Питательны среды сбалансированные солевые растворы, используемые для культивирования клеток

При кратковременном культивировании клеток основную роль играют такие факторы, как осмотическое давление, концентра­ция ионов водорода и других неорганических ионов, характер углевода и состав атмосферы. Растворы, в которых эти фак­торы сочетаются определенной комбинации, называются сбалансированными солевыми растворами. Все сбалансированные солевые растворы являются производными физиологического раствора, разработанного Рингером. В состав его входят три катиона: калии, кальций и натрий. Первым сбалансированным раствором, предназначенным для клеток млекопитающих, является раствор Тироде. В настоящее время широко приме­няют растворы Хенкса и Эрла. Раствор Эрла обладает свой­ствами сильного буфера благодаря высокой концентрации би­карбоната натрия. Раствор Хенкса составлен таким образом, что он уравновешивается воздухом, а не СО₂. Для орошения и промывания клеток используют фосфатный буферный рас­твор Дульбекко и Фогта. Этот раствор также приме­няют в качестве основы раствора трипсина.

Естественные среды. В качестве естественных питательных сред для культур клеток используют аллантоисную или амниотическую жидкость крупного рогатого скота с добавлением нормальной лошадиной сыворотки или эмбрионального эк­стракта, гомологичную сыворотку крови, куриную плазму и куриный эмбриональный экстракт. Наиболее распростра­ненный природный ингредиент питательных сред — гидролизат лактальбумина, получаемый при ферментативном гидролизе белка молока. Среду, предложенную Мельником для культиви­рования клеток почки обезьяны и состоящую из раствора Эрла, гидролизата лактальбумина и сыворотки, с успехом приме­няют для культивирования первичных культур многих тканей.

Для обогащения сред с частично определенным химиче­ским составом часто используют другой продукт переварива­ния белка — триптозо-фосфатный бульон.

Среды из химически определенных веществ с добавлением естественных компонентов. Наиболее широко используемой средой такого типа является среда Игла, в состав которой входяг раствор Эрла, тринадцать ампнокнслог, семь витаминов и 5-10% сыворотки крупного рогатого скота для культур кле­ток или сыворотка другого происхождения.

Среда 199 широко и успешно применяется как поддержи­вающая среда, а при добавлении сыворотки - как ростовая среда. Эта чрезвычайно сложная среда содержит почти все аминокислоты, витамины, некоторые предшественники нуклеи­новых кислот, дополнительные факторы роста, источники ли-пндон и раствор Эрла с добавлением азотнокислого железа. Позднее среду 199 модифицировали, и она получила название среда 858. Эта среда значительно эффективнее среды 199. Бла­годаря увеличенному количеству восстановителей (гидрохлори­стого 1-цистеина, аскорбиновой кислоты и глютатиона) ее окислительный потенциал приближен к физиологическому уровню.

Поддерживающие среды предназначены для сохранения клеточных культур в хорошем состоянии в течение нескольких дней, недель с тем, чтобы свойства клеток оставались неиз­менными. Рост клеток должен быть максимально снижен, одна­ко чувствительность к вирусам должна полностью сохраняться. Во многих случаях для этого достаточно снизить концентра­цию сыворотки в среде или исключить сыворотку полностью.