Определение редуктазы с помощью резазурина

Эта проба служит для определения количества бактерий в молоке (по ГОСТ 9225–84) спустя 2 часа после его выдаивания.

Для приготовления раствора резазурина 100 мг резазурина растворяют в 200 мл прокипяченной, охлажденной до (25 ± 2) °С дистиллированной воде. Срок хранения основного раствора в склянках из темного стекла не более 30 суток при температуре от 8 до 10 °С. Из основного раствора готовят рабочий. Для этого основной раствор разбавляют прокипяченной охлажденной дистиллированной водой при температуре (25 ± 2) °С в соотношении 1 : 2,5 (к 10 мл основного раствора прибавить 25 мл воды). Содержание резазурина в рабочем растворе 0,014 %. Срок хранения рабочего раствора в холодильнике в склянке из темного стекла не более 3 суток.

Ход анализа. В стерильную пробирку отмерить пипеткой 1 мл рабочего раствора резазурина и 10 мл молока. Закрыть пробирку резиновой стерильной пробкой, медленно переворачивая ее 3 раза, размешать содержимое и поставить в водяную баню при температуре (37 ± )1 °С. Уровень воды в бане после погружения пробирки должен быть несколько выше уровня жидкости в пробирке (предохранять пробирки от прямых солнечных лучей). Время погружения пробирки в водяную баню считать началом анализа. Через 1 час и через 1,5 часа, не встряхивая и не переворачивая пробирку, установить изменение окраски. Пользуясь таблицей 7, определить качество молока и установить его класс. Появление окрашивания молока при вынимании пробирки из водяной бани и при встряхивании не учитывают.

После проведения всех указанных анализов студент должен сделать соответствующие выводы и представить отчет о проделанной работе.

Таблица 7

Определение числа бактерий в молоке и установление его класса

Продолжительность изменения цвета	Окраска молока	Число бактерий в 1 мл молока	Класс молока
Через 1,5 часа	От серо-сиреневой до сиреневой со слабым серым оттенком	Менее 300 тыс.	Высший
Через 1 час	Серо-сиреневая до сиреневой со слабо серым оттенком	От 300 тыс. до 500 тыс.	I
Через 1 час	Сиреневая с розовым оттенком или ярко-розовая	От 500 тыс. до 4 млн.	II
Через 20 мин	Бледно-розовая или белая	От 4 млн. до 20 млн.	III

Контрольные вопросы

1. Сущность метода определения жира в молоке.

2. Методика определения жира в молоке кислотным методом.

3. Факторы, влияющие на точность определения жира в молоке.

4. Методика определения жира бесцентрифужным методом (по Г. Инихову).

5. Методика определения бактериальной обсемененности с помощью метиленового голубого.

6. Цель проведения редуктазной пробы?

7. Ускоренная редуктазная проба и с помощью резазурина.

Список литературы

1. ГОСТ 5867-90. Молоко и молочные продукты. Методы определения жира. [Текст].- Введ. 1991-07-01.-М.:Изд-во стандартов, 1990.-13 с.

2. ГОСТ Р 53430-2009. Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического. [Текст].- Введ. 2011-01-01.-М.:Изд-во стандартов, 2009.-24 с.

3. Инихов, Г. С., Брио Н. П. Методы анализа молока и молочных продуктов/ Г.С.Инихов, Н.П.Брио. — М.: Пищевая промышленность, 1971. — 423 с.