Тема 4 получение почечной культуры клеток морской свинки методом теплой трипсинизации Цель занятия:

• Получить почечную культуру клеток морской свинки методом теплой трипсинизации

Вопросы и задания для самоподготовки

1. Биогеохимические круговороты

2. Методы оценки геохимической деятельности микроорганизмов

3. Круговорот серы

4. Круговорот углерода

5. Парниковые газы

6. Экологические стратегии и биотические связи у микроорганизмов

7. Биотические связи с участием микроорганизмов

8. Симбиотические отношения между микроорганизмами.

9. Эволюционная роль симбиотических взаимоотношений с участием микроорганизмов

10. Значение коэволюции в симбиозах микроорганизмов с макроор­ганизмами

Оборудование и материалы

1. Микроскоп биологический МБР-3 или аналогичный

2. Спиртовка.

3. Термостат.

4. Колбы, пенициллиновые флаконы.

5. Физиологический раствор.

6. Материалы (предметные стекла для микропрепаратов; пробирки стеклянные, вместимостью 15 мл; пипетки, вместимостью 1,0 и 5,0 мл с делениями).

Общие сведения

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК В ВИРУСОЛОГИ

Значение культуры клеток и тканей в диагностических виру­сологических исследованиях. Внедрение метода культивирова­ния клеток и тканей в вирусологию и диагностику вирусных болезней позволило не только познать глубже сущность виру­сов, но и расшифровать этиологию ряда болезней, создать вы­сокоэффективные противовирусные вакцины (живые и убитые) для профилактики их. Открытие Дж. Эндерсом и сотрудника­ми способности вируса полиомиелита размножаться в культуре клеток (фибробласты эмбриона человека) послужило началом широкого применения этой системы в вирусологии, а открытие цитопатогенного действия вируса западного лошадиного энце­фаломиелита способствовало практическому использованию его в диагностике инфекции.

Метод культуры клеток заключается в том, что от убитого животного как можно быстрее после клинической смерти берут ткань или клетки и до наступления биологической смерти по­мещают их в соответствующие питательные среды и условия, обеспечивающие поддержание процессов жизнедеятельности. Наряду с множеством других преимуществ метод культуры тканей относительно дешев и поэтому может быть использо­ван массово.

Разработка метода дезагрегации тканей ферментативным путем, усовершенствование методов культивирования клеток и состава питательных сред создали основы для широкого при­менения культуры клеток в изучении общих и частных проблем вирусологии, и в частности разработки методов лабораторной диагностики вирусных болезней. Успехи техники культивирова­ния культуры клеток позволили наблюдать не только видимые изменения в инфицированных культурах, но и привели к от­крытию гемадсорбирующих вирусов.

В настоящее время число вирусов, выделяемых с помощью однослойных культур, резко уменьшилось по сравнению с ко­личеством вирусов, открытых сразу же после получения вируса полиомиелита. Оказалось, что некоторые вирусы трудно изо­лировать в однослойных культурах. В таких случаях требуются более изощренные лабораторные методы, максимально при­ближающие условия культивирования вируса к естественным, например использование культур органов. Однако одно­слойные культуры клеток не утратили своего значения.

Чрезвычайно важную роль во внедрении техники культуры ткани в широкую вирусологическую практику сыграло исполь­зование в питательных средах антибиотиков и антимикотических препаратов. Это позволило проводить исследования большого масштаба без чрезвычайно трудоемкой работы по предупреждению микробной контаминации культур. Другими важными усовершенствованиями техники тканевых культур явились употребление веществ, позволяющих диспергировать клетки и производить перевивку их взвесью, получение одно­слойных культур клеток и введение в практику синтетических культуралъных сред постоянного химического состава, сво­бодных от ингибиторов, действующих на вирус. Разработка и применение простых методов культивирования фрагментов органов и тканей для выделения и выращивания вирусов также внесли большой вклад в изучение этиологии и патогенеза ви­русных инфекций.

Культура тканей позволяет получить достаточно чистый вирус (с небольшим количеством чужеродных антигенов), что очень важно при изготовлении сывороток и антигенов для серо­логических реакций. С помощью серийных пассажей вирусов в культурах клеток удается получать аттенуированные (апатогенные) штаммы, пригодные для производства вакцин.

В настоящее время в практической вирусологии широко используются не только первично-трипсинизированные, но и перевиваемые, и диплоидные клетки.