О тветить на вопросы:
а) что изображено на схеме?
б) охарактеризовать все фазы процесса.
1 2 3 4
______________________________________________________________________________
Подпись преподавателя______________________________________________________________
Теоретическая справка
к работе № 1
Основные принципы выделения и идентификации чистых культур бактерий
Бактериологический метод является основным при диагностике инфекционных заболеваний. Его сущность заключается в определении вида возбудителя инфекции, следовательно, можно поставить этиологический (окончательный) диагноз. Основной недостаток метода – длительность исследования – от 3-х до 5-ти суток, а в отдельных случаях и более.
Успех проведения бактериологического метода во многом зависит от предварительного этапа, включающего забор исследуемого материала и его транспортировку, оформление направления в бактериологическую лабораторию. При этом необходимо соблюдать ряд правил:
Забор исследуемого материала следует провести до начала антибактериальной терапии или через 8-10 часов после введения последней дозы антибиотика. Чтобы избежать загрязнения пробы микрофлорой окружающей среды, необходимо соблюдать строжайшую антисептику. Для этого используют стерильный материал: а) ватные тампоны для взятия материала из раны, со слизистых оболочек (глаз, зева, носа); б) проволочную петлю для взятия материала из влагалища, анального отверстия; в) шприц для взятия крови, гноя; г) стерильную посуду для непосредственного сбора в нее мочи, мокроты, испражнений.
Транспортировку полученного материала следует проводить в максимально короткие сроки (2-3 часа) в специальных биксах или пеналах.
Направление прилагают к клиническому образцу в качестве сопроводительного документа. Оно содержит основные сведения, необходимые для проведения микробиологического исследования:
- фамилия, имя, отчество, возраст пациента;
- предполагаемый диагноз заболевания;
- предшествующая антимикробная терапия;
- характер материала;
- дата и время взятия материала;
- цель исследования;
- название лечебного учреждения, номер отделения, палаты;
- подпись лечащего врача.
Бактериологический метод осуществляется в два этапа:
Выделение чистой культуры возбудителя (1-2 суток).
Идентификация чистой культуры (1-3 суток).
На первом этапе проводится посев исследуемого материала на плотную или жидкую питательную среду, оценка культуральных свойств (характеризуются питательными потребностями, условиями и типом роста бактерий на плотных и жидких питательных средах; они устанавливаются по характеру роста на питательной среде), отбор подозрительных колоний и их отсев на скошенный агар. Этап идентификации включает обязательное изучение морфологии, биохимических свойств и антигенной структуры выделенной чистой культуры, а также проведение дополнительных исследований по определению антибиотикочувствительности, фагочувствительности, фаготипирования, изучение патогенности и персистентных свойств.
к работе № 2
Микроорганизмам, как всему живому, присущи три основные физиологические функции: питание, дыхание и размножение.
Питание необходимо для синтеза в клетке всех органических структур, оно осуществляется с поглощением энергии. Основным источником энергии являются окислительно-восстановительные процессы (дыхание). Для питания нужны органогены: О, С, Н, N, F, K, Mg, Ca; микроэлементы: Na, Zn, Cu, Cl, Mn, Mo, Co, Ni, W; факторы роста: витамины, аминокислоты, пуриновые и пиримидиновые основания, липиды. Кислород и водород микробы берут из воздуха и воды.
По типу питания микробы делятся на аутотрофов и гетеротрофов. Аутотрофы усваивают азот и углерод из неорганических веществ (углекислый газ и др.), а гетеротрофы - из сложных органических соединений (аминокислоты, моносахара и др.), синтезированных ранее другими живыми организмами. Гетеротрофы в свою очередь делятся на сапрофитов и паразитов. Сапрофиты нуждаются в органических соединениях мертвого субстрата, а паразиты получают питательные вещества в организме-хозяине. Паразиты могут быть облигатными (внутриклеточными) и факультативными. Облигатные внутриклеточные паразиты (хламидии) лишены способности жить и размножаться вне клеток хозяина, т.к. зависят от их метаболизма. Факультативные паразиты (гонококки, стафилококки и др.) могут питаться как в организме, так и вне его, поскольку обеспечены автономными ферментными системами при образовании веществ и энергии.
Культивирование микробов в лабораторных условиях
Для культивирования бактерий применяют питательные среды. Они могут быть естественными (молоко, морковь, картофель), искусственными (готовят специально). Питательные среды могут быть жидкие и плотные. В зависимости от свойств микробов используют разные среды. Их делят на 4 группы:
1) простые (универсальные) - на них растут только неприхотливые (не требовательные к питательному субстрату) микробы (стафилококки, кишечная палочка). Это МПА и МПБ - мясопептонный агар и бульон.
2) сложные (специальные) - на них растут прихотливые микробы (стрептококки, пневмококки). Они готовятся из простых сред путем их обогащения:
- сахарный агар,
- кровяной агар.
3) элективные (избирательные) - на них растет только один род микробов, а другие – нет. Например: 1% щелочная пептонная вода - для холерного вибриона, сахарный агар - для стрептококка, сывороточный агар - для дифтерийной палочки и т.д.
4) дифференциально-диагностические - для отличия одного вида от другого по ферментативной активности (среда Эндо, Гисса).
Требования к питательным средам:
- питательность
- изотоничность
- оптимальная реакция среды (рН 7.2 – 7.4)
- влажность
- стерильность
- буферность
- унифицированность