерным цилиндром отмеривают 46,7 мл дист. воды + 53, 3 мл азотной кислоты с относительной плотностью 1,4.

Приготовление реактива Ларионовой: готовят насыщенный раствор хлорида натрия (20 – 30 г соли растворяют в 100 мл воды при подогревании, дают отстояться до охлаждения). Надосадочную жидкость сливают, фильтруют. К 99 мл фильтрата добавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты.

Вместо азотной кислоты можно добавить 2 мл концентрированной соляной кислоты.

Ход определения:

В пробирку наливаем 1 мл азотной кислоты или реактива Ларионовой и аккуратно пипеткой по стенке наслаиваем 1 мл профильтрованной мочи, стараясь не взболтать жидкость в пробирке.

Учет результатов:

На черном фоне. Чувствительность пробы 0,033 г/л. При таком содержании белка на границе жидкостей появляется белое нитевидное кольцо между 2-й и 3-й минутами.

Недостатки пробы:

• постановка пробы является достаточно трудоемкой и длительной процедурой, требующей концентрированной азотной кислоты;

• иногда при постановке пробы появляется пигментное (коричневатое) кольцо от окисления урохрома азотной кислотой, которое может мешать определению белка;

• в моче, содержащей ураты, иногда появляется беловатое кольцо выше границы жидкостей (уратное кольцо, в отличие от белкового, растворяется при легком нагревании);

• проба выдает ложноположительные результаты при высокой концентрации мочевой кислоты, мочевины и т. д.

Более четкий результат пробы Геллера получается, если использовать реактив Ларионовой. Проба с реактивом Ларионовой имеет ряд преимуществ:

• на границе наслоения не бывает пигментных колец, которые часто образуются при наслаивании мочи на азотную кислоту и мешают распознаванию белкового кольца;

• кольца получаются более четкие, чем с азотной кислотой;

• экономится азотная кислота;

• реактив более удобен в работе: попадая на ткань, не прожигает ее.