Техника приготовления препаратов-мазков, их фиксация и окраска

1. Приготовление мазка

1) с жидкой питательной среды 2) с плотной питательной среды

культуру берут петлей и каплю наносят на предметное стекло наносят

непосредственно на стекло (без NaCl) небольшую каплю NaCl, в которой

эмульгируют исследуемый материал

и распределяют на площади около 2 см²

2. Высушивание

на воздухе высоко над пламенем спиртовки

мазком вверх

3. Фиксация

в процессе фиксации микробные клетки погибают, этим достигается безопасность работы с ними; убитые микроорганизмы лучше воспринимают красители, чем живые; в фиксированном мазке клетки прикрепляются к стеклу и не смываются при последующей обработке.

Методы

физический химический

- над пламенем спиртовки мазком - более щадящий по сравнению

вверх (3 раза круговыми движениями) с физическим: мазок погружают

в фиксатор (этанол, ацетон, формалин

и др.) на определенное время

4. Окраска

Методы

простые сложные

(ориентировочные) (дифференцирующие)

1) окрашивают одним красителем 1) используют несколько красителей

анилинового ряда - основным или (основная и вспомогательные краски,

кислым: - кислый фуксин обесцвечивающие жидкости (этанол)

- эозин - метод Грама

- метиленовый синий - Нейссера

- генциановый фиолетовый - Гинса-Бурри

- Ожешко

2) используются для изучения 2) используются для определения

морфологии микроорганизмов морфологии, химического состава,

структуры микробных клеток

Краситель наливают на поверхность мазка на определенное время, затем мазок промывают до тех пор, пока струи воды не станут бесцветными, осторожно высушивают фильтровальной бумагой. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения абсолютно прозрачно, а клетки микробов интенсивно окрашены.

Методика окраски по Граму:

1 этап. Используется основная краска генциановый фиолетовый, затем раствор Люголя. Образуется прочное комплексное соединение «генциановый фиолетовый + йод». Все микробы окрашиваются в сине-фиолетовый цвет.

2 Этап. Обработка этанолом (дифференциация)

одни микробы другие микробы

сохраняют комплекс генциановый теряют комплекс генциановый

фиолетовый + йод, не обесцвечиваются фиолетовый + йод, обесцвечиваются.