3.3 Качественное обнаружение кумаринов в полученных извлечениях

К 3-5 мл спиртовых извлечений из листьев пузыреплодника калинолистного добавляли 10 капель раствора калия едкого в метиловом спирте 10% и нагревали в течение 5 минут на водяной бане. Появлялась желтая окраска – это доказывает наличие кумаринов в полученном извлечении (Рис. 6).

Рис. 6.Качественная реакция с гидроксидом калия

После прибавления 0,1 мл диазореактива раствор окрашивался в желто-оранжевый цвет (Рис. 7).

Рис. 7. Реакция образования азокрасителя

К 3-5 мл спиртового извлечения из травы клевера лугового добавляли 10 капель раствора калия едкого в метиловом спирте 10% и нагревали в течение 5 минут на водяной бане. Также как и в предыдущем случае появлялась желтая окраска. Реакция образования азокрасителя дала положительный результат – появление желто-оранжевой окраски.

Обнаружение кумаринов хроматографей в тонком слое сорбента

Хроматографирование проводили восходящим способом на пластинках «Силуфол» (15х15).

Хлороформные извлечения наносили с помощью микропипетки на линию старта в количестве 0,1мл. Рядом наносили 0,05% этанольные растворы стандартов герниарина, кумарина, скополетина, эскулина, эскулетина, умбиллиферона. В качестве подвижной фазы использовали систему растворителей этилацетат - бензол (1:2). Камеру насыщали в течение 40 минут. Пластинки с нанесенными пробами помещали в хроматографические камеры. После прохождения фронта растворителя, примерно 13 см, пластинки высушивали на воздухе до удаления запаха растворителей. В качестве проявителя использовали 10% спиртовой раствор едкого натра. Кумарины на хроматограммах обнаруживали до и после проявления в УФ – свете, а так же по появлению ярких пятен (от кирпично-красного до сине-фиолетового) после обработки хроматограмм свежеприготовленным диазореактивом. Отмечали цвет и интенсивность окраски пятен, для каждого из пятен вычисляли Rf.

В результате исследования установлено, что листья пузыреплодника калинолистного содержат 5 кумаринов, из них 3 идентифицированы как эскулин, эскулетин, герниарин (Рис. 8, табл. 1).

Rf
0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1
	1 K Э1 Э К Г

Рис. 8. Схема тонкослойной хроматограммы кумаринов хлороформного извлечения листьев пузыреплодника калинолистного в системе этилацетат – бензол (1:2)

Обозначения:

1–хлороформное извлечение листьев пузыреплодника калинолистного;

К – 0,05% этанольный раствор кумарина;

С – 0,05% этанольный раствор скополомина;

Э₁ – 0,05% этанольный раствор эскулина;

Э – 0,05% этанольный раствор эскулетина;

У – 0,05% этанольный раствор умбеллиферона;

Г – 0,05% этанольный раствор герниарина.

Таблица 1 Результаты хроматографического определения кумаринов в листьях пузыреплодника калинолистного

Rf в системе1	Цвет пятна в УФ-свете	После проявления азокрасителем	Кумарины стандарты	Исследуемое извлечение
0,24	Голубой	Оранжевый	Скополетин	-
0,35	Голубой	Оранжевый	---------	+
0,41	Голубой	Желтый	Умбелиферон	-
0,49	Голубой	Оранжевый	Эскулин	+
0,56	Фиолетовый	Оранжевый	Герниарин	+
0,70	Гол.-зеленый	Оранжевый	Эскулетин	+
0,81	Фиолетовый	Кирпично-красный	---------	+
0,84	-------	Кирпично-красный	Кумарин	-