3.4 Посев микроорганизмов

Культура микроорганизмов, отобранная петлёй с поверхности агаризованной среды или пипеткой из жидкой среды, может служить посевным материалом для засева агаризованной или жидкой питательной среды.

1. Посев микроорганизмов петлёй

С помощью микробиологической петли микроорганизмы можно посеять на поверхность агаризованной среды в пробирке или чашке Петри или в жидкую питательную среду.

3.4.1.1 Посев микроорганизмов петлёй на скошенный агар

1. Отобрать культуру петлёй (п.3.2 или 3.3) и держать рядом с пламенем горелки (но не в пламени!).

2. Взять в другую руку пробирку со скошенным агаром так, чтобы хорошо была видна поверхность среды.

3. Открыть пробирку и обжечь горлышко.

4. Ввести петлю с микроорганизмами в пробирку и провести снизу вверх зигзагообразную или прямую черту – штрих, не повреждая поверхность питательной среды.

5. Вынуть петлю с остатками микроорганизмов из пробирки, обжечь пробку и закрыть ею пробирку.

6. Оставшиеся на петле клетки сжечь на горелке (п. 3.2).

В случае посева в жидкую среду порядок работы такой же, только петлю с культурой погружают непосредственно в среду.

3.4.1.2 Посев микроорганизмов петлёй в чашку Петри

Часто выращивание микроорганизмов осуществляют на поверхности агаризованной питательной среды в чашках Петри.

1. Отобрать культуру петлёй (п.3.2 или 3.3) и держать рядом с пламенем горелки (но не в пламени!).

2. Другой рукой приоткрыть чашку Петри около пламени горелки.

3. Посеять культуру петлёй, проводя штрихи или зигзаги по поверхности среды, не повреждая её.

4. Закрыть чашку Петри.

5. Оставшиеся на петле клетки сжечь на горелке (п. 3.2).

2. Посев микроорганизмов пипеткой

Микроорганизмы из жидкой среды на чашку Петри можно перенести с помощью стерильной пипетки, а затем каплю жидкой культуры распределить по поверхности среды стерильным шпателем.

Засев жидкой среды микроорганизмами, выращенными на жидкой же питательной среде, осуществляют с помощью пипетки. Порядок работы при этом аналогичен описанному выше.

4 Оформление результатов работы

1. Произвести посев культуры, выращенной на скошенной агаризованной среде в пробирке, петлёй:

а) в пробирку на скошенный питательный агар;

б) в пробирку с жидкой средой;

в) на чашку Петри.

2. Посеять культуру, выращенную в жидкой среде, с помощью петли:

а) в пробирку с жидкой средой;

б) в пробирку на скошенный агар;

в) на чашку Петри.

3. Посеять культуру, выращенную в жидкой среде, с помощью пипетки:

а) в пробирку с жидкой средой;

б) на чашку Петри.

5 Контрольные вопросы

1. Какие инструменты используют при посевах микроорганизмов и при приготовлении препаратов?

2. Как стерилизуют петлю (иглу)?

3. В каких случаях используется стерильная пипетка?

4. Чем обусловлены правила работы с чистыми культурами микроорганизмов?

5. Сравните порядок работы при отборе культуры с различных сред и посеве микроорганизмов. Какие этапы являются общими для всех операций?

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА 3.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРЕПАРТОВ МИКРООРГАНИЗМОВ

1 Цель работы

Научиться готовить прижизненные и фиксированные препараты микроорганизмов.

2 Приборы и материалы

• Микроскоп

• Предметные и покровные стекла,

• стекла с лункой,

• метиленовый синий (1: 10),

• основной фуксин,

• вазелин,

• смесь спирта и эфира (1:1).

Культуры дрожжей: p.Candida, p. Saccharomyces.

3 Содержание работы

3.1 Виды препаратов микроорганизмов

Для изучения микроорганизмов с помощью микроскопа используют препараты живых (прижизненные препараты) и убитых (фиксированных) клеток (фиксированные препараты).

Все виды препаратов готовят на предметных стеклах, толщиной не более 1,4 мм. Толщина покровных стекол не должна превышать 0,17 мм. Более толстые стекла резко снижают четкость изображения.

Поверхность предметного стекла должна быть тщательно очищена и обезжирена, чтобы капля жидкости равномерно расплывалась по стеклу. Лучший способ обезжиривания - обработка стекол хромовой смесью с последующим ополаскиванием водой и спиртом. Хорошего обезжиривания можно достигнуть протиранием вымытых стекол ватой, смоченной эфиром, а также обжиганием поверхности стекол в пламени горелки. В повседневной работе вполне достаточно тщательно натереть сухое стекло мылом и затем стереть мыло чистой хлопчатобумажной салфеткой. Хранят чистые обезжиренные стекла в сухом состоянии или в этаноле. Покровные стекла должны быть вымыты и высушены.